真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用，所述真核翻译延伸因子包括真核翻译延伸因子1δ和真核翻译延伸因子2。本发明专利技术进一步公开了检测真核翻译延伸因子易感SNP位点基因型的试剂及其制备的试剂盒。本发明专利技术通过真核翻译延伸因子的SNP生物标志物和诊断试剂盒的研制和应用，可使得乳腺癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。

【技术实现步骤摘要】
真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用。
技术介绍
乳腺癌是一种全身性疾病、其发生和发展是一个涉及多因素、多环节的复杂过程，包括癌基因的激活以及抑癌基因的失活等。因此，基因突变在乳腺癌的发生、发展过程中起着非常重要的作用。乳腺癌是一个多因素遗传变异性疾病，只有不足10％是由于单基因缺陷引起的。随着高通量基因技术的发展，越来越多与乳腺癌相关基因被发现，这些基因上潜在的遗传变异(单核苷酸多态和拷贝数变异)可能引起乳腺癌药物治疗效果的差异。由于遗传变异的存在使抗肿瘤药物的代谢途径以及药物作用的目标基因可能受到影响，进而影响疗效以及预后。SNP(singlenucleotidepolymorphism，SNP，即单核苷酸多态性)是1996年由美国麻省理工学院的人类基因组研究中心学者Lander提出的一类分子遗传标记，主要是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP表现出的多态性仅涉及到单个碱基的变异，表现是有转换、颠换、插入和缺失等。单核苷酸多态性为第三代遗传标志，人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关。目前对于不同分型乳腺癌预后、疗效的预测性研究主要集中在SNP水平。SNP赋予个体对环境暴露、药物治疗等的不同反应，从而产生不同的表型，因此SNP可能是导致个体疾病发生发展差异的重要遗传基础。利用疾病易感的SNP谱诊断疾病，具有快速、灵敏、准确等特点，因而应用前景广阔。近年来，利用SNP诊断疾病的发生发展已成为临床和科研工作者的研究热点。然而，目前还没有将SNP应用于乳腺癌诊断的报道，若能筛选出乳腺癌易感的SNP作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，必将有力地推动我国乳腺癌早期诊断的现状，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗开辟新的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术问题，提出一种EEF1D易感SNP位点。本专利技术的第二个目的是提供检测EEF1D易感SNP位点基因型的试剂。本专利技术的第三个目的是提供乳腺癌辅助诊断试剂盒。专利技术人通过分离和研究乳腺癌患者及与其年龄匹配的健康女性对照外周血DNA中的单核苷酸多态性，寻找一组与乳腺癌高度相关的高特异性和敏感性的SNP，并研制出可便于临床应用的乳腺癌辅助诊断试剂盒，为乳腺癌的筛查和诊断提供数据支持。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：本专利技术首先提供了真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用，所述真核翻译延伸因子包括真核翻译延伸因子1δ和真核翻译延伸因子2。具体地，所述检测乳腺癌试剂是指检测真核翻译延伸因子易感SNP位点基因型的试剂。所述真核翻译延伸因子1δ的SNP位点是位于人类第8染色体第144671461位碱基由G到A的SNP位点突变，所述真核翻译延伸因子2的SNP位点是位于人类第19染色体第3977255位碱基由M到V的SNP位点突变。所述位点突变具体信息为EEF1D：NM_001130053：exon3：c.G791A：p.R264Q，EEF2：NM_001961：exon14：c.A2341G：p.M781V。其中，EEF1D(eukaryotictranslationelongationfactor1delta，真核翻译延伸因子1δ)，该基因编码翻译延伸因子1复合物的eEF1Bδ亚基，这个复合物负责氨基酰tRNA进入核糖体的酶促降解。eEF1Bδ亚基在复合物中发挥鸟嘌呤核苷酸转换因子的作用。据报道，HIV-1感染后，该亚基与HIV-1Tat蛋白相互作用，这种相互作用抑制了宿主细胞蛋白的翻译但却增强了病毒蛋白的翻译过程。这种错误翻译影响了多个剪接体变异并翻译形成了多个编码异构体，从而导致了许多假基因的出现，如分别在染色体1，6，7，9，11，13，17，19上发现了该基因的假基因(由RefSeq提供，Aug2010)。EEF2，(eukaryotictranslationelongationfactor2，真核翻译延伸因子2)，该基因编码GTP结合翻译延伸因子家族中的一员，其编码蛋白是蛋白合成中的重要因子，它促进了蛋白质链合成初期核糖体A位点到P位点GTP依赖的翻译。这种蛋白在EF-2激酶磷酰化时是完全失活的。由UniProt-GOA提供geneontology分析表明这些基因除了参与翻译延伸外，EEF1D基因还参与转录调控和信号转导等过程，具有翻译延伸因子活性、翻译因子活性和信号转导活性等；而EEF2基因还参与GTP结合、肌动蛋白丝结合、蛋白激酶结合和核糖体结合等功能。所述NM_001130053是EEF1D的一个转录本，所述SNP位点突变发生在该转录本的第3个外显子上，并且第791位发生了由G到A的错义突变，该突变导致了编码蛋白由精氨酸R到谷氨酰胺Q的转变。所述NM_001961是EEF2的一个转录本，所述SNP位点突变发生在该转录本的第14个外显子上，并且第2341位发生了由A到G的错义突变，该突变导致了编码蛋白由蛋氨酸M到缬氨酸V的转变。进一步地，本专利技术提供了一种检测真核翻译延伸因子易感SNP位点基因型的试剂，所述试剂包括用于扩增所述SNP位点的引物对，或是包括用于扩增所述SNP位点的引物对和限制性内切酶；所述SNP位点是位于人类第8染色体第144671461位碱基由G到A的SNP位点突变，所述EEF2的SNP位点是位于人类第19染色体第3977255位碱基由M到V的SNP位点突变。优选的，扩增所述EEF1D和EEF2的SNP位点的引物对是按照PrimerPremier5引物设计软件或NCBI数据库提供的在线引物设计软件设计的引物对，在一优选实施例中本专利技术选用如SEQIDNO：3-4所示的引物对扩增EEF1D基因，扩增的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；选用如SEQIDNO：7-8所示的引物对扩增EEF2基因，扩增的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示。本专利技术选用的引物对特异性强，扩增效果好，扩增的序列亦可作为乳腺癌诊断、预测、评估等分子手段的生物标志物。更进一步地，本专利技术提供了一种乳腺癌辅助诊断的试剂盒，其包括检测EEF1D：NM_001130053：exon3：c.G791A和EEF2：NM_001961：exon14：c.A2341G的SNP位点基因型的试剂。优选的，所述的试剂包括用于扩增所述SNP位点的引物对，或是包括用于扩增所述SNP位点的引物对和限制性内切酶。优选的，扩增所述SNP位点的引物对是按照PrimerPremier5引物设计软件或NCBI数据库提供的在线引物设计软件设计的引物对，在一优选实施例中本专利技术选用如SEQIDNO：3-4所示的引物对扩增EEF1D基因，选用如SEQIDNO：7-8所示的引物对扩增EEF2基因，本专利技术选用的引物对特异性强，扩增效果好。优选的，所述试剂盒还包括PCR反应常用的酶和试剂，如dNTPs、Taq酶、Mg2+、PCR反应缓冲液等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术有益效果：本专利技术研究SNP在乳腺癌辅助诊断的应用前景，阐述SNP对于乳腺癌进展的影响，揭示其诊断价值。因此，本专利技术通过SNP基因型诊断试剂和诊断试剂盒的研制和应用，可使得乳腺癌的诊断更加方便易行，为临床医本文档来自技高网...

