车叶草苷在制备防治神经退行性疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了车叶草苷在制备防治神经退行性疾病药物中的应用，属于中药应用技术领域；本发明专利技术采用车叶草苷进行酶、细胞、果蝇药效试验，结果显示车叶草苷能够增强293T细胞端粒酶活性，促进BJ成纤维细胞的增殖，抑制果蝇氧化应激效应；车叶草苷存在于多种野菜和中药材中，具有良好的安全性，可以用于制备防治衰老及神经退行性疾病的药物和膳食补充剂。

Asperuloside applications in preparation of drugs for prevention and treatment of neurodegenerative diseases.

The present invention provides asperuloside applications in preparation of drugs for prevention and treatment of neurodegenerative diseases, which belongs to the technical field of traditional Chinese medicine application; the invention adopts asperuloside enzyme, cell and Drosophila effect test, results showed that asperuloside can enhance the telomerase activity of 293T cells, BJ promote fibroblast proliferation, inhibition of oxidative stress in Drosophila; asperuloside exist in a variety of wild herbs and Chinese herbal medicine, has good safety, can be used for drugs and dietary supplements for preventing and curing aging and neurodegenerative diseases.

【技术实现步骤摘要】
车叶草苷在制备防治神经退行性疾病药物中的应用
本专利技术属于防治神经退行性疾病领域，尤其涉及一种车叶草苷在防治衰老及阿尔茨海默病和帕金森病方面的应用。
技术介绍
神经退行性疾病是大脑和脊髓的神经元丧失的疾病状态，如阿尔茨海默病（Alzheimer’sDisease，AD），帕金森病（Parkinson’sDisease，PD），亨廷顿症（HuntingtonDisease，HD）等（RMedzhitov.Inflammation2010:newadventuresofanoldflame.Cell,2010,140:771-776）。针对神经退行性疾病的手段包括：抗神经元凋亡（如Caspase-3蛋白酶抑制剂、PPARs激动剂），神经递质调节，抗神经炎症，抗氧化，神经细胞再生等。衰老是人类生命过程中的必然规律，也会导致脑部的神经元的数目逐渐减少，甚至被认为是AD、PD等神经系统退行性改变的最初级阶段。因此，早期介入，通过抗衰老也是防治神经退行性疾病的有效手段（Collier，etal.,AgeingasaprimaryriskfactorforParkinson’sdisease:evidencefromstudiesofnon-humanprimates.NatureReviewsNeuroscience.2011,12:359-366）。端粒酶（Telomerase）是端粒复制所必须的一种特殊的DNA聚合酶，若激活端粒酶，就可以增加细胞分裂次数，从而延长寿命。在阿尔茨海默（Alzheimer’sDisease，AD）病人及实验模型中发现，端粒缩短是引发淀粉样蛋白（Aβ）聚集和Tau蛋白过度磷酸化以及认知功能障碍的重要因素，通过激活端粒酶手段，延长端粒长度或延缓端粒缩短的速度，有可能对抗衰老和防治AD具有重要意义（Jaskelioffetal.,Telomerasereactivationreversestissuedegenerationinagedtelomerase-deficientmice,Nature,2010,469,102–106;Caietal.,TelomereShorteningandAlzheimer’sDisease,NeuromolMed,2013,15:25–48）。一些天然组分在神经细胞再生和抗衰老方面具有良好的生物活性，如环烯醚萜苷具有良好的神经保护作用（董天娇等.天然环烯醚萜化合物研究进展，中草药，2011，42：185-194.）。地黄中的梓醇具有降血糖、抗衰老等多种药理作用，在脑缺血损伤、老年痴呆症、帕金森病以及衰老神经疾病等方面具有良好中的作用，其机制包括抗氧化作用和提高神经可塑性等方面（蔡其燕等.梓醇在神经系统作用的研究进展，现代生物医学进展，2010，10：3589-3591.）。因此，环烯醚萜类成分成为筛选抗衰老和抗神经退行性疾病的重要来源。