一种车前抗氧化作用成分的提取方法技术

本发明专利技术提出一种车前抗氧化作用成分的提取方法，包括步骤：1)车前粉碎，按照料液比1：5～30加入乙醇溶液进行提取；2)对步骤1)得到的混合物进行固液分离，取清液，去除溶剂。本发明专利技术提出的车前抗氧化物提取工艺，较常规浸泡法相比节省溶剂和提取时间，提取效率更高；本提取工艺获得的车前提取物具有良好的抗氧化活性。

Method for extracting antioxidant components in plantain

The invention provides a method for extracting antioxidant, plantain composition comprises the following steps: 1) the car smashed, in accordance with the ratio of material to liquid 1:5 ~ 30 ethanol solution extraction; 2) to step 1) get a mixture of solid-liquid separation, the supernatant, the removal of the solvent. Compared with the conventional soaking method, the extraction process of the anti oxidant from the front of the invention saves solvent and extraction time, and has higher extraction efficiency, and the extract obtained from the prior art has good antioxidant activity.

【技术实现步骤摘要】
一种车前抗氧化作用成分的提取方法
本专利技术属于农业领域，具体涉及一种车前草科植物的提取方法。
技术介绍
畜禽在养殖过程中由于遗传选择、饲料原料、环境等原因，极易受到氧化应激，影响畜禽生长。合成抗氧化剂因其成本低、活性好，在饲料生产、食品等方面应用广泛，但同时合成抗氧化剂也存在着健康问题、致癌风险、产品残留及合成过程中的副反应污染问题。天然抗氧化剂因其具有使用安全和潜在的功效等活性、特点，有利于畜禽健康养殖，因其天然来源更为消费者所接受。车前草，又名平车前、车轮草等，为二年生或多年生草本，在我国大部分地区有分布，具有适应性强、耐寒、耐旱等特征。车前属植物在世界范围内大约有275种，作为传统药物在世界范围内有着不同的用途，其中20种广泛分布在我国境内，资源丰富。大车前、车前、平车前全株及其籽自古以来在我国就一直作为食品和传统医药使用。车前为车前或平车前的全草干燥制成，含有黄酮类、多糖类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类、三萜类等多类化学活性成分。车前作为传统医药长期以来用于促进伤口愈合，用于皮肤及其他感染、消化和呼吸道紊乱的治疗，可改善循环、繁殖，缓解疼痛及发热。已有肉鸡饲养的试验表明，车前对肉鸡的氧化还原状态表现出良好的改善效果，但在饲料中直接添加车前，则因其有效成分低导致添加剂量过高，限制了车前的推广应用。
技术实现思路
针对本领域的不足之处，本专利技术的目的是提供一种车前抗氧化作用成分的提取方法。本专利技术的第二个目的是提出所述提取方法得到的产物。实现本专利技术上述目的的技术方案为：一种车前抗氧化作用成分的提取方法，包括步骤：1)车前粉碎，按照料液比1：5～30(克/毫升)加入乙醇溶液进行提取，提取的方式为超声提取；2)对步骤1)得到的混合物进行固液分离，取清液，去除溶剂。其中，车前为车前或平车前草干燥的全草。其中，步骤1)中，车前粉碎的粒度为20～200目；所述乙醇溶液的质量浓度为50～85％。车前粉碎的粒度优选为120～160目。其中，步骤1)中，一次超声提取的时间为20～40min，共进行2～5次，优选超声3次。其中，步骤2)去除溶剂的操作在10～40℃温度下进行，去除溶剂的方式为旋转蒸发、自然干燥、或真空干燥中的一种。进一步地，所述的提取物方法，还包括对步骤2)所得提取车前提取物的分离步骤：采用硅藻土固相萃取、硅胶层析、凝胶和HPLC色谱分离方法中的一种或多种从车前提取物中分离出黄酮类化合物和酚酸类化合物；所述硅藻土固相萃取的溶剂按顺序为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸乙酯和甲醇混合溶剂、甲醇顺序，进行连续固液萃取。其中，所述分离步骤中，乙酸乙酯和甲醇混合溶剂按体积比分别为10:1、5:1、2:1，按乙酸乙酯体积递减的顺序连续固液萃取，取乙酸乙酯部位和乙酸乙酯甲醇混合溶剂体积比10:1部位的浸膏；乙酸乙酯部位的浸膏经硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇体积比100～5:1梯度洗脱，得黄酮类化合物；乙酸乙酯和甲醇混合溶剂体积比10:1部位的浸膏经硅胶柱层析，以二氯甲烷：甲醇体积比20～2：1梯度洗脱，得酚酸类化合物。更进一步地，所述乙酸乙酯部位的浸膏经硅胶柱层析，其中二氯甲烷：甲醇体积比25～35:1洗脱的流份经凝胶柱层析后，通过高效液相色谱(HPLC)，用甲醇水体系等度洗脱，得到单体甘草素(P1)；其中二氯甲烷：甲醇体积比18～25:1洗脱的流份，经凝胶柱层析得到芹菜素单体(P2)。其中HPLC等度洗脱的流动相可以为55％甲醇：水(即甲醇的体积分数为55％)。所述乙酸乙酯和甲醇混合溶剂体积比10:1部分的浸膏经硅胶柱层析，取二氯甲烷：甲醇体积比10:1洗脱的流份重结晶得七叶内酯(P6)，取二氯甲烷：甲醇体积比2:1洗脱的流份；经ODS柱洗脱，再经HPLC分离得到4，5-二咖啡奎宁酸甲酯(P5)。优选地，分离4，5-二咖啡奎宁酸甲酯过程中，所述ODS柱按30％-100％甲醇：水梯度洗脱；所述HPLC的流动相为40％-90％甲醇：水，流速为18～20ml/min。本专利技术所述提取方法获得的产物。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术提出的车前抗氧化物提取工艺，较常规浸泡法相比节省溶剂和提取时间，提取效率更高。(2)本提取工艺获得的车前提取物具有良好的抗氧化活性。附图说明图1为料液比和去除自由基能力的关系图。图2为乙醇浓度和去除自由基能力的关系图。图3为提取次数和去除自由基能力的关系图。图4为提取时间和去除自由基能力的关系图。图5为粉碎粒度和去除自由基能力的关系图。图6为P1甘草素的H-NMR图谱。图7为P1甘草素的C-NMR图谱。图8为P2芹菜素的H-NMR图谱。图9为P54，5-二咖啡奎宁酸甲酯的H-NMR图谱。图10为P6七叶内酯的H-NMR图谱。图11为4，5-二咖啡奎宁酸甲酯的HPLC分离流出曲线。图12为甘草素的HPLC分离流出曲线。图13为分离P1、P2化合物的流程图。图14为分离P5、P6化合物的流程图。具体实施方式现以以下实施例来说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例中使用的手段，如无特别说明，均使用本领域常规的手段。实施例中车前为车前或平车前的全草干燥制成。实施例1：车前抗氧化物质提取影响因素确定选取料液比、乙醇浓度、粉碎粒度、提取次数、提取时间、旋转蒸发温度5个因素进行单因素试验，以确定最佳提取条件，试验方法如下：1.1料液比对提取物清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基的影响：将车前草粉碎过20目筛，精确称取5.0g样品，按照不同的料液比(1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30，单位为g/mL)分别加入80％(质量浓度)的乙醇水溶液，超声40kHz提取30min。过滤样品溶液，旋转蒸发除去乙醇(<40℃)，减压浓缩后定容并测定其清除DPPH自由基(图1左图)和邻苯三酚自由基(图1右图)的能力，重复三个平行。结果见图1。以5.0g车前原料计，提取物对32mg/ml(处理前的初始含量，下同)DPPH自由基的去除率可达29％，对60mmol/l…邻苯三酚自由基的清除率可达14％。1.2乙醇浓度对提取物清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基的影响：将车前草粉碎过20目，精确称取2.0g样品，分别加入50ml70％、80％、90％、100％的乙醇，超声提取30min。4000转离心15min，取出上清液，旋转蒸发除去乙醇(<40℃)，减压浓度后定容并测定其清除DPPH自由基(图2左图)和邻苯三酚自由基(图2右图)的能力，重复三个平行。结果见图2。以2.0g车前原料计，提取物对32mg/mlDPPH自由基的去除率可达45％，对60mmol/l邻苯三酚自由基的清除率可达30％。1.3提取次数对提取物清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基的影响：将车前草粉碎过20目，精确称取2.0g样品，加入50ml80％的乙醇，分别超声提取1、2、3、4次。4000转离心15min，取出上清液，旋转蒸发除去乙醇(<40℃)，减压浓度后定容并测定其清除DPPH自由基和邻苯三酚自由基的能力，重复三个平行。结果见图3。以2.0g车前原料计，提取物对32mg/mlDPPH自由基的去除率可达33％，对60mmol/l邻苯三酚自由基的清除率可达22％。1.4提取时间对提取物清除DPPH自由基和超氧阴离子自由本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种车前抗氧化作用成分的提取方法，其特征在于，包括步骤：1)车前粉碎，按照料液比1：5～30(克/毫升)加入乙醇溶液进行提取，提取的方式为超声提取；2)对步骤1)得到的混合物进行固液分离，取清液，去除溶剂。

