一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法技术

本发明专利技术涉及一种能检查美洛昔康片中杂质的HPLC方法，该方法能有效检测0.015μg/ml到2μg/ml浓度范围的美洛昔康片，且结果准确、可靠，具有很强的实用性与推广价值。

A Meloxicam Tablets HPLC method in detection of impurities

The invention relates to a check of the impurity in Meloxicam Tablets HPLC method, this method can effectively detect 0.015 g/ml to 2 g/ml concentration range of Meloxicam Tablets, and the result is accurate and reliable, and has strong practicability and popularization value.

【技术实现步骤摘要】
一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法
本专利技术属于制剂分析方法，具体是涉及一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，该测定方法稳定、准确度高。
技术介绍
美洛昔康是一种烯醇酰胺类的新型非甾体抗炎药，对环氧化酶-2有较强的选择性抑制作用，具有解热、镇痛、抗炎等药理作用，而对胃肠道及肾脏的毒性较小。可用于类风湿性关节炎和疼痛性骨关节炎的对症治疗，或控制与骨骼肌有关的炎症及疼痛。但在美洛昔康合成的过程中容易引入其他杂质，比如:4-羟基-2-甲基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸乙酯-1,1-二氧化物、2-氨基-5-甲基噻唑等，其中2-氨基-5-甲基噻唑属于有害物质，对于生物体有较大毒性，长期接触，会严重损坏健康。此外，该物质分解会影响美洛昔康产品质量。考虑到宠物对药物具有排斥性，因此在宠物专用组方中添加宠物专用矫味剂，如：牛肉粉、鸡肉粉、鸡肝粉等。这些矫味剂的引入干扰了杂质的测定，故现有的检测方法很难将杂质与美洛昔康有效分离。目前针对美洛昔康片有关物质的检测的方法为：一、2015年版中国药典中美洛昔康片中美洛昔康有关物质检测方法：取本品，加碱性甲醇溶液(取40％甲醇溶液100ml，加0.4mol/L氢氧化钠溶液6ml，混匀)溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述碱性甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.1mol/L醋酸铵溶液(1：1)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按美洛昔康峰计算不低于2000。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0％)。二、中国医药工业杂志(发表日期：2003年11月)中美洛昔有关物质的HPLC测定方法为：色谱条件：十八烷基键合硅胶(5um)为填充剂，检测波长为350nm和260nm，柱温45℃，流速1ml/min，进样量20ul。流动相A为0.1％磷酸氢二钾溶液(调剂pH6.0)，流动相B为甲醇。梯度洗脱：0～2.5min，A:B＝60：40,；2.5～12min从A:B＝60:40等速线性变化至A:B＝30:70。测定方法：溶液1的制备：精密称取1约0.1g，置50ml容量瓶中，加0.4％NaOH溶液6ml，微温，超声使溶解，加40％甲醇定容，摇匀即得。溶液2的制备：精密吸取溶液1中1ml，置100ml容量瓶中，用40％甲醇定容，摇匀。精密吸取1ml用40％甲醇定容至10ml，摇匀，即得。测定：取溶液1、2分别于350nm和260nm波长处进行测定。溶液1在350nm波长处任一杂质峰的面积，不得大于溶液2在350nm波长处1峰面积的一半(0.05％)；溶液2在260nm任一杂质峰的面积，不得大于溶液2在260nm波长处1峰面积(0.1％)。计算各杂质在高响应波长处的百分含量，所有杂质的和不得大于0.3％。检测方法一中的方法采用等度洗脱法，和梯度洗脱法比较不能将杂质全部洗脱出来；检测方法二中的方法需要使用配有二极管阵列检测器的液相色谱仪，和普通紫外检测器相比价格比较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种仅用一个波长便可以达到检测目的的方法，且操作简单方便精确度较高，在仪器的使用上也降低了成本，使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪即可。2-氨基-5-甲基噻唑在检测限和定量限方面三种检测方法有所有不同下表；项目方法一方法二本专利技术检测限10ng/ml12.5ng/ml7.5ng/ml定量限0.05μg/ml0.08μg/ml0.03μg/ml所述一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，是通过改变梯度洗脱的流动相比例和提取液的配比，达到将制剂中的主要成分逐一分离并进行有关物质的测定。