蓝莓中不可萃取多酚的提取方法技术

本发明专利技术涉及蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，属于植物多酚提取技术领域。该提取方法包括以下步骤，制备蓝莓渣、制备蓝莓渣粉末、酸溶液浸泡、碱溶液浸泡、酶解、离心、萃取、收集提取物。本实发明专利技术所述的蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，本发明专利技术所提供的提取方法，操作步骤简单，可以在同一容器中进行，无需反复收集提取物；采用弱浓度酸碱对物料进行处理，并利用乙酸乙酯和乙醇混合液萃取，方法温和，可以最大限度的保留不可萃取多酚的生物活性，并且提高了提取率，对环境污染十分小。

【技术实现步骤摘要】
蓝莓中不可萃取多酚的提取方法
本专利技术属于植物多酚提取
，具体涉及蓝莓中不可萃取多酚的提取方法。
技术介绍
蓝莓，英文名称：Blueberry，意为蓝色浆果，属杜鹃花科，越橘属植物，果实呈深蓝色，披白霜，近圆形，果肉细腻，果昧酸甜。蓝莓果实中含有丰富的营养成分，具有防止脑神经老化、保护视力、强心、抗癌、软化血管、增强人机体免疫等功能，营养成分高，被誉为“黄金浆果”，是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一。蓝莓果实中除了常规的糖、酸和维生素C外，富含维生素E、维生素A、维生素B、超氧化物歧化酶(SOD)、熊果苷、蛋白质、花青苷、食用纤维以及丰富的钾、铁、锌、钙等矿物质元素，维生素都高于其他水果，花青素、微量元素也很高，属高氨基酸，高铜，高锌，高铁的果品。蓝莓果实有极强的药用价值及营养保健功能，蓝莓能有效降低胆固醇，防止动脉粥样硬化，促进心血管健康；有增强心脏功能、预防癌症和心脏病的功效，能防止脑神经衰老、增强脑力；可以强化视力，减轻眼球疲劳。此外，蓝莓还可以治疗一般的伤风感冒、咽喉疼痛以及腹泻等症。此外，研究证明:蓝莓具有抗突变、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等作用，这些作用主要是由高含量的多酚所介导的。1981年，Haslam首次提出植物多酚这一术语，它将多酚分为单宁及其相关化合物(如单宁的前体化合物和聚合化合物)和聚黄烷醇类(含缩合单宁和相关化合物)两大基本类型。多酚是植物体内复杂的酚类次生代谢产物，具有多元酚结构，主要存在于植物的皮、根、叶、壳及果肉中，具有抗氧化、清除自由基等功能。有关多酚的分类方法有很多种，类黄酮、花青素、酚酸等都属于多酚。近几年，国外学者根据多酚结合方式和萃取方法的不同，将其分为可萃取多酚(extractablepolyphenols，EPP)和不可萃取多酚(non-extractablepolyphenols，NEPP)，所谓可萃取多酚主要是指通过简单的有机溶剂萃取或水就可以获得的处于游离状态的多酚，不可萃取多酚主要是指结合于细胞壁上的一些水合单宁酸和原花青素，需通过化学或者酶处理等方法，打破多酚物质与细胞壁结合的化学键，才将其分离出来的部分。目前对植物多酚的研究主要集中在EPP，而很少关注NEPP。如果考虑NEPP，水果中有益多酚如原花青素、鞣花酸、儿茶酚含量远远超出人们的估计。目前这些NEPP一直不被列为食物的营养组成，实际上这些NEPP是食物中具有生物活性的成分，可被结肠中细菌发酵，产生的代谢产物对人体十分有益。蓝莓中含有较高的NEPP，由于萃取过程的限制，不可提取多酚被研究人员忽视；并且蓝莓中的NEPP和膳食纤维蛋白缀合，使其提取难度增大。目前关于提取蓝莓中NEPP大多采用物理辅助方法进行提取，提取方法处理步骤较多，提取效率较低，提取出的NEPP活性较低。有鉴于此，有必要提出一种蓝莓中不可萃取多酚的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种方法温和、操作步骤简单、提取率高、提取出的不可萃取多酚活性高、对环境污染小的提取蓝莓中不可萃取多酚的方法。为了实现上述目的，所采用的技术方案是：蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，所述方法包括以下步骤：(1)制备蓝莓渣：收集蓝莓榨汁后的残渣，并在常温下干燥，得蓝莓渣；(2)制备蓝莓渣粉末：粉碎蓝莓渣，得蓝莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：将蓝莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100-120ml，浸泡11.5-12.5小时，浸泡温度为3-5℃，得酸性浸泡液；(4)碱溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入碱溶液，至浸泡液中氢氧根离子浓度为0.45-0.55mol/L，浸泡2.5-3.5小时，浸泡温度为3-5℃，得碱性浸泡液；(5)酶解：向碱性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值为3.7-3.8；再加入纤维素酶、果胶酶，至维素酶浓度为2-3U/ml，果胶酶浓度为50-55U/ml，进行酶解处理，酶解11.5-12.5小时，酶解温度为38-42℃，得酶解溶液；(6)离心：将酶解溶液离心10-20min，转速为7000-9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取剂萃取上清液，静置分层后，上层为油相，下层为水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。进一步的，所述步骤(2)中蓝莓渣粉末过80-120目的筛子；所述步骤(3)中酸溶液是氢离子浓度为0.5-0.6mol/L的酸溶液；所述步骤(5)中滴加的酸溶液是氢离子浓度为3-5mol/L的酸溶液。进一步优选的，所述步骤(3)中酸溶液为盐酸溶液；所述步骤(4)中加入的碱溶液为氢氧化钠溶液；所述步骤(5)中滴加的酸溶液为盐酸溶液。再进一步优选的，所述氢氧化钠溶液为饱和氢氧化钠溶液。进一步的，所述步骤(7)中上清液与萃取剂的体积比为1:4-5。进一步优选的，所述萃取剂是乙酸乙酯和乙醇混合液。再进一步优选的，所述乙酸乙酯和乙醇混合液是体积比为1:3-4的乙酸乙酯和乙醇混合液。进一步的，所述步骤(8)中蒸干水相采用真空旋转蒸发的方法。进一步的，所述真空旋转蒸发的温度为70-75℃，真空度为0.01-0.09MPa。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术所提供的提取方法，操作步骤简单，可以在同一容器中进行，无需反复收集提取物。2、本专利技术采用弱浓度酸碱对物料进行处理，并利用乙酸乙酯和乙醇混合液萃取，方法温和，可以最大限度的保留不可萃取多酚的生物活性，使不可萃取多酚清除自由基的能力较强，并且提高了提取率。3、本专利技术采用盐酸溶液和氢氧化钠溶液来浸提蓝莓渣，盐酸和氢氧化钠反应生成的是水和氯化钠，不影响整体的操作过程，旋转蒸发得到的绝大多数物质是多酚。采用其他的酸碱，需要用大孔吸附树脂柱子，才可以减少无机盐类及强离子、低分子化合物存在的影响，以达到分离、纯化、除杂的目的。4、本专利技术的提取过程中用弱酸弱碱溶液，对环境污染十分小，有利于工业化生产与推广。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，达到预期专利技术目的，以下结合较佳实施例，对依据本专利技术提出的蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。在详细阐述本专利技术蓝莓中不可萃取多酚的提取方法之前，有必要对本专利技术中提及的相关材料和实验仪器，以及名词做进一步说明，以达到更好的效果。本专利技术中采用的材料为：纤维素酶：纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。作用于纤维素以及从纤维素衍生出来的产物。本专利技术采用的是活力为10u/mg的纤维素酶。果胶酶：果胶酶由黑曲霉经发酵精制而得。外观呈浅黄色粉末状。果胶酶主要用于果蔬汁饮料及果酒的榨汁及澄清，对分解果胶具有良好的作用。果胶酶是一种生物酶，作用是促进果胶水解，常用于高中生物中植物体细胞杂交的去除细胞壁的过程。本专利技术采用的是活力为500u/mg的果胶酶。胶头滴管又称胶帽滴管，它是用于吸取或滴加少量液体试剂的一种仪器。移液管，用来准确移取一本文档来自技高网...

