一种用于芽孢杆菌的培养液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于芽孢杆菌的培养液，包括以下质量百分比的组分：碳源1.50‑3.00％、氮源0.30‑1.00％、酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨0.10‑0.50％、K

【技术实现步骤摘要】
一种用于芽孢杆菌的培养液及其制备方法和应用
本专利技术属于微生物肥料与微生物农药
，具体涉及一种用于芽孢杆菌类微生物菌剂的培养液，本专利技术还涉及该芽孢杆菌培养液的制备方法及其植物病虫害防治上的应用。
技术介绍
化学农药大量使用导致食品的农药残留和已经由此造成的环境污染问题，严重威胁人类健康，另外，大量化学农药的使用，容易使害虫和植物病原菌产生抗药性而降低了防效。生物农药因环境友好、无公害、不产生抗性等特点被认为是化学农药较好的替代品。芽孢杆菌是植物叶表和根际有益微生物，同时还是植物体内常见的内生细菌。芽孢杆菌通过拮抗作用、竞争作用、诱导抗性等机制达到植物病虫害防治、促进植物生长的作用。当前芽孢杆菌菌剂的使用普遍采用发酵后回收芽孢，制备成各种剂型使用，一方面丢弃了发酵液中产生的对病虫害有效的生物活性物质，而且芽孢的萌发需要一定时间，与现场发酵的微生物菌剂相比，使用效果大大降低；且在加工、储藏及使用过程中有效活菌数也有所降低，后处理过程增加了生产成本。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种可实现现场小规模扩大培养的芽孢杆菌培养液及其制备方法和应用。本专利技术所采用的技术方案如下：一种用于芽孢杆菌的培养液，所述培养液包括以下质量百分比的组分：碳源1.50-3.00％、氮源0.30-1.00％、酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨0.10-0.50％、K2HPO4或KH2PO40.10-0.30％、MgSO4·7H2O0.02-0.05％、MnSO4·H2O0.01-0.02％、NaOH0.05-0.10％、消泡剂1.00-2.00‰、芽孢杆菌种子0.10％-1.00％、余下为水。在上述技术方案的基础上，上述芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的一种或多种。上述碳源为玉米淀粉、可溶性淀粉、蔗糖以及葡萄糖的一种或多种。上述氮源为豆粕粉、黄豆粉、棉籽粉、鱼粉以及花生粉的一种或多种。本专利技术用于芽孢杆菌的培养液的制备方法，包括如下步骤：1)基础培养液的制备及灭菌处理称取如下质量百分比的组分：碳源1.50-3.00％、氮源0.30-1.00％、酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨0.10-0.50％、K2HPO4或KH2PO40.10-0.30％、MgSO4·7H2O0.02-0.05％、MnSO4·H2O0.01-0.02％、NaOH0.05-0.10％，将其中的颗粒、粉状料过60目筛，再加入发酵设备中与纯净水混匀后得到基础培养液；然后将1.00-2.00‰消泡剂加入发酵设备中，加热培养液至100℃后，保温30min，降温至80℃备用；2)芽孢杆菌种子热处理将0.10％-1.00％的芽孢杆菌种子加到上述冷却到80℃的培养液中，加热处理5-30min后，再通气降温至30℃-42℃；3)现场培养对步骤2)所得液体通压缩空气进行培养，培养条件为通气量0.4-1.5vvm，温度30-42℃，培养时间24-28h，得培养液后直接稀释应用或在4℃温度下储藏，即得到芽孢杆菌培养液。本专利技术芽孢杆菌培养液在应用于水稻稻瘟病、豇豆立枯病和西瓜枯萎病的防治时，将现场培养得到的芽孢杆菌培养液以自来水稀释100-300倍后，按每亩50-100kg量喷雾或灌溉，在植物的生长期每隔7-15天使用一次。当上述芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌时，现场培养得到的解淀粉芽孢杆菌以自来水稀释100-300倍后，按每亩50-100kg量喷雾，在植物的生长期每隔10-15天使用一次。当上述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌时，现场培养得到的枯草芽孢杆菌培养液以自来水稀释100-200倍后，按每亩60-80kg量喷雾或灌溉，在植物的生长期每隔10-15天使用一次。当上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌时，现场培养得到的地衣芽孢杆菌以自来水稀释200-300倍后喷雾或灌溉，在植物的生长期每隔10-15天使用一次。本专利技术的积极效果是：1、培养条件简单：对培养设备要求不高，只需具有加热功能的简易移动发酵设备和通气装置，便可实现繁殖培养，方便现场使用。2、本专利技术无需预先对培养用的芽孢杆菌种子进行活化及对种子较为严格的无菌保存；对液体培养基、种子处理方式可杀灭培养系统中的非芽孢杂菌，同时提高了芽孢萌发率及芽孢活力。3、本专利技术优化的芽孢杆菌培养基可将实现芽孢杆菌生物量提升近100-500倍高达1×1010CFU/ml，且为芽孢杆菌营养体和芽孢的混合状态，发酵液中产生的活性物质和微生物菌体同时使用，使用效果得到显著提升。