【技术特征摘要】
1.一种车前抗氧化作用成分的提取方法，其特征在于，包括步骤：1)车前粉碎，按照料液比1：5～30(克/毫升)加入乙醇溶液进行提取，提取的方式为超声提取；2)对步骤1)得到的混合物进行固液分离，取清液，去除溶剂。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，车前粉碎的粒度为20～200目；所述乙醇溶液的质量浓度为50～85％。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，一次超声提取的时间为20～40min，共进行2～5次。4.据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2)去除溶剂的操作在10～40℃温度下进行，去除溶剂的方式为旋转蒸发、自然干燥、或真空干燥中的一种。5.根据权利要求1～4任一项所述的提取物方法，其特征在于，还包括对步骤2)所得提取车前提取物的分离步骤：采用硅藻土固相萃取、硅胶层析、凝胶和HPLC色谱分离方法中的一种或多种从车前提取物中分离出黄酮类化合物和酚酸类化合物；所述硅藻土固相萃取的溶剂按顺序为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸乙酯和甲醇混合溶剂、甲醇顺序，进行连续固液萃取。6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述分离步骤中，乙酸乙酯和甲醇混合溶剂按体积比分别为10:1、5:1、2:1，按乙酸乙酯体积递减的顺序连续固液萃取...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳坤，董元洋，许彦飞，呙于明，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11