拟海桑的化学成分提取方法技术

本发明专利技术涉及一种拟海桑的化学成分提取方法，步骤如下：将拟海桑样品粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏，经100-200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2，v/v)，得到数个粗组分。本发明专利技术利用薄层色谱、硅胶柱色谱、凝胶SephadexLH-20、高效液相色谱HPLC等现代色谱分离技术，通过NMR、ESIMS、IR和UV等现代波谱分析技术，从拟海桑Sonneratiaparacaseolaris中共分离得到了51个化合物，均为首次从该种中分离得到。

The extraction method of quasi chemical composition of s.caseolaris

The invention relates to a method for extracting, a quasi s.caseolaris chemical composition comprises the following steps: sample will be Sonneratia after crushing, at room temperature with methanol soaking and extracting for 4 times, each time for 3 days; combined extraction, vacuum concentration, three times with anhydrous methanol desalting, total extract by silica gel chromatography and 100-200 orders. Petroleum ether / acetone gradient elution (100:1 1:2, v/v), obtained a number of coarse fractions. The invention uses thin-layer chromatography, silica gel chromatography, SephadexLH-20, high performance liquid chromatography separation technology HPLC and other modern chromatography, by NMR, ESIMS, IR and UV spectroscopy, i.e. Sonneratiaparacaseolaris isolated from quasi 51 compounds were first isolated from this species.

【技术实现步骤摘要】
拟海桑的化学成分提取方法
本专利技术属于海洋生物医药
，具体涉及拟海桑的化学成分提取方法。
技术介绍
拟海桑(Sonneratiaparacaseolaris)属于海桑科海桑属，为我国稀有濒危红树植物，仅天然分布于海南岛，分布范围狭窄，个体数量稀少。正处于濒危状态，被列入《中国生物多样性国情研究报告》中国被子植物濒危及稀有种名录。在前期的生物活性筛选实验中，拟海桑的甲醇提取物对小鼠白血病肿瘤细胞株P-388和人肝癌细胞株BEL-7402显示较强的细胞毒活性。因此，本项目选择拟海桑进行细致的化学成分研究，期望发现海洋来源活性先导化合物。拟海桑化学成分的研究只有一篇报道，2012年郭跃伟课题组对采自广东湛江的拟海桑进行化学成分研究，从中分离得到一个新骨架化合物ParacaseolideA(69)是一个二聚-烷基丁内酯类化合物内酯甲素，体外药理活性筛选显示该化合物对细胞周期分裂蛋白25B具有显著的抑制活性。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种全面提取拟海桑中化学成分的方法。拟海桑的化学成分提取方法，步骤如下：将拟海桑样品粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏，经100-200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2，v/v)，得到数个粗组分。对粗组分进行进一步分离，包括以下步骤：三萜类化合物分离，经300—400目硅胶柱层析(2×20cm，20g)用石油醚：丙酮25:1(4L)分离，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，100%，1.5mL/min)，再经过硅胶柱色谱(200–300mesh，3×20cm，50g)用石油醚：丙酮洗脱(v:v20:1，15:1，10:1，5:1，2:1，each1L)作为洗脱剂，继续用硅胶柱进行分离(200–300mesh，2×20cm，30g)用二氯甲烷：乙酸乙酯(v:v50:1，4L)进行洗脱。植醇的分离，经300—400目硅胶柱层析(2×20cm，20g)用石油醚：丙酮25:1(4L)分离，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，100%，1.5mL/min)。甾醇类化合物的分离，经300—400目硅胶柱层析用石油醚：乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，1:1进行洗脱，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，再用高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，35%，1.5mL/min)。倍半萜类化合物的分离，经300—400目硅胶柱层析用石油醚：乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，1:1进行洗脱，再用硅胶柱色谱进行分离，用石油醚：丙酮20：1进行洗脱，先用凝胶sephadexLH-20分离用氯仿：甲醇1:1洗脱后，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，67%，1.5mL/min)。脂肪酸的分离，首先用凝胶sephadexLH-20进行除带，用氯仿：甲醇1:1洗脱，获得有点段，再进行硅胶柱色谱的分离，200—300目硅胶，用石油醚：丙酮20:1，15:1，10:1，5:1，2:1进行分离，再用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，90%，1.5mL/min)。木质素类化合物的分离，首先用凝胶sephadexLH-20进行除带，用氯仿：甲醇1:1洗脱，获得有点段，再进行硅胶柱色谱的分离，200—300目硅胶，用石油醚：丙酮20:1，15:1，10:1，5:1，2:1进行分离，再用硅胶柱进行分离，200—300目，洗脱体系为氯仿：乙酸乙酯50:1，，继续用反相ODS(2×9cm，10g)进行纯化，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，再用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，80%，1.5mL/min)。本专利技术利用薄层色谱、硅胶柱色谱、凝胶SephadexLH-20、高效液相色谱HPLC等现代色谱分离技术，通过NMR、ESIMS、IR和UV等现代波谱分析技术，从拟海桑Sonneratiaparacaseolaris中共分离得到了51个化合物，鉴定了47个化合物的结构，其中包括17个三萜类化合物(SP-1~SP-17)、1个植醇化合物(SP-18)、7个甾醇类化合物(SP-19~SP-25)、2个倍半萜类化合物(SP-26~SP-27)、1个脂肪酸类化合物SP-28、4个木质素类化合物(SP-29~SP-32)化合物、5个黄酮类化合物(SP-33~SP-37)、7个苯类衍生物(SP-39~SP-46)、1个鞣酸类化合物SP-47以上全部化合物均为首次从该种中分离得到。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。将拟海桑样品粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏70g。经100-200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2，v/v)，分为11个粗组分(Fr-1~Fr-11)。三萜类化合物SP-1~SP-17的分离Fr.4(4.6121g)经300—400目硅胶柱层析(2×20cm，20g)用石油醚：丙酮25:1(4L)获得3个组分，Fr.4.1–Fr.4.3，Fr.4.2(570.4mg)进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)获得8个组分Fr.4.2.1–Fr.4.2.8。Fr.4.2.8(203mg)进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，100%，1.5mL/min)获得单体化合物SP-5(tR=46.8min，15.3mg)，16(tR=75.6min，4.4mg)和17(tR=80.0min，6.4mg)。Fr.7(1.637g)经过硅胶柱色谱(200–300mesh，3×20cm，50g)用石油醚：丙酮洗脱(v:v20:1，15:1，10:1，5:1，2:1，each1L)作为洗脱剂，获本文档来自技高网...