在前期的研究中，发现从田间常见杂草——拉拉藤属植物猪殃殃（GaliumaparineL.var.tenerumGren.et(Godr.)Rebb.）中分离得到小分子化合物车叶草苷（Asperuloside），且资源丰富，制备成本较低。该化合物也见于蔓生拉拉藤（赵春超，凤眼草和蓬子菜化学成分及生物活性研究，沈阳药科大学博士论文，2007）和白花蛇舌草（杨亚滨等.白花蛇舌草化学成分的研究，云南大学学报(自然科学版)，2007，29(2):187-189）。拉拉藤属植物富含环烯醚萜类成分，这些萜类化合物具有良好的抗肿瘤、抗炎、抗菌等活性(蔡小梅，猪殃殃化学成分的研究,贵州大学硕士论文，2009)。拉拉藤中的小分子化合物京尼平苷是一种新的GLP-1受体激动剂，能够提高细胞的抗氧化能力。京尼平苷及苷元京尼平(genipin)明显提高AD模型动物的学习记忆能力，改善认知功能状态，认为其在对抗Aβ毒性作用、抗氧化应激、抗内质网应激及抗炎等多方面具有良好效果，并能促进神经生长，修复受损神经元(王磊等.中国药理学通报，2012，28(5)：604-607)。鉴于环烯醚萜类小分子化合物在抗神经退行性疾病中的良好应用前景，研究了拉拉藤属植物猪殃殃的抗衰老活性，发现从该植物中分离得到的车叶草苷具有较好的激活端粒酶作用及抗衰老活性。本专利技术涉及的是天然小分子化合物车叶草苷（附图1）在制备端粒酶激活、抗衰老和抗神经退行性疾病药物或膳食补充剂方面的用途。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种车叶草苷在制备防治神经退行性疾病药物中的应用，旨在充分利用毒副作用较小的植物资源，发现具有基于端粒酶的防治阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性疾病的药物和膳食补充剂。通过对车叶草苷的药理活性研究，发现车叶草苷具有良好的激活端粒酶作用、促进衰老型BJ成纤维细胞的增殖及延长衰老型果蝇寿命等生物活性。在BJ成纤维细胞模型中，车叶草苷对HEK293T细胞的端粒酶具有中等强度的激活作用；明显地促进BJ细胞的增殖，并且对衰老期的BJ细胞中的端粒酶具有温和的促进作用，显示出延长细胞寿命、抗衰老、抗AD等神经疾病的潜力；果蝇实验中车叶草苷能显著延长果蝇寿命，增强动物体内过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低脂质过氧化物的降解产物丙二醛（MDA）的含量，抑制体内氧化应激（ROS）效应。因此车叶草苷用于制备防治神经退行性疾病具有良好的治疗潜力。本专利技术涉及的药物车叶草苷来源丰富，生产成本低，水溶性好，安全无毒，具有适合制备防治神经退行性疾病的药物和膳食补充剂的特点。同时，其作用机制涉及到激活端粒酶、端粒酶相关的氧化应激及神经炎症等机制。附图说明：图1为车叶草苷的化学结构。图2为车叶草苷对HEK293T细胞端粒酶的影响图；其中图A:凝胶结果图；图B:端粒酶相对活性统计图。图3为车叶草苷对BJ细胞增殖的作用图；其中，图A:27PD的BJ细胞；B:34PD的BJ细胞。图4为车叶草苷对衰老BJ细胞端粒酶的作用图；其中图A:凝胶结果图；图B:端粒酶相对活性统计图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。上车叶草苷购于海一林生物科技有限公司；HEK293T细胞和BJ成纤维细胞购自美国ATCC；TRAPEZE®端粒酶试剂盒购自美国EMDmillipore；黑腹果蝇购自第二军医大学；CAT、SOD和MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。实施例1：采用TRAP实验评价车叶草苷对HEK293T细胞端粒酶活性的影响：HEK293T细胞接种于12孔板中，置于37℃，5%CO2孵箱培养48h，分别加入车叶草苷，其终浓度分别为0.01，0.1，1.0，10μM，空白组为0.1%DMSO，复孔。继续孵育48h后收集细胞。离心除去培养液，加入PBS洗涤，Chaps消化，离心，取上清液，参照TRAPEZE®端粒酶试剂盒操作说明，测定车叶草苷对端粒酶的活性（图2A）。结果：车叶草苷对端粒酶具有明显的激活作用，在0.01，0.1，1.0，10μM浓度下，端粒酶活性分别增加149.6%，156.9%，156.9%和220.4%（图2B）。结果表明车叶草苷具有基本文档来自技高网...

【技术保护点】
车叶草苷在制备治疗或预防基于端粒酶以及与端粒酶相关的氧化应激及神经炎症机制引起的疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.车叶草苷在制备治疗或预防基于端粒酶以及与端粒酶相关的氧化应激及神经炎症机制引起的疾病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为在制备抗衰老药物中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为作为膳食补充剂中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤建，洪庆，陈健，杨守士，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32