【技术保护点】
蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)制备蓝莓渣：收集蓝莓榨汁后的残渣，并在常温下干燥，得蓝莓渣；(2)制备蓝莓渣粉末：粉碎蓝莓渣，得蓝莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：将蓝莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100‑120ml，浸泡11.5‑12.5小时，浸泡温度为3‑5℃，得酸性浸泡液；(4)碱溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入碱溶液，至浸泡液中氢氧根离子浓度为0.45‑0.55mol/L，浸泡2.5‑3.5小时，浸泡温度为3‑5℃，得碱性浸泡液；(5)酶解：向碱性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值为3.7‑3.8；再加入纤维素酶、果胶酶，至维素酶浓度为2‑3U/ml，果胶酶浓度为50‑55U/ml，进行酶解处理，酶解11.5‑12.5小时，酶解温度为38‑42℃，得酶解溶液；(6)离心：将酶解溶液离心10‑20min，转速为7000‑9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取剂萃取上清液，静置分层后，上层为油相，下层为水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。

【技术特征摘要】
1.蓝莓中不可萃取多酚的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)制备蓝莓渣：收集蓝莓榨汁后的残渣，并在常温下干燥，得蓝莓渣；(2)制备蓝莓渣粉末：粉碎蓝莓渣，得蓝莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：将蓝莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100-120ml，浸泡11.5-12.5小时，浸泡温度为3-5℃，得酸性浸泡液；(4)碱溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入碱溶液，至浸泡液中氢氧根离子浓度为0.45-0.55mol/L，浸泡2.5-3.5小时，浸泡温度为3-5℃，得碱性浸泡液；(5)酶解：向碱性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值为3.7-3.8；再加入纤维素酶、果胶酶，至维素酶浓度为2-3U/ml，果胶酶浓度为50-55U/ml，进行酶解处理，酶解11.5-12.5小时，酶解温度为38-42℃，得酶解溶液；(6)离心：将酶解溶液离心10-20min，转速为7000-9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取剂萃取上清液，静置分层后，上层为油相，下层为水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。2.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱琳，许程剑，苗颖，张登科，郝程列，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津,12