一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法技术

本发明专利技术涉及一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，该方法包括以下步骤：1)用溶剂一提取动物性样品中的残留雌激素，得到提取物；2)采用强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取方法对提取物中的残留雌激素进行富集净化。该提取净化方法具有简单、便捷、快速、成本低等优点。

Method for extracting and purifying residual estrogen in animal sample

The invention relates to a method for purification of estrogen residue extracted a kind of animal in the sample, the method comprises the following steps: 1) obtained from the residual solvent extraction with estrogen, animal samples; 2) using strong anion exchange (PAX) as a solid adsorbent by dispersive solid phase extraction method of micro enrichment purification residue in the extract of estrogen. The extraction and purification method has the advantages of simplicity, convenience, speed, low cost, etc..

【技术实现步骤摘要】
一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法
本专利技术属于食品安全领域，具体涉及一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，还涉及一种检测动物性样品中残留雌激素的方法。
技术介绍
激素类药物包括雌激素、孕激素、雄激素、环境激素等。由于雌激素具有影响动物性别分化、缩短动物生长周期的效应,常被不法养殖户加入饲料中以提高饲养效率。在动物源性食品中经常会检测出残留的雌激素，例如雌二醇、雌三醇、雌酮、炔雌醇、乙烯雌酚、乙烷雌酚、己二烯雌酚等。这类雌激素一般较稳定,不易被降解,通过食物链进入人体后,仍具有较强的生物活性及潜在的致癌性。在检测动物性样品中残留雌激素样品时，前处理技术对于目标化合物的准确定性定量分析至关重要。对于动物性样品的前处理方法主要有液液萃取法(LLE)和固相萃取法(SPE)。由于LLE法需使用大量的有机溶剂，且操作较为繁琐而逐渐被SPE法所取代。SPE法基于其高富集能力以及良好的净化效果而被广泛应用于食品分析中，但SPE柱成本较高，需要固相萃取仪装置。近年来，基于SPE法的特点及不足，分散微固相萃取技术(DMSPE)得到一定的发展，其原理是将待净化提取液直接加入含有固体填料的离心管中，通过涡旋震荡离心等方式将待测目标物吸附于填料上，而后通过解吸附溶剂进行洗脱分析。目前，石墨烯和碳纳米管是该技术最为常用的固体吸附填料。为了实现简单、快速地检测动物性样品中的残留雌激素，需要更为简单快速的动物性样品前处理方法。
技术实现思路
专利技术人经过大量的实验，令人惊讶地发现，以强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取技术(DMSPE)对动物性样品进行前处理，对动物性样品中残留的雌激素净化效果很好，该方法简单、快捷，所需成本低，无需复杂的装置，净化效果好，完成一个样品的前处理仅需3分钟。其中，强阴离子交换填料(PAX)的结构式如下所示：基于上述发现，本专利技术提供一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，该方法包括以下步骤：1)用溶剂一(例如乙腈或乙腈水溶液)提取动物性样品中的残留雌激素，得到提取物；优选溶剂一为乙腈，溶剂一的用量优选为1～3mL/g动物性样品，例如2mL/g动物性样品；2)采用强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取方法对提取物中的残留雌激素进行富集净化。在一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，用溶剂提取前，动物性样品先经均质、酶解。在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，步骤1)得到的提取物为液体，步骤2)是将提取物与PAX填料取涡旋混匀，过滤，弃去滤液，用溶剂二(例如甲酸乙腈溶液)洗脱富集在PAX填料上的雌激素，收集洗脱液。优选采用0.22μm的有机相滤膜进行过滤。例如将提取物与PAX填料取涡旋混匀后，将其转移至带有0.22μm有机相滤膜的注射器过滤装置，弃去滤液。而后取甲酸乙腈溶液洗脱富集了雌激素的注射器过滤装置，收集洗脱液。在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，PAX填料的用量为30～60mg/mL提取物，优选为45～55mg/mL提取物，例如50mg/mL提取物；在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，所述的溶剂二是浓度为1～4v/v％的甲酸乙腈溶液，优选浓度为1.5～2.5v/v％的甲酸乙腈溶液，例如2v/v％的甲酸乙腈溶液。甲酸乙腈溶液的用量优选为1.5～2.5mL/mL提取物，优选为1.8～2.2mL/mL提取物，例如2mL/mL提取物。在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：收集洗脱液后，先除去洗脱液中的溶剂二，再用甲醇水溶液复溶，得到待分析样品。例如采用氮吹除去洗脱液中的溶剂甲酸乙腈溶液至近干，残留物用甲醇水溶液复溶。其中，甲醇水溶液的浓度优选为40～80v/v％，更优选为50～70v/v％，例如60v/v％的甲醇水溶液。甲醇水溶液的用量优选为80～120μL/mL提取物，例如100μL/mL提取物。在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，所述的均质是将动物性样品置于乙酸-乙酸钠缓冲溶液中涡旋混匀。乙酸-乙酸钠缓冲溶液的pH值优选为5～5.5，例如5.2。乙酸-乙酸钠缓冲溶液的用量优选为1.5～2.5mL/g动物性样品，例如2mL/g动物性样品。在另一个优选的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，其特征在于，所述的酶解是采用β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶的混合溶液进行酶解。β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶的混合溶液中β-葡萄糖醛酸酶的浓度优选为4～5U/mL(例如4.5U/mL)，芳香基硫酸酯酶的浓度优选为12～16U/mL(例如14U/mL)。在一个具体的实施方案中，本专利技术所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法包括如下步骤：1)称取5g动物性样品(例如猪肉或牛肉，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(配制方法：称取43.0g乙酸钠，加入22mL乙酸，用水溶解并定容到1000mL，用乙酸调节pH到5.2)，涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶的混合溶液(其中β-葡萄糖醛酸酶的浓度为4.5U/mL；芳香基硫酸酯酶的浓度为14U/mL)100μL，于37℃振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入内标物(例如氘代雌激素)，混匀，加入10mL乙腈超声提取30min后，加入2g氯化钠，涡旋混匀，4℃下10000r/min离心10min。将乙腈上清液转入洁净的50mL离心管中，混匀后，得到提取物，待净化；2)取1mL提取物至于2mL离心管中，加入50mgPAX填料，涡旋混匀1min后，将其转移至带有0.22μm有机相滤膜的1mL注射器过滤装置，弃去滤液。而后取2mL2％甲酸乙腈溶液洗脱富集分析物的注射器过滤装置，收集洗脱液，氮吹除去溶剂甲酸乙腈溶液至近干，残留物用100μL60v/v％甲醇水溶液复溶，得到待检测样品，供UPLC-MS/MS分析。本专利技术还提供一种检测动物性样品中残留雌激素的方法，其特征在于，该方法采用本专利技术前述任一项所述的动物性样品中残留雌激素的提取净化方法对动物性样品进行前处理。在一个优选的实施方案中，本专利技术所述的检测动物性样品中残留雌激素的方法，其特征在于，该方法采用液相色谱-质谱/质谱仪对样品进行检测，采用内标法定量。在一个具体的实施方案中，本专利技术所述的检测动物性样品中残留雌激素的方法，包括以下步骤：1)动物性样品经均质、酶解，用溶剂一(例如乙腈或乙腈水溶液)提取；2)采用强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取方法对提取物中的残留雌激素进行富集净化，得到待分析样品；3)采用液相色谱-质谱/质谱仪对待分析样品进行测定，内标法定量，优选地，内标物为氘代雌激素(例如氘代17β-雌二醇、氘代雌三醇、氘代雌酮、氘代炔雌醇、氘代己烯雌酚、氘代己烷雌酚、氘代己二烯雌酚)；优选地，色谱条件：流动相A为0.08～0.12％(例如0.1v/v％)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，该方法包括以下步骤：1)用溶剂一(例如乙腈或乙腈水溶液)提取动物性样品中的残留雌激素，得到提取物；优选溶剂一为乙腈，溶剂一的用量优选为1～3mL/g动物性样品，例如2mL/g动物性样品；2)采用强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取方法对提取物中的残留雌激素进行富集净化。

