基于背景荧光猝灭‑免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法技术

本发明专利技术涉及牛奶检测技术领域，是一种基于背景荧光猝灭‑免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法；该基于背景荧光猝灭‑免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，按下述步骤进行：第一步，将卡那霉素标准曲线方程和名称输入二维码制码器，制成卡那霉素二维码，然后把卡那霉素二维码粘贴在卡那霉素试纸条上的二维码粘贴处，得到卡那霉素检测卡。本发明专利技术测定牛奶中卡那霉素的检测限为0.2003μg/kg，经实验选择的最优加样量为80μL，最优反应时间为8min；本发明专利技术灵敏度高、反应时间短、操作简便，可实现牛奶中卡那霉素的现场快速定量检测，使本发明专利技术广泛应用于食品安全领域奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法
本专利技术涉及牛奶检测
，是一种基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法。
技术介绍
卡那霉素(Kanamycin,KaA)是一种氨基糖苷类抗生素药物，水溶性好，价格便宜，抗菌谱广。临床上主要肌注用于敏感菌所致的系统感染，如肺炎、败血症、尿路感染等。作为兽药，经奶牛乳腺管注射给药，用来治疗奶牛的多种疾病。然其在体内代谢较慢，挤奶过程中经乳汁排出，导致生鲜乳中抗生素残留，对消费者引起机体的过敏反应或抗药性。各国都对其做出限量要求，中华人民共和国农业部公告第253号-2002牛奶中最高残留限量为100ng/mL。在中华人民共和国国家标准GB/T4789.27-2008中鲜乳中卡那霉素残留的检验方法为嗜热链球菌抑制法和嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法。文献报道有酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、胶体金免疫层析法。嗜热链球菌抑制法和嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法价格低廉，但操作繁琐，重现性差；免疫亲和柱-液相色谱法、免疫亲和柱液相色谱串联质谱法等，这类方法灵敏度高，特异性好，但是免疫亲和柱需低温保存、样品前处理程序繁琐，且此类仪器没有便携性；ELISA方法灵敏度较高、快速、经济，但在检测实验过程需多次洗板，重复性较差，试剂需要低温保存等，不适合现场快速检测，适用于实验室大量样本初筛；胶体金免疫层析因快速、简便且经济实用，在食品检测的大量样本筛查中表现出较强的优势，但只能用于定性检测，而不能进行定量，筛选后的阳性样本需送实验室进行进一步定量分析。
技术实现思路
本专利技术提供了一种基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有鲜乳中卡那霉素残留的检验方法存在样品前处理过程繁琐、重现性差、不适合现场快速检测和不能进行定量分析的问题。本专利技术的技术方案是通过以下措施来实现的：一种基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，按下述步骤进行：第一步，将卡那霉素标准曲线方程和名称输入二维码制码器，制成卡那霉素二维码，然后把卡那霉素二维码粘贴在卡那霉素试纸条上的二维码粘贴处，得到卡那霉素检测卡；第二步，取待检测样品200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素检测卡上的加样孔内，室温下层析8min；第三步，层析后将卡那霉素检测卡插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪的显示屏上就会显示出待检测样品名称和待检测样品中卡那霉素的浓度。下面是对上述专利技术技术方案的进一步优化或/和改进：上述卡那霉素标准曲线方程按下述方法得到：第一步，卡那霉素储备液的配置，取卡那霉素标准物质，用PBS配成1μg/mL的卡那霉素溶液，得到卡那霉素储备液；第二步，卡那霉素系列浓度标准溶液的配置，将卡那霉素储备液用标准牛奶样依次配成10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、40ng/mL和60ng/mL的卡那霉素系列溶液，得到卡那霉素系列浓度标准溶液；第三步，取标准牛奶样200μL、卡那霉素系列浓度标准溶液各200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素试纸条上的加样孔内，室温下层析8min；第四步，层析后将卡那霉素试纸条插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪扫描卡那霉素试纸条上的T线和C线，获得样品F1/F0的比值；第五步，以溶液中卡那霉素的浓度为横坐标，相对应的F1/F0为纵坐标，得到卡那霉素标准曲线方程y＝-0.0002x2+0.0198x+0.2171。上述标准牛奶样为经检测不含有卡那霉素的牛奶样。上述待检测样品为待检测牛奶。本专利技术测定牛奶中卡那霉素的检测限为0.2003μg/kg，经实验选择的最优加样量为80μL，最优反应时间为8min；本专利技术灵敏度高、反应时间短、操作简便，可实现牛奶中卡那霉素的现场快速定量检测，使本专利技术广泛应用于食品安全领域奠定了基础。附图说明附图1为现有卡那霉素试纸条的背景荧光猝灭-免疫层析检测示意图。附图2为本专利技术卡那霉素标准曲线。附图3为本专利技术卡那霉素检测卡和荧光免疫分析仪的立体结构示意图。