与传统技术相比，本专利技术的优点在于在非无菌密闭条件下，可实现现场小规模的扩大培养，既提高了使用效果，也降低了生产成本。在农业微生物菌剂、微生物农药、环保微生物菌剂的现场培养方面具广阔的应用前景。具体实施方式为便于理解本专利技术，本专利技术列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。如无具体说明，本专利技术的各种原料均可以通过市售得到；或根据本领域的常规方法制备得到。除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练入员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术方法中。除非另外说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。实施例1解淀粉芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法及其应用1、制备方法如下：培养前清洗设备，用自来水清洗发酵罐及其配件至无培养物残留。取2.00％可溶性淀粉，1.00％大豆蛋白粉，0.50％酵母粉，0.30％KH2PO4，0.05％MgSO4·7H2O，0.02％MnSO4·H2O，0.08％NaOH加入到扩培罐中配制基础培养液，再加入1.00‰消泡剂，补水至140L。将培养液加热至100℃后热处理30-60分钟，然后降温至80℃后，将1.00％解淀粉芽孢杆菌种子加到培养液中热处理30min后，通气降温至35℃。对上述所得液体通空气进行培养，培养条件为通气量约0.8-1.0vvm，温度32℃，培养时间36-48h，得培养液在4℃温度下储藏备用，所述培养液处于芽孢和营养体混合状态，发酵液中无致病菌和其他污染菌检出，生物量增加近100倍达1.0×109CFU/ml。本实施例使用的解淀粉芽孢杆菌种子为陕西先农生物科技有限公司生产，登记证号：D20160356，有效成分为解淀粉芽孢杆菌B7900，含量为1.0×109CFU/g的可湿性粉剂。2、解淀粉芽孢杆菌培养液在防治水稻稻瘟病的应用使用时兑自来水稀释200倍，按照每亩80kg量喷雾。每隔10天喷雾一次，共处理3次。分别于施药前调查病情基数，每次施药后10天调查叶瘟病情指数。病情指数调查参照GBT15790-2009稻瘟病测报调查规范。根据平均病情指数计算防治效果，本实施例的培养液与对照培养液的防效比较如下表所示：实施例2枯草芽孢杆菌微生物菌剂的制备方法及其应用1、制备方法如下：扩培前清洗设备，用自来水清洗热水桶及其配件至无培养物残留。将玉米淀粉、黄豆粉过60目筛，取1.50％玉米淀粉，0.50％黄豆粉，0.50％玉米浆粉，0.20％KH2PO4，0.03％MgSO4·7H2O，0.01％MnSO4·H2O，0.10％NaOH，加入到扩培罐中配制基础培养液，再加入1.00‰消泡剂，补水至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于芽孢杆菌的培养液，其特征在于，所述培养液包括以下质量百分比的组分：碳源                          1.50‑3.00％氮源                          0.30‑1.00％酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨  0.10‑0.50％K

【技术特征摘要】
1.一种用于芽孢杆菌的培养液，其特征在于，所述培养液包括以下质量百分比的组分：碳源1.50-3.00％氮源0.30-1.00％酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨0.10-0.50％K2HPO4或KH2PO40.10-0.30％MgSO4·7H2O0.02-0.05％MnSO4·H2O0.01-0.02％NaOH0.05-0.10％消泡剂1.00-2.00‰芽孢杆菌种子0.10％-1.00％余下为水。2.如权利要求1所述的一种用于芽孢杆菌的培养液，其特征在于：所述芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的一种或多种。3.如权利要求1所述的一种用于芽孢杆菌的培养液，其特征在于：所述碳源为玉米淀粉、可溶性淀粉、蔗糖以及葡萄糖的一种或多种。4.如权利要求1所述的一种用于芽孢杆菌的培养液，其特征在于：所述氮源为豆粕粉、黄豆粉、棉籽粉、鱼粉以及花生粉的一种或多种。5.一种权利要求1至4任一项所述用于芽孢杆菌培养液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)基础培养液的制备及灭菌处理称取如下质量百分比的组分：碳源1.50-3.00％、氮源0.30-1.00％、酵母抽提物或玉米浆粉或蛋白胨0.10-0.50％、K2HPO4或KH2PO40.10-0.30％、MgSO4·7H2O0.02-0.05％、MnSO4·H2O0.01-0.02％、NaOH0.05-0.10％，将颗粒、粉状料过60目筛，再加入发酵设备中与纯净水混匀后得到基础培养液；然后将1.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄亦存，尹春林，罗江龙，
申请(专利权)人：安徽棵康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34