【技术特征摘要】
1.一种动物性样品中残留雌激素的提取净化方法，该方法包括以下步骤：1)用溶剂一(例如乙腈或乙腈水溶液)提取动物性样品中的残留雌激素，得到提取物；优选溶剂一为乙腈，溶剂一的用量优选为1～3mL/g动物性样品，例如2mL/g动物性样品；2)采用强阴离子交换填料(PAX)作为固体吸附剂，采用分散微固相萃取方法对提取物中的残留雌激素进行富集净化。2.权利要求1所述的提取净化方法，其特征在于，用溶剂提取前，动物性样品先经均质、酶解。3.权利要求1或2所述的提取净化方法，其特征在于，步骤1)得到的提取物为液体，步骤2)是将提取物与PAX填料取涡旋混匀，过滤，弃去滤液，用溶剂二(例如甲酸乙腈溶液)洗脱富集在PAX填料上的雌激素，收集洗脱液。4.权利要求3所述的提取净化方法，其特征在于，PAX填料的用量为30～60mg/mL提取物，优选为45～55mg/mL提取物，例如50mg/mL提取物；优选地，溶剂二是浓度为1～4v/v％的甲酸乙腈溶液，优选浓度为1.5～2.5v/v％的甲酸乙腈溶液，例如2v/v％的甲酸乙腈溶液；优选地，甲酸乙腈溶液的用量为1.5～2.5mL/mL提取物，优选为1.8～2.2mL/mL提取物，例如2mL/mL提取物。5.权利要求3或4所述的提取净化方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：除去洗脱液中的溶剂二，用甲醇水溶液复溶，得到待分析样品；优选甲醇水溶液的浓度为40～80v/v％，更优选为50～70v/v％，例如60v/v％的甲醇水溶液；优选地，甲醇水溶液的用量为80～120μL/mL提取物，例如100μL/mL提取物。6.权利要求2～5任一项所述的提取净化方法，其特征在于，均质是将动物性样品置于乙酸-乙酸钠缓冲溶液中涡旋混匀；优选地，乙酸-乙酸钠缓冲溶液的pH值为5～5.5，例如5.2；优选地，乙酸-乙酸钠缓冲溶液的用量为1.5～2.5mL/g动物性样品，例如2mL/g动物性样品。7.权利要求2～6任一项所述的提取净化方法，其特征在于，酶解是采用β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈达炜，王竹天，赵云峰，
申请(专利权)人：国家食品安全风险评估中心，
类型：发明
国别省市：北京,11