具体实施方式本专利技术不受下述实施例的限制，可根据本专利技术的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1，该基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，按下述步骤进行：第一步，将卡那霉素标准曲线方程和名称输入二维码制码器，制成卡那霉素二维码，然后把卡那霉素二维码粘贴在卡那霉素试纸条上的二维码粘贴处，得到卡那霉素检测卡；第二步，取待检测样品200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素检测卡上的加样孔内，室温下层析8min；第三步，层析后将卡那霉素检测卡插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪的显示屏上就会显示出待检测样品名称和待检测样品中卡那霉素的浓度。实施例2，卡那霉素标准曲线方程按下述方法得到：第一步，卡那霉素储备液的配置，取卡那霉素标准物质，用PBS配成1μg/mL的卡那霉素溶液，得到卡那霉素储备液；第二步，卡那霉素系列浓度标准溶液的配置，将卡那霉素储备液用标准牛奶样依次配成10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、40ng/mL和60ng/mL的卡那霉素系列溶液，得到卡那霉素系列浓度标准溶液；第三步，取标准牛奶样200μL、卡那霉素系列浓度标准溶液各200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素试纸条上的加样孔内，室温下层析8min；第四步，层析后将卡那霉素试纸条插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪扫描卡那霉素试纸条上的T线和C线，获得样品F1/F0的比值；第五步，以溶液中卡那霉素的浓度为横坐标，相对应的F1/F0为纵坐标，得到卡那霉素标准曲线方程y＝-0.0002x2+0.0198x+0.2171。实施例3，作为上述实施例的优化，标准牛奶样为经检测不含有卡那霉素的牛奶样。实施例4，作为上述实施例的优化，待检测样品为待检测牛奶。现有卡那霉素试纸条的背景荧光猝灭-免疫层析检测示意图见图1所示，图1中，1.小试杯底部固定有胶体金标记的目标物抗体(金标抗体)和胶体金标记的羊抗鼠抗体，2.供试品溶液进行层析的样品垫，3.包被有“目标物抗原-牛血清白蛋白(BSA)偶联物”的测试线(T线)，4.包被有“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白(BSA)偶联物”控制线(C线)，5.带有背景荧光F0的硝酸纤维素膜；图1中，底部固定有胶体金标记的目标物抗体(金标抗体)和胶体金标记的羊抗鼠抗体的小试杯，固定有荧光试剂的硝酸纤维素膜荧光区(可产生背景荧光F0)，在荧光区包被有“目标物抗原-牛血清白蛋白偶联物”的测试线(T线)，包被有“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白偶联物”的控制线(C线)。样品检测原理为：将一定量样品溶液，加入固定有金标抗体小试杯中，混匀(样品溶液中的待测目标物-卡那霉素抗原与金标抗体特异性结合)，吸取一定量的混匀溶液滴加至样品垫上，通过毛细管作用进行层析。当混合溶液到达T线处，剩余的金标抗体与T线处的目标物-卡那霉素抗原结合，形成抗原-金标抗体复合物，被截留在T线上，使背景荧光猝灭，以T线处荧光强度的测量值记为F1，荧光猝灭程度(F1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于背景荧光猝灭‑免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，将卡那霉素标准曲线方程和名称输入二维码制码器，制成卡那霉素二维码，然后把卡那霉素二维码粘贴在卡那霉素试纸条上的二维码粘贴处，得到卡那霉素检测卡；第二步，取待检测样品200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素检测卡上的加样孔内，室温下层析8min；第三步，层析后将卡那霉素检测卡插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪的显示屏上就会显示出待检测样品名称和待检测样品中卡那霉素的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，将卡那霉素标准曲线方程和名称输入二维码制码器，制成卡那霉素二维码，然后把卡那霉素二维码粘贴在卡那霉素试纸条上的二维码粘贴处，得到卡那霉素检测卡；第二步，取待检测样品200μL至固定有金标抗体的小试杯中，充分混匀后吸取80μL滴加至卡那霉素检测卡上的加样孔内，室温下层析8min；第三步，层析后将卡那霉素检测卡插入荧光免疫分析仪的插卡口，点击测样，荧光免疫分析仪的显示屏上就会显示出待检测样品名称和待检测样品中卡那霉素的浓度。2.根据权利要求1所述的基于背景荧光猝灭-免疫层析测定牛奶中卡那霉素的方法，其特征在于卡那霉素标准曲线方程按下述方法得到：第一步，卡那霉素储备液的配置，取卡那霉素标准物质，用PBS配成1μg/mL的卡那霉素溶液，得到卡那霉素储备液；第二步，卡那霉素系列浓度标准溶液的配置，将卡那霉素储备液用标准牛奶样依次配成10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、40ng/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新霞，吴晓霞，王玉文，李久彤，张唯，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65