与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQ ID NOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。本发明专利技术还公开了一种核酸，其编码所述的多肽，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQ ID NOs：11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。所述的多肽或所述的核酸在与耐药宫颈癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合中的应用。本发明专利技术提供的上述多肽，对肿瘤细胞的亲和力强，可作为靶向特定肿瘤细胞的靶向头基；且，该多条多肽与肿瘤细胞结合会抑制细胞膜的某些功能，可能会抑制肿瘤细胞的生长或者与化疗药物有协同作用，具有治疗效果，可用于肿瘤的靶向治疗。

Polypeptides bound to the surface of cell membranes of drug-resistant cervical cancer cell lines Hela

The present invention discloses a polypeptide molecule on the surface of Hela cell membrane with a cervical cancer and drug resistant cancer cell lines, providing functional protein tags for the polypeptide molecule on the surface of Hela cell membrane resistance of cervical cancer cell lines, the peptide selected from an amino acid sequence: SEQ ID NOs:1, 2, 3. 4, 5, 6, 7, 8, 9 and 10. The invention also discloses a nucleic acid encoding the polypeptides, the nucleic acid selected from the group consisting of a base sequence in SEQ ID NOs:11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 and 20. The application of said polypeptide or said nucleic acid in molecular surface of cell membrane of drug-resistant cervical cancer cell line Hela. The peptide provided by the invention of tumor cell affinity, can be used as targeting specific tumor cell targeting ligand; and, the polypeptide with tumor cells in combination with some function will inhibit the cell membrane, may inhibit the growth of tumor cells or with chemotherapy drugs have a synergistic effect, with treatment effect, can be for tumor targeting therapy.