本专利技术涉及的梯度洗脱程序为：本专利技术涉及的流动相为：0.2％磷酸氢二铵溶液(pH7.0)为流动相A；甲醇为B；异丙醇为流动相C。本专利技术所使用的提取液的配制方法为：取40％甲醇溶液100ml，加0.4mol/L氢氧化钠溶液6ml，混匀。本专利技术其所述的美洛昔康片主要杂质成分为2-氨基-5-甲基噻唑。本专利技术是这样来实现的：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ThermoC18，4.6mm×150mm，5μm)，柱温40℃；流速为0.9mL/min；检测波长为270nm；取美洛昔康片适量，研细，加提取液稀释至每1ml含美洛昔康0.5mg的溶液，摇匀，滤过，作为供试品溶液；美洛昔康对照溶液的制备精密量取供试品溶液1ml至100ml容量瓶中，用提取液定容至刻度，摇匀，得每1mL中含5ug的溶液，作为美洛昔康对照溶液；精密量取对照溶液20μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的6倍。供试品溶液的色谱图中如显杂峰，相对保留时间小于0.55的峰忽略不计，相对保留时间为0.59的色谱峰(2-氨基-5-甲基噻唑)，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.15倍，其他单个杂质峰面积不得过对照溶液主峰面积的1/2(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0％)。小于对照品溶液峰面积0.01倍的峰忽略不计。本专利技术的有益效果是：本专利技术仅用一个波长便可以达到检测目的的方法，且操作简单方便精确度较高，在仪器的使用上也降低了成本，使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪即可。本专利技术耐用性的考察:本专利技术在有关物质测定方法上选择150mm长的C18色谱柱，耐用性重点考察了流动相不同pH和柱温对测定方法的影响。1流动相pH值对含量测定方法的影响为了考察流动相pH值对有关物质检测方法的影响，分别配制pH6.5、7.0、7.5三个流动相，其他条件相同，分别记录色谱图，比较理论塔板数、保留时间、含量，结果如下表1所示。表1流动相不同pH对2-氨基-5-甲基噻唑的影响由表1得出，随着流动相pH值的增大，2-氨基-5-甲基噻唑的保留时间略有提前，三个条件下的理论塔板数、分离度均符合要求，可以看出在流动相pH值在6.5-7.5范围内，塔板数、含量均符合规定，说明流动相pH在6.5-7.5范围内，2-氨基-5-甲基噻唑较稳定。2柱温对本专利技术的影响为了考察柱温变化对本专利技术的影响，试验中通过柱温箱控制柱子温度，设定了30℃、35℃、40℃、45℃四个条件，分别采集相应温度下样品的色谱信号，待检样品为1mg/片美洛昔康片制剂，比较不同温度下色谱图参数中分离度、理论塔板数、分离度、含量，结果如下表2所示。表2柱温对2-氨基-5-甲基噻唑的影响通过上表2数据可以看出，随柱温的升高，2-氨基-5-甲基噻唑的保留略有提前；不同温度下，2-氨基-5-甲基噻唑的塔板数、分离度均符合规定；由此可以看出柱温对2-氨基-5-甲基噻唑的影响较少。流动相不同pH和柱温的HLPC图谱分别见本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其特征在于使用梯度洗脱，达到将制剂中的杂质与主要成分逐一分离并进行测定。

【技术特征摘要】
1.一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其特征在于使用梯度洗脱，达到将制剂中的杂质与主要成分逐一分离并进行测定。2.根据权利要求1所述的一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其特征在于流动相的梯度洗脱程序，所述流动相梯度洗脱程序为：3.根据权利要求1或2任一所述的一种检测美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其特征在于所述流动相A为：0.2％磷酸氢二铵溶液(pH7.0)，流动相B为甲醇；流动相C为异丙醇。4.根据权利要求1所述的一种能检查美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其所述的美洛昔康片主要杂质为2-氨基-5-甲基噻唑。5.根据权利要求1至4任一所述的一种能检查美洛昔康片中杂质的HPLC方法，其特征在于具体实施步骤如下：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温40℃；流速为0.9mL/min；检测波长为270nm；供试品溶液的制备取...

【专利技术属性】
技术研发人员：付春香，李旭东，刘爱玲，刘桂兰，
申请(专利权)人：瑞普天津生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12