J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于动物疾病检测技术领域，公开了J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用。本发明专利技术所述J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。实验表明，该抗原表位对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应，能够特异性识别J亚群禽白血病病毒。本发明专利技术所述融合蛋白能够制成疫苗，刺激受体产生抗体，保护受体抵抗J亚群禽白血病病毒感染。本发明专利技术所述融合蛋白免疫动物可制备J亚群禽白血病病毒特异性抗体。本发明专利技术所述J亚群禽白血病病毒特异性抗体可以与J亚群禽白血病特异性抗原表位特异性识别，开发检测试剂盒，用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。

J subgroup avian leukosis virus specific antigen epitope, fusion protein, specific antibody and uses thereof

The present invention belongs to the field of animal disease detection technology, and discloses J subgroup avian leukosis virus specific antigen epitope, fusion protein, specific antibody and application thereof. The invention of subgroup J avian leukosis virus specific epitopes of its amino acid sequence is shown as SEQ ID NO:1. The experiment showed that the epitope reacted with J subgroup serum and did not respond to AB subgroup serum, and could recognize J subgroup avian leukosis virus specifically. The fusion protein of the invention can be used as a vaccine to stimulate the receptor to produce antibodies, and to protect the receptor against J subgroup avian leukosis virus infection. The fusion protein immune animal of the invention can prepare J subgroup avian leukosis virus specific antibodies. The J subgroup avian leukosis virus specific antibodies of the present invention can be specifically identified with the J subgroup avian specific antigen epitope, and development detection kits are used to distinguish between AB subgroup and J subgroup avian leukosis.

