樟芝生长促进剂及用其快速发酵生产樟芝的方法技术

本发明专利技术涉及一种樟芝生长促进剂及用其快速发酵生产樟芝的方法，包括斜面培养、液态种子制备、液态发酵及固态发酵，在各发酵过程中可添加香草醛等芳香族化合物中的一种或几种的组合，从而极大地缩短发酵生产樟芝菌丝体及子实体的培养周期，提高生物活性物质樟芝三萜的含量。与目前研究报道的技术相比，本发明专利技术技术工艺简单、高效，使用了微量的生长促进剂，可以达到快速生产樟芝菌丝体及子实体的目的，发酵周期较传统方法缩短50％以上，樟芝三萜的含量提高了60％以上，降低了生产成本，具有良好的工业运用前景。

Growth promoting agent of camphor nut and method for rapidly producing camphor nut by using the same

The invention relates to a antrodiacamphorata growth promoter and method for rapid fermentation of Antrodia camphorata, including slant culture, seed liquid preparation, liquid fermentation and solid fermentation, the fermentation process in combination can add one or several aromatic compounds such as vanillin in the culture period and greatly shrink from short hair fermentation mycelia and fruiting body, improve the content of bioactive substances from the three antrodiacamphorata. Compared with the current reports on technology, the present invention has simple technological process, high efficiency, the use of growth promoter trace, can achieve the rapid production of mycelia and fruiting bodies, compared with the traditional method to shorten the fermentation period of more than 50%, the content of antrodiacamphorata three terpene increased more than 60%, reduce the production cost, has good the prospects for industrial use.