【技术实现步骤摘要】
与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽
本专利技术属于生物
，涉及一种与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽。
技术介绍
噬菌体展示技术(phagedisplaytechnology)是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。肿瘤细胞的靶向治疗一直是研究的热点。Hela细胞，是一种人工培养，具有无限增殖能力的细胞，诞生至2016年已经整整65年了。在医学界，Hela细胞被广泛应用于肿瘤研究、生物实验或者细胞培养，已经成为医学研究中非常重要的工具。这种细胞是现有来自人体的组织培养中最早的分离细胞，在世界各地的研究室继续培养，广泛应用于各种研究。它们在体外容易增殖形成上皮性的细胞排列。因此，探索能与Hela细胞特异性结合的多肽分子作为蛋白标签对于探索肿瘤细胞的靶向治疗具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽。为此，本专利技术提供的技术方案为：与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。优选的是，所述的与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽中，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：1、2、3、4和5。一种核酸，其编码所述多肽，其中，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQIDNOs：11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。优选的是，所述的核酸，其中，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQIDNOs：11、12、13、14和15。所述的多肽或所述的核酸在与耐药宫颈癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合和肿瘤靶向治疗中的应用。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术提供的上述多肽，对肿瘤细胞的亲和力强，可作为靶向特定肿瘤细胞的靶向头基；而且，该多条多肽与肿瘤细胞结合会抑制细胞膜的某些功能，可能会抑制肿瘤细胞的生长或者与化疗药物有协同作用，具有治疗效果，可用于肿瘤的靶向治疗。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本专利技术其中一个实施例中第一轮淘选中噬菌体滴度测定时的噬菌体培养的照相；图2为本专利技术其中一个实施例中第二轮淘选中噬菌体滴度测定时的噬菌体培养的照相；图3为本专利技术其中一个实施例中第三轮淘选中噬菌体滴度测定时的噬菌体培养的照相；图4为Elisa检测第三轮筛选噬菌体克隆与HeLa耐药细胞的亲和力检测结果(OD值)；图5为Elisa检测第三轮筛选噬菌体克隆与HeLa耐药细胞的相对亲和力(P/N值)；图6为DNA提取结果检测示意图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。如图1～6所示，本专利技术提供与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，所述的与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，其中，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：1、2、3、4和5。本专利技术还提供一种核酸，其编码所述多肽，其中，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQIDNOs：11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。在本专利技术的其中一个实施例中，作为优选，所述的核酸，其中，该核酸选自如下碱基序列中的一种：SEQIDNOs：11、12、13、14和15。所述的多肽或所述的核酸在与耐药宫颈癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合和肿瘤靶向治疗中的应用。为使本领域技术人员更清楚地了解本专利技术的技术方案，本专利技术还提供如下实施例：实施例一、主要试剂及仪器(1)人宫颈上皮细胞(天津赛尔生物技术有限公司)(2)HeLa耐药细胞株(新疆军区总医院药剂科实验室构建)(3)噬菌体随机七肽库(Ph.D-7TMphagedisplaypeptidelibrary)(Biolabs，英国)(4)PRIM1640培养基(Gibco，美国)(5)优级胎牛血清(Gibco，美国)(6)胰蛋白酶(Amresco，美国)(7)二甲基亚砜(DMSO)(Sigma，美国公司)(8)胰蛋白胨、酵母浸粉(OXOID，英国)(9)琼脂糖、琼脂粉(广东环凯微生物科技有限公司)(10)PEG8000、Tris、BSA(北京鼎国生物有限公司)(11)IPTG、Xgal(北京鼎国生物有限公司)(12)12孔培养板，T25培养瓶(OrangeScientific,比利时)(13)四环素(北京鼎国生物有限公司)(14)Tween20(天津市福晨化学试剂厂)(15)多聚甲醛(北京鼎国生物有限公司)(16)HRP/anti-M13antibody(AmershamBiosciences，美国)(17)NaI(北京鼎国生物有限公司)(18)EDTA(北京鼎国生物有限公司)(19)NaCl(北京鼎国生物有限公司)(20)NaHCO3(北京鼎国生物有限公司)(21)NaN3(北京鼎国生物有限公司)(22)LB培养基：每升含：10gBacto-Tryptone，5gyeastextract,5gNaCl。高压灭菌，室温贮存。(23)LB/IPTG/Xgal平板：LB培养基+15g/L琼脂粉。高压灭菌，冷却至低于70℃时，加入1mlIPTG/Xgal，混匀倒平板。平板4℃避光贮存。(24)顶层琼脂：每升含：10gBacto-Tryptone，5gyeastextract,5gNaCl,7g琼脂粉。高压灭菌，分成50ml等份。固体培养基室温贮存，用时微波炉融化。(25)四环素贮液：以20mg/ml的浓度溶于乙醇:水(1:1)中。-20℃避光贮存。用前摇匀。(26)LB-Tet平板：LB培养基+15g/L琼脂粉。高压灭菌，冷却至低于70℃时，加入1ml四环素贮液，混匀倒平板。平板4℃避光贮存，如果平板显棕色或黑色请勿用。(27)封阻缓冲液：0.1MNaHCO3(pH8.6),5mg/mlBSA,0.02％NaN3。过滤除菌，4℃贮存。(28)TBS:50mMTris-HCl(pH7.5),150mMNaCl。高压灭菌，室温贮存。(29)PEG/NaCl:20％(w/v)PEG-8000,2.5MNaCl。高压灭菌，室温贮存。(30)碘化物缓冲液：10mMTris-HCl(pH8.0),1mMEDTA,4MNaI。室温避光贮存。(31)IPTG/Xgal配方：将1.25gIPTG(isopropylβ–D-thiogalactosid本文档来自技高网...

【技术保护点】
与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQ ID NOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。

【技术特征摘要】
1.与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，该多肽为耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子提供蛋白标签的功能性，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。2.如权利要求1所述的与耐药宫颈癌癌细胞系Hela细胞膜表面分子结合的多肽，其中，该多肽选自如下氨基酸序列中的一种：SEQIDNOs：2、3、4、5和8。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：尹东锋，王瑞，王晓锋，曾平，刘璟，李倩，邓成程，
申请(专利权)人：新疆军区总医院，
类型：发明
国别省市：新疆,65