【技术保护点】
真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用，其特征在于，所述真核翻译延伸因子包括真核翻译延伸因子1δ和真核翻译延伸因子2。

【技术特征摘要】
1.真核翻译延伸因子在检测乳腺癌试剂中的应用，其特征在于，所述真核翻译延伸因子包括真核翻译延伸因子1δ和真核翻译延伸因子2。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测乳腺癌试剂是指检测真核翻译延伸因子易感SNP位点基因型的试剂。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述真核翻译延伸因子1δ的SNP位点是位于人类第8染色体第144671461位碱基由G到A的SNP位点突变，所述真核翻译延伸因子2的SNP位点是位于人类第19染色体第3977255位碱基由M到V的SNP位点突变。4.一种检测真核翻译延伸因子易感SNP位点基因型的试剂，其特征在于，所述试剂包括用于扩增所述SNP位点的引物对，或是包括用于扩增所述SNP位点的引物对和限制性内切酶；所述EEF1D的SNP位点是位于人类第8染色体第144671461位碱基由G到A的SNP位点突变，所述EEF2的SNP位点是位于人类第19染色体第3977255位碱基由M到V的SNP位点突变。5.如权利要求4所述的试剂，其特征在于，扩增所述EEF1D的SNP位...

【专利技术属性】
技术研发人员：付利，何劲松，谭斌斌，陈伟财，邹畅，向迪，刘蓓蕾，罗雪莹，潘悦，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44