【技术实现步骤摘要】
樟芝生长促进剂及用其快速发酵生产樟芝的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种在发酵过程中添加一种生长促进剂或几种生长促进剂组合，利用液态发酵，培养基固态发酵及太空包固态发酵等手段，从而快速生产樟芝菌丝体及子实体的方法。
技术介绍
牛樟芝(Antrodiacamphorata)是具有高度的宿主专一性的薄孔菌属珍稀药用真菌，仅生长于台湾特有常绿阔叶乔木牛樟树腐朽树干内壁。历史上台湾人民作为解酒保肝，治疗腹泻的传统中药，现代研究表明樟芝含有多种有效成分，如三萜、多糖、甾体和苯环衍生物等，同时具有多种药理活性，如抗肿瘤、增加免疫能力、抗病毒、抗高血压、抗炎症、降胆固醇、保护肝脏等。近年来，随着樟芝保健及药用价值的逐步开发，人们的消费需求日益增长，但由于野生牛樟芝生长十分缓慢，资源稀少，使得野生牛樟芝价格十分昂贵，市价高达每台斤新台币十多万元至数十万元。目前樟芝逐渐成为保健和治疗疾病的新星，使得研究者和开发商十分注重人工培养技术的研究。樟芝的人工培养方法主要有三种：椴木栽培法、固体栽培法和液体发酵法，椴木栽培法获得产物成分与野生樟芝相似，但其培养周期2～3年，依赖于牛樟树椴木资源，不利于牛樟树资源保护，不宜运用于工业化大规模生产。液体发酵法培养周期仅7～14天，生产成本低，相关技术运用成熟，但活性成分及药理活性与野生樟芝差异较大。樟芝固态栽培与野生牛樟芝生长环境类似，培养所得产物形态及有效成分与野生牛樟芝较为相似，主要的固态培养方法为太空包和三角瓶固态发酵，但其培养周期较长，容易污染杂菌，生产成本较高。专利CN101803534B提供了一种樟芝的大规模固体培养方法，通过太空包接种培养可大规模运用于商业化种植，所得樟芝子实体形似圆锥，重量约为0.2～1.0kg，但培养周期较长，为5～8月。本专利通过在液体发酵、固态发酵和太空包固态发酵添加不同种类和浓度的生长促进剂，促进樟芝菌丝体及子实体的快速生产，同时，在发酵过程中使用本专利提供的生长促进剂可提高樟芝主要活性成分樟芝三萜的含量。综上所述，本专利提供了一种樟芝快速高效发酵工艺，节省时间成本，满足日益增长的樟芝产品需求，具有极大地工业运用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种发酵促进剂，可以在不改变其它发酵条件以及发酵培养基组成的情况下，刺激樟芝孢子迅速萌发，生成大量樟芝菌丝体，提高樟芝主要活性成分三萜含量并降低生产成本。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种樟芝快速发酵的生长促进剂，该生长促进剂包含香草酸、肉桂酸、丁香酸、香草醛、阿魏酸、咖啡酸、苯甲酸、苯酚、苯甲醇、苯乙醇中的一种或几种，可促进液体发酵生产菌丝体、固态发酵生产樟芝子实体，使用浓度范围为0.1～10mM，过滤除菌后在发酵培养工序中加入，可一次或者多次添加。所述的生长促进剂可在现有文献公开的所有樟芝发酵工艺中使用，均能缩短发酵周期，提高有效成分樟芝三萜的含量。一种采用生长促进剂的樟芝快速发酵方法，其特征为，该方法包括斜面培养、种子制备、液态发酵和固态发酵培养工序，如下所述：A.斜面培养：樟芝菌丝体转接至PDA斜面培养基，24～30℃培养10～30d；B.种子制备：樟芝斜面菌种接入种子培养基，在24～30℃培养10～20d得到种子液；种子培养基按质量体积比为：葡萄糖15～25g/L，酵母粉0.5～2g/L，硫酸镁0.5～2g/L，磷酸二氢钾1～4g/L，pH4.5；C.液态发酵：将步骤B发酵得到的樟芝发酵液接种至含生长促进剂的液体发酵培养基继续发酵，控制培养温度为24～30℃、培养7～13d；D.固态发酵：将步骤B发酵得到的樟芝发酵液接种至含生长促进剂的固体培养基或新鲜的太空包继续发酵，控制培养温度为24～30℃、培养4～9月；太空包按质量比的组成为：香樟树木屑40～70份，麸皮5～25份，豆饼粉5～25份，硫酸镁0.15～3份，磷酸二氢钾0.15～3份，喷洒含0.1～10mM发酵促进剂的水溶液，调整水份至35～65％，混合所有物料制备太空包。可根据产品需求，选择A-B-C或A-B-D步骤进行发酵生产。发酵结束，取樟芝菌丝体或子实体烘干并粉碎。称取粉碎后的樟芝子实体菌粉0.05g，加入500μL甲醇，50Hz超声2h提取樟芝三萜，提取液利用齐墩果酸-香草醛-冰醋酸比色法测定樟芝三萜含量。本专利技术的积极作用在于：在发酵培养基中添加了经过试验筛选得出的发酵促进剂，刺激樟芝孢子萌发及菌丝生长，将樟芝的太空包固态发酵培养时间缩短到4～5月，降低了污染杂菌的概率，樟芝活性成分三萜提高了67.24％，且发酵促进剂用量极少且价格低廉，并不会明显增加生产成本。发酵结束后，可以利用菌体收集的水洗等工艺将发酵促进剂去除，发酵促进剂的残留浓度低于0.5mg/kg菌体，远低于《食品中污染物限量国家标准》规定限量一般为3～5mg/kg的要求，符合卫生部、国家食品药品监督管理局的相关标准。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。例如，本专利技术所述的基于该发酵促进剂的快速发酵工艺可应用于所有的樟芝菌种。又如，该发酵促进剂可用于樟芝斜面培养及种子制备发酵培养过程中生产樟芝菌丝体均属于本专利技术的范畴。具体实施方式以下通过实例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再做进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例11.樟芝菌丝体转接至PDA斜面培养基，24～30℃培养10～20d；2.樟芝斜面菌种接入种子培养基，在24～30℃培养10～20d得到含无性孢子种子液；种子培养基(g/L)：葡萄糖15～25，酵母粉0.5～2，硫酸镁0.5～2，磷酸二氢钾1～4，pH4.5；3.樟芝固态发酵培养基以重量百分比计算的组成为香樟树木屑30％～60％，麸皮5％～20％，豆饼粉5％～20％，硫酸镁0.15％～3％，磷酸二氢钾0.15％～3％，喷洒含30μM发酵促进剂香草醛的水溶液，调整水份至35-65％，混合所有物料制备太空包，每包1.0～5.0kg。将太空包置于100～180℃灭菌2～5h，冷却至室温备用。4.将事先准备好的樟芝菌种接种于太空包，然后将太空包放置温室，在24～30℃下培养1～2个月后去除太空包，加香草醛水溶液润湿以促进其表面子实体生长，培养5个月之后采收风干的樟芝子实体。5.称取粉碎后的樟芝子实体菌粉0.05g，加入500μL甲醇，50Hz超声2h提取樟芝三萜，提取液利用齐墩果酸-香草醛-冰醋酸比色法测定樟芝三萜含量，得到樟芝三萜含量分别为44.43mg/g。实施例21.樟芝菌丝体转接至PDA斜面培养基，24～30℃培养10～20d；2.樟芝斜面菌种接入种子培养基，在24～30℃培养10～20d得到含无性孢子种子液；种子培养基(g/L)：葡萄糖15～25，酵母粉0.5～2，硫酸镁0.5～2，磷酸二氢钾1～4，pH4.5；3.樟芝液态发酵培养，将樟芝种子液按体积比5％接种于樟芝液态发酵培养基(葡萄糖20g/L，酵母粉2g/L，硫酸镁1.5g/L，磷酸二氢钾3.0g/L，pH4.5)，在樟芝液态发酵培养基中添加阿魏酸30μM，26℃，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种樟芝快速发酵的生长促进剂，其特征为，该生长促进剂包含香草酸、肉桂酸、丁香酸、香草醛、阿魏酸、咖啡酸、苯甲酸、苯酚、苯甲醇、苯乙醇中的一种或几种，可促进液体发酵生产菌丝体、固态发酵生产樟芝子实体。

【技术特征摘要】
1.一种樟芝快速发酵的生长促进剂，其特征为，该生长促进剂包含香草酸、肉桂酸、丁香酸、香草醛、阿魏酸、咖啡酸、苯甲酸、苯酚、苯甲醇、苯乙醇中的一种或几种，可促进液体发酵生产菌丝体、固态发酵生产樟芝子实体。2.权利要求1所述的生长促进剂的使用方法，其特征为，该生长促进剂使用浓度范围为0.1～10mM，过滤除菌后在发酵培养工序中加入。3.如权利要求2所述的方法，其特征为，所述的生长促进剂经过滤除菌后在发酵培养过程中可一次或者多次添加。4.如权利要求2所述的方法，其特征为，所述的生长促进剂可在现有文献公开的所有樟芝发酵工艺中使用，均能缩短发酵周期，提高有效成分樟芝三萜的含量。5.一种采用生长促进剂的樟芝快速发酵方法，其特征为，该方法包括斜面培养、种子制备、液态发酵和固态发酵培养工序，如下所述：A.斜面培养：樟芝菌丝体转接至PDA斜面培养基，24～30℃培养10～30d；B.种子制备：樟芝斜面菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：许正宏，史劲松，陆震鸣，朱青，耿燕，许泓瑜，龚劲松，钱建瑛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32