【技术保护点】
拟海桑的化学成分提取方法，其特征在于，步骤如下：将拟海桑样品粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏，经100‑200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2，v/v)，得到数个粗组分。

【技术特征摘要】
1.拟海桑的化学成分提取方法，其特征在于，步骤如下：将拟海桑样品粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏，经100-200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2，v/v)，得到数个粗组分。2.根据权利要求1所述的拟海桑的化学成分提取方法，其特征在于，对粗组分进行进一步分离，包括：三萜类化合物分离，经300—400目硅胶柱层析(2×20cm，20g)用石油醚：丙酮25:1(4L)分离，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，100%，1.5mL/min)，再经过硅胶柱色谱(200–300mesh，3×20cm，50g)用石油醚：丙酮洗脱(v:v20:1，15:1，10:1，5:1，2:1，each1L)作为洗脱剂，继续用硅胶柱进行分离(200–300mesh，2×20cm，30g)用二氯甲烷：乙酸乙酯(v:v50:1，4L)进行洗脱。3.根据权利要求1所述的拟海桑的化学成分提取方法，其特征在于，对粗组分进行进一步分离，包括：植醇的分离，经300—400目硅胶柱层析(2×20cm，20g)用石油醚：丙酮25:1(4L)分离，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75:25，80:20，85:15，90:10，95:5，100:0，每个梯度200mL)分离，进一步用半制备高效液相色谱HPLC分离纯化(C18，MeOH，100%，1.5mL/min)。4.根据权利要求1所述的拟海桑的化学成分提取方法，其特征在于，对粗组分进行进一步分离，包括：甾醇类化合物的分离，经300—400目硅胶柱层析用石油醚：乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，1:1进行洗脱，进一步用反相ODS进行纯化(2×9cm，10g)，用MeOH/H2O(v:v60:40，65:35，70:30，75...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37