一种菲骈吲哚里西啶生物碱及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种菲骈吲哚里西啶生物碱及其制备方法和应用。以中草药白薇为原料，用溶剂提取，提取物经过正丁醇溶剂萃取后，萃取物依次经过大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS‑C

A Philippines Pian indolizidine alkaloid and preparation method thereof

The invention discloses a phenanthroindolizidine quinolizidine alkaloids in preparation method and application thereof. Bai Wei to Chinese herbal medicine as raw material, solvent extraction, n-butanol extract by solvent extraction, extraction followed by macroporous resin column chromatography, silica gel column chromatography, ODS C

【技术实现步骤摘要】
一种菲骈吲哚里西啶生物碱及其制备方法
本专利技术涉及水果病害防治和保鲜领域，具体地指一种具有抑制柑橘采后病原菌作用的菲骈吲哚里西啶生物碱及其制备方法。
技术介绍
白薇(Cynanchumatratum)是萝摩科白前属植物白薇或蔓生白薇的干燥根和根茎，为一种临床常用的清虚热中药材，收载于多部中医药古籍中。据《中药大辞典》记载，白薇性寒，味苦、咸，有清热凉血、利尿通淋、解毒疗疮的功效，中医临床用于温邪伤营发热、阴虚发热、骨蒸劳热、产后血虚发热、热淋、血淋、痈疽肿毒等症。化学成分及药理活性研究表明，白薇主要含有C21甾体皂苷、强心苷、白薇素、挥发油等成分，具有退热、消炎、抗肿瘤和祛痰镇咳平喘的药效作用，其中C21甾体皂苷为白薇的主要活性成分[袁鹰,张卫东,柳润辉,扈晓佳,苏娟,郑兆广,张薇.白薇的化学成分和药理研究进展[J].药学实践杂志,2007,25(1):6-9]。由意大利青霉(Penicilliumitalicum)引起的青霉病和指状青霉(Penicilliumdigitatum)引起的绿霉病，是造成柑橘采后腐烂发生的最主要的两种病害，腐烂率一般为10％～30％，严重时甚至可高达40％～50％以上，造成巨大的经济损失。长期以来，主要采用化学合成药剂如咪鲜胺、百可得等作为保鲜剂对柑橘进行保鲜，这些化学杀菌剂能杀死或抑制病原微生物的生长，有较好的防腐保鲜效果，但同样会造成药剂残留、污染环境，抗药性等弊端。另外，一些化学防腐剂有潜在的致癌、致突变、致畸的可能性。近年来，人们开始转向从天然植物中寻找安全环保的柑橘植物源保鲜剂。天然植物源保鲜剂具有高效、低毒、低残留、无污染、使用安全等优点，在应用上易受消费者欢迎。另外，植物源药剂不易产生抗药性和不会造成环境污染问题。因此，有必要从天然植物中寻找、开发天然植物源防腐剂对柑橘进行保鲜以减少对化学药剂的依赖。菲骈吲哚里西啶生物碱化合物，主要来自萝摩科的娃儿藤属(Tylophora)、鹅绒藤属(CynanchumL.)、夜来香属(PergulariaL.)和桑科榕属(FicusL.)、爵床科枪刀属(Hypoestes)、樟科厚壳桂属(Cryptocarya)、Vincetoxicum属以及斑蝶科斑蝶属(Ideopsis)，具有许多重要的生理活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗菌、杀虫和除草等活性[张成刚,谭显东.菲并吲哚里西定类生物碱的研究进展[J].四川师范大学学报:自然科学版,2005,28(3):366-370]。菲骈吲哚里西啶生物碱类化合物的抗菌活性仅有其对番茄早疫Alternariasolani、花生褐斑Cercosporaarachidicola、苹果轮纹Physalosporapincola和黄瓜枯萎Cladosporiumcucumerium这四种菌体的抑菌作用报道[王开亮,吴萌,刘智慧,苏波,李玲,刘玉秀,黄润秋,刘育,汪清民.菲并吲哚里西啶生物碱及其盐衍生物的生物活性研究[J].农药学学报,2010,12(4):507-510.]。这四种菌分别属于链格孢属、尾孢属、囊孢菌属和枝孢属。这与本专利技术的用途抑制意大利青霉菌(Penicilliumitalicum)作用不同，而意大利青霉菌属于青霉属。现有技术中也没有菲骈吲哚里西啶生物碱类化合物对意大利青霉菌抑制作用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的就是要克服现有技术所存在的不足，提供一种从白薇中分离制备一个菲骈吲哚里西啶生物碱类。为实现上述目的，本专利技术所提供的菲骈吲哚里西啶生物碱，其特别之处在于：以中草药白薇为原料，用溶剂提取，提取物经过正丁醇溶剂萃取后，萃取物依次经过大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS-C18反向硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和制备高效液相色谱分离，分离得到菲骈吲哚里西啶生物碱化合物1，结构如下所示：经鉴定化合物1为7-脱甲氧基娃儿藤碱。上述菲骈吲哚里西啶生物碱的制备方法，包括以下步骤：1)取白薇药材，粉碎后，用10～50倍药材重量的溶剂提取，溶剂为5～100％乙醇水溶液、5～100％甲醇水溶液、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮，提取方法为浸泡提取、加热回流、超声波辅助提取、微波辅助提取或超临界二氧化碳萃取，提取时间10～150min，提取1～4次，合并提取液过滤，减压浓缩回收溶剂即得白薇提取物；2)将步骤1)中的白薇提取物悬浮于8～15倍白薇提取物重量的蒸馏水中，用等体积的正丁醇溶剂萃取三次，合并正丁醇萃取液减压浓缩回收溶剂即得白薇正丁醇萃取物；3)将步骤2)中的白薇正丁醇萃取物悬浮于5～10倍白薇正丁醇萃取物重量的蒸馏水中，经大孔树脂柱层析，分别用纯水、5倍柱体积的30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和95％乙醇梯度洗脱，分别收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂；4)将步骤3)中乙醇洗脱物依次经硅胶柱层析、ODS-C18反向硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和制备高效液相色谱进行分离，采取薄层层析法或HPLC分析，分离得到7-脱甲氧基娃儿藤碱。制备方法的步骤4)中，所用硅胶柱层析为开放柱层析或加压柱层析，所用填料为硅胶，用体积比100:1、50:1、30:1、10:1、8:1、6:1、5:1、4:1、2:1的氯仿—甲醇溶剂系统洗脱。制备方法的步骤4)中，所用ODS-C18反向硅胶柱层析为加压柱层析，所用填料为ODS-C18反向硅胶，用体积比50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0的甲醇—水溶剂系统洗脱。制备方法的步骤4)中，所用SephadexLH-20凝胶柱层析为常压柱层析，所用填料为SephadexLH-20，采用甲醇洗脱。制备方法的步骤4)中，制备高效液相色谱所用色谱柱为C18反向柱，流动相A为甲醇，流动相B为含0.1％三氟乙酸的水，柱温为30℃，流动相流速为3.0mL/min；梯度洗脱程序如下：本专利技术还研究了7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉有抑菌活性，可应用于制备柑橘采后防腐保鲜剂中。本专利技术的有益效果在于：本专利技术对白薇抑制柑橘采后病害菌的活性成分进行靶向分离，采用大孔树脂柱层析、ODS-C18反向硅胶柱层析、硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和制备高效液相色谱(HPLC)的方法，根据本技术研究结果看，它一次可以同时制备得到多个生物碱类化合物。采用本专利技术优化后的制备方法得到白薇提取物不再是组分庞杂，而是纯度更高(可达98.5％以上)、组分类型一致、抑菌活性更强的单体化合物物。本专利技术通过对化合物的抑菌活性测试，发现此菲骈吲哚里西啶生物碱(7-脱甲氧基娃儿藤碱)对意大利青霉菌有很好的抑菌活性，为白薇的抑菌活性成分。因此，菲骈吲哚里西啶生物碱类化合物可以进一步开发用来制备成一种新型的植物源柑橘防腐保鲜剂。附图说明图1A为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝相对电导率的影响图。图1B为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝相对裂解率的影响图。图2A为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝总糖含量的影响图。图2B为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝培养液糖含量的影响图。图3A为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝蛋白质含量的影响图。图3B为7-脱甲氧基娃儿藤碱对意大利青霉菌丝培养液蛋白含量的影响图。图4A为7-脱甲氧基娃儿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菲骈吲哚里西啶生物碱，其特征在于：以中草药白薇为原料，用溶剂提取，提取物经过正丁醇溶剂萃取后，萃取物依次经过大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS‑C

