The invention discloses a method for purification of nucleic acid or fragment screening kit, which includes beads solution, washing and elution reagent kit; among them, the magnetic solution containing a concentration of 1 to silica beads, 100ng/ L carboxyl concentration is 0.1 ~ 100mol/L, the volume percentage of sodium chloride concentration is 1% ~ 50% peg and buffer. The present invention also discloses a method for nucleic acid purification and fragment screening using the kit. The kit of the invention magnetic beads were used for nucleic acid purification and screening of fragments from the flux limit can achieve high throughput at the same time, the magnetic properties of magnetic bead based, with automation instrument automation.
【技术实现步骤摘要】
一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒及其使用方法
本专利技术属于生物
,尤其涉及一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
高通量测序技术,即下一代测序技术(nextgenerationsequencing)能一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定及量化,为基础生物医学研究和临床检测提供了一个强大的工具,并推动基因组学的科学研究和临床转化,奠定了其在精准医学的基石地位。而一个待检样品在走上高通量DNA测序机器测序前还需要做大量的工作,其中的关键步骤就是文库构建。文库构建包括核酸片段化、修复反应、加A反应、连接反应、片段筛选与纯化、PCR扩增、PCR产物纯化、文库质检等过程,这些过程需要做大量的核酸纯化及片段筛选的工作。目前核酸纯化及片段筛选的方法有胶回收法、离心柱法等。胶回收法是根据凝胶电泳中不同片段大小的核酸在凝胶上的泳动距离不同而通过对含特定大小核酸片段的凝胶切割下来,再将切割下来的凝胶中的核酸分离纯化出来,达到核酸片段选择纯化的目的。离心柱法是利用硅胶膜配合特定的溶液环境来吸附核酸片段而达到核酸片段选择纯化的目的。但这些方法存在操作繁琐,耗时,或需要凝胶电泳或需要离心,无法实现高通量、自动化操作。胶回收法首先需要制备凝胶、电泳、切胶、回收等过程需要消耗大量的时间、花费不少人力操作成本。离心柱法一般需要吸附、洗涤、洗脱等步骤,其间需要大量的离心操作步骤,每次离心5min左右,而离心机的通量有限,限制了操作的简便性,当然少量样品以上两种方法可以是种选择,但当需要实现批量操作的时候,以上方法无法满足。
技术实现思路
一方面,本专利技术 ...
【技术保护点】
一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒,其特征在于:包括磁珠溶液、洗涤试剂和洗脱试剂;其中,所述磁珠溶液包含浓度为1~100ng/μL的氧化硅羧基磁珠、浓度为0.1~100mol/L的氯化钠、体积百分比浓度为1%~50%的聚乙二醇和缓冲液。
【技术特征摘要】
1.一种用于核酸纯化或片段筛选的试剂盒,其特征在于:包括磁珠溶液、洗涤试剂和洗脱试剂;其中,所述磁珠溶液包含浓度为1~100ng/μL的氧化硅羧基磁珠、浓度为0.1~100mol/L的氯化钠、体积百分比浓度为1%~50%的聚乙二醇和缓冲液。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述缓冲液为pH为5.5~6.5的1~100mol/L三羟基甲烷-盐酸。3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述聚乙二醇的分子量为5000~10000道尔顿,优选为8000道尔顿。4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述氧化硅羧基磁珠的浓度为5~50ng/μL,所述氯化钠的浓度为0.5~10mol/L,所述聚乙二醇的体积百分比浓度为2%~30%。5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述洗涤试剂包含体积百分比浓度为1%~85%的乙醇,1~100mmol/L氯化钠,0.1~10mmol/L乙二胺四乙酸,pH为7.5~8.5的0.1~10mmol/L三羟基甲烷-盐酸;所述洗脱试剂含有pH为8.0~9.0的0.1~10mmol/L三羟基甲烷-盐酸。6.使用权利要求1~5中任一项所述的试剂盒进行核酸纯化的方法,其特征在于:包括以下步骤:1)向盛有待纯化核酸样品的反应管中加入所述磁珠溶液,混匀,室温下静置3~10min;2)将所述反应管置于磁力架,静置2~5min,待溶液澄清后,吸走上清液;3)向所述反应管中加入所述洗涤试剂,室温静置20~60s,吸走上清液;此步骤至少进行一次;4)保持所述反应管置于磁力架上状态,室温开盖晾干2~5min;5)将所述反应管从磁力架上取下来,加入洗脱试...
【专利技术属性】
技术研发人员:崔晓锋,
申请(专利权)人:广东一氪生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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