【技术实现步骤摘要】
J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用
本专利技术属于动物疾病检测
，具体涉及J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用，尤其是J亚群禽白血病病毒GP85型特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及J亚群禽白血病检测试剂盒。
技术介绍
禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)和禽肉瘤病病毒(ASV)引起的禽类肿瘤性疾病，对我国养鸡业危害重大。ALV/ASV可分为A-J10个亚群，其中A、B和J亚群为发生于田间鸡的外源性病毒。目前该病尚无有效治疗手段，主要通过排除阳性鸡净化种群来控制该病传播。J亚型ALV可水平传播和垂直传播，垂直传递可导致子代免疫耐受，抗体检测表现为阴性。同时发病鸡出现急性肿瘤引起死亡，一旦发现患病需立即处理。AB亚型ALV主要通过垂直传播影响鸡雏质量，病鸡体重增长缓慢，产蛋量减少。对于J亚型和AB亚型ALV的诊断有助于根据不同亚群病毒引起的机理和症状进行禽白血病的防控，而鸡场也可根据成本和需求对病鸡进行分批次处理，减少经济损失。抗原表位是指位于抗原分子表面具有特殊结构和免疫活性的化学基团，可刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能被其识别的部位，又称抗原决定簇，禽白血病病毒RNA编码区翻译gag-pol-env。gag基因编码病毒内部结构的核衣壳蛋白主要有P27、P19、P15、P12四种蛋白，P27蛋白在禽白血病毒中高度保守，已根据P27蛋白开发出多种禽白血病检测试剂盒。但只能用于检测ALV病毒不能区别各病毒亚群。Env是囊膜糖基化表面蛋白，水解后形成膜表面蛋白SU(surfaceglycoprotein)(gp85基因编码)和跨膜蛋白TM(transmembraneprotein)(gp37基因编码)，gp85决定病毒亚群特异性和宿主范围，是抗原表位的主要潜在区域。目前对禽白血病特异性亚群特异性抗原表位的研究工作都是基于gp85蛋白进行。目前对亚群特异性抗原表位研究的方法局限于对所研究的特定亚群gp85蛋白进行分析，如定位J亚群抗原表位只针对J亚群gp85蛋白进行分析，检测方法中待测样品为J亚群特异性血清或ALV-J蛋白制备的鼠单抗，这种方法能找到的J亚群抗原表位但是特异性不强，不能排除找到的抗原表位区域包含有其他禽白血病亚群的抗原识别位点。在用重组蛋白对不同亚型禽白血病病毒感染血清进行区分时，由于各亚群gp85蛋白存在一定的同源性，所以无法对禽白血病抗体亚型进行体外诊断。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术的缺陷，提供J亚群特异性抗原表位，继而开发检测试剂盒用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位，其氨基酸序列如SEQIDNO：1或SEQIDNO：2所示。申请人通过比对不同亚群gp85蛋白序列，找到AB亚群和J亚群gp85蛋白的差异性区域，从差异性区域筛选来源于AB亚群和J亚群的15个多肽进行合成，精确找到可区分禽白血病AB亚群和J亚群的多肽，同时免疫实验分析15个多肽时采用AB亚群特异性血清和J亚群特异性血清为样本，如某J亚群来源多肽对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应即为J亚群特异性抗原表位。相比于以前的研究来说，可找到能区分AB亚群和J亚群的特异性抗原表位。其中，一种J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位的氨基酸序列为NGTNRTCVTFGSVCYEENSRSRVCHIFDGNFNGTG(J-Pep5，SEQIDNO：1)。实验表明，该抗原表位对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应，能够特异性识别J亚群禽白血病病毒。本专利技术还提供了编码本专利技术所述特异性抗原表位的DNA分子。由于密码子的简并性，可以存在很多种能够编码本专利技术所述的特异性抗原表位的核苷酸序列。本专利技术还提供了一种重组表达载体，含有本专利技术所述的DNA分子。另一方面，本专利技术还提供了一种工程菌，其含有本专利技术所述的重组表达载体。在本专利技术中，“工程菌”通过将重组表达载体热激转化进入宿主细胞所获得。本专利技术中所表达的“宿主细胞”包括原核或真核细胞。所述宿主细胞选自大肠杆菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌。本专利技术所述的特异性抗原表位、DNA分子、重组表达载体、或所述工程菌都有益于禽白血病的预防或治疗，因此本专利技术提供了所述特异性抗原表位、DNA分子、重组表达载体、或所述工程菌在制备预防或治疗禽白血病的药物中的应用。所述特异性抗原表位、DNA分子、重组表达载体、或所述工程菌可单独使用，也可联合使用，或与其它已知药物联合使用。进一步的，优选的，所述药物为疫苗。可直接作用到患者的受影响器官，也可全身给药。本专利技术还提供了由所述工程菌表达的融合蛋白。所述工程菌经诱导后表达，分离纯化可获得表达的融合蛋白。本专利技术所述融合蛋白能够刺激受体产生抗体，保护受体抵抗J亚群禽白血病病毒感染。因此，本专利技术提供的融合蛋白能够制成疫苗用于预防J亚群禽白血病病毒的感染。本专利技术还要求保护一种疫苗，包括本专利技术所述融合蛋白。进一步的，所述疫苗还包括佐剂。作为优选，佐剂为氢氧化铝佐剂、弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。本专利技术还要求保护J亚群禽白血病病毒特异性抗体，其是由所述融合蛋白免疫动物制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。本专利技术所述J亚群禽白血病病毒特异性抗体可以与J亚群禽白血病特异性抗原表位特异性识别，开发检测试剂盒，用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。因此本专利技术提供了所述J亚群禽白血病病毒特异性抗体在制备J亚群禽白血病检测试剂盒中的应用。同时本专利技术还提供了一种J亚群禽白血病检测试剂盒，其含有：(1)本专利技术所述的特异性抗原表位或本专利技术所述融合蛋白；和/或(2)本专利技术所述的J亚群禽白血病病毒特异性抗体。作为优选，所述的J亚群禽白血病病毒特异性抗体可以为单克隆抗体，也可以为多克隆抗体。作为优选，本专利技术所述的试剂盒中还包括酶标板。本领域技术人员可以理解，本专利技术提供的试剂盒可将融合蛋白固定于酶标板用于J亚群禽白血病病毒特异性抗体，也可将J亚群禽白血病病毒特异性抗体包被于酶标板，用于检测融合蛋白。进一步的，作为优选，本专利技术所述试剂盒还包括包被液、封闭液、二抗、显色液、终止液。由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位、融合蛋白、特异性抗体及其应用。本专利技术所述J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。实验表明，该抗原表位对J亚群血清有反应同时对AB亚群血清无反应，能够特异性识别J亚群禽白血病病毒。本专利技术所述融合蛋白能够制成疫苗，刺激受体产生抗体，保护受体抵抗J亚群禽白血病病毒感染。本专利技术所述融合蛋白免疫动物可制备J亚群禽白血病病毒特异性抗体。本专利技术所述J亚群禽白血病病毒特异性抗体可以与J亚群禽白血病特异性抗原表位特异性识别，开发检测试剂盒，用于区分AB亚群和J亚群禽白血病。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示ALV-A，ALV-B，ALV-J病毒的gp85蛋白序列比对图；图2为多肽与特异性血清的反应效果。具体实施方式本专利技术公开了J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位及其应用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.J亚群禽白血病病毒特异性抗原表位，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.编码权利要求1所述特异性抗原表位的DNA分子。3.一种重组表达载体，其含有权利要求2所述核苷酸序列。4.一种工程菌，其含有权利要求3所述的重组表达载体。5.权利要求1所述的特异性抗原表位、权利要求2所述的DNA分子、权利要求3所述的重组表达载体、或权利要求4所述工程菌在制备预防或治疗禽白血病的药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永强，曹红，李晓齐，郑世军，陈福勇，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11