【技术特征摘要】
1.一种菲骈吲哚里西啶生物碱，其特征在于：以中草药白薇为原料，用溶剂提取，提取物经过正丁醇溶剂萃取后，萃取物依次经过大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、ODS-C18反向硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和制备高效液相色谱分离，分离得到菲骈吲哚里西啶生物碱化合物1，结构如下所示：经鉴定化合物1为7-脱甲氧基娃儿藤碱。2.一种根据权利要求1所述一种菲骈吲哚里西啶生物碱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取白薇药材，粉碎后，用10～50倍药材重量的溶剂提取，溶剂为5～100％乙醇水溶液、5～100％甲醇水溶液、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮，提取方法为浸泡提取、加热回流、超声波辅助提取、微波辅助提取或超临界二氧化碳萃取，提取时间10～150min，提取1～4次，合并提取液过滤，减压浓缩回收溶剂即得白薇提取物；2)将步骤1)中的白薇提取物悬浮于8～15倍白薇提取物重量的蒸馏水中，用等体积的正丁醇溶剂萃取三次，合并正丁醇萃取液减压浓缩回收溶剂即得白薇正丁醇萃取物；3)将步骤2)中的白薇正丁醇萃取物悬浮于5～10倍白薇正丁醇萃取物重量的蒸馏水中，经大孔树脂柱层析，分别用纯水、5倍柱体积的30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和95％乙醇梯度洗脱，分别收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂；4)将步骤3)中乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：万春鹏，陈金印，陈楚英，陈明，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36