一种杨梅叶多酚的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种杨梅叶多酚的提取方法，包括以下步骤：1)打浆、酶解，得到杨梅叶酶解液；2)用乙醇对杨梅叶酶解液进行粗提；3)将粗提液经膜过滤，得澄清液；4)将澄清液上大孔树脂柱纯化，洗脱、干燥，即为杨梅叶多酚。本发明专利技术制得的杨梅叶多酚纯度高，收率高，与现有技术相比，本发明专利技术制得的杨梅叶多酚纯度在97％以上，杨梅叶多酚的得率为6.4mg/g以上，是现有技术的2-5倍。

Method for extracting polyphenol from Myrica rubra Leaves

The invention discloses a method for extracting polyphenols from Myrica rubra leaf, which comprises the following steps: 1) beating, enzymatic hydrolysis, from Myrica rubra leaf enzyme solution; 2) of crude extract of Myrica rubra leaf enzyme solution with ethanol; 3) the crude extract by membrane filtration, have clear liquid; 4) will clear liquid macroporous resin column purification, washing, drying, namely bayberry polyphenols. The prepared Yang Meiye polyphenol has high purity, high yield, compared with the prior art, the invention made Yang Meiye polyphenol purity more than 97%, the yield of polyphenols Yang Meiye is more than 6.4mg/g, is 2-5 times the existing technology.

【技术实现步骤摘要】
一种杨梅叶多酚的提取方法
本专利技术属于植物活性成分提取
，具体涉及一种杨梅叶多酚的提取方法。
技术介绍
植物多酚是目前功能食品与天然产物研究开发等领域研究的热点，国内外不断有发现植物多酚新功能及从新植物资源中开发利用植物多酚的报道。按照自由基能力，目前所报道的植物多酚众多的功能，如预防心脑血管疾病、调节免疫能力、抗肿瘤等，都与植物多酚清除自由基的能力有关。在体内危害人体健康的主要自由基是超氧阴离子自由基与羟基自由基。植物多酚是广泛存在于植物体内的重要次生代谢产物，广泛分布于植物体的根、叶、皮、果肉和壳中，具有抗氧化、抗肿瘤、保护肝脏等多种生理功能，是人体每天必须从食物中摄取的抗氧化物质，被称为继膳食纤维之后的第七营养素。现有技术中，植物多酚的提取方法主要有溶液浸提法、超声提取法、微波法等，但是单一的提取方法产率低。本专利技术引入生物酶解技术，同时采用改进的超声提取工艺，破坏杨梅叶细胞，促使其中的多酚物质溶出并向外扩散，可以减少溶剂的用量，提高提取率，提高纯度。杨梅（MyricarubraSieb.etZucc.）属杨梅科杨梅属植物，是我国的特色果树之一，在我国东南部地区已经有2000多年的种植历史。杨梅的果实、树叶和树皮均可入药，具有较高的经济价值。古代医书记载杨梅叶味苦、微辛、性温，可用于治疗腹泻、黄胆肝炎、淋巴结核、慢性咽喉炎等疾病。重庆是杨梅种植大市，为调节生长与结实的关系，促进杨梅的持续、优质、高产，每年都需对杨梅树进行整形修剪，因而产生大量废弃杨梅枝叶。开发利用杨梅叶资源，不仅解决了废物处理所带来的环境污染问题，而且增加了杨梅的产业价值。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种杨梅叶多酚的提取方法，该方法制得的杨梅叶多酚纯度高，收率高。本专利技术提供的技术方案是提供一种杨梅叶多酚的提取方法，包括以下步骤：1)打浆、酶解：采用料液比1:3-5，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆3-5min，然后加入蛋白酶充分搅拌后静置1-2h进行酶解后，用800-1000目滤网过滤取上清酶解液备用；2)粗提：用乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液过膜过滤装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上大孔树脂柱，上样流速为0.4～0.6BV/h，上大孔树脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得杨梅叶多酚。上述步骤1)中，所述的酶解是每100克杨梅叶加入0.2-0.4g蛋白酶，45-55℃酶解1-2h。步骤2)中，杨梅叶中含有蛋白质和碳水化合物，采用乙醇为溶媒，不利于蛋白质和碳水化合物的溶解，可减少杂质成分的溶出，对后续纯化有益。乙醇体积浓度为40～50％及酶解液与乙醇的料液比为1ml：1～3ml为佳，乙醇浓度过高会对蛋白质产生凝聚作用，使得蛋白质滞留在颗粒的内部孔道中，反而增加杨梅叶多酚的扩散阻力，降低终产品的收率。乙醇浓度过低则杂质含量较大，影响终产品的纯度。步骤3)中，所述膜过滤装置为50000道尔顿微滤膜。步骤4)中,水洗流速为2.5～3BV/h，水的洗脱量为5～6BV；乙醇的洗脱流速为2～2.5BV/h，乙醇的洗脱量为4～5BV；乙醇的体积浓度为65～85％。与现有技术相比，本专利技术制得的杨梅叶多酚纯度在97％以上，杨梅叶多酚的得率为6.4mg/g以上，是现有技术的2-5倍。具体实施方式以下具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但不作为对本专利技术的限定。实施例11)打浆、酶解：取洗净沥干杨梅叶1000g,采用料液比1:3加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆3min，然后加入2g蛋白酶充分搅拌后在45℃酶解1h，然后用800目滤网过滤取上清酶解液备用；2)粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：1ml加入40％乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液50000道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.4BV/h，先水洗柱，水洗流速为2.5BV/h，水的洗脱量为5BV；然后用65％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2BV/h，乙醇的洗脱量为4BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得9.4g杨梅叶多酚。经HPLC检测，成品中杨梅叶多酚的纯度为98.4％，杨梅叶多酚的得率为6.4mg/g以上。实施例21)打浆、酶解：取洗净沥干杨梅叶1000g,采用料液比1:5加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆5min，然后加入4g蛋白酶充分搅拌后在55℃酶解2h，然后用1000目滤网过滤取上清酶解液备用；2)粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：3ml加入50％乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液50000道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.6BV/h，先水洗柱，水洗流速为3BV/h，水的洗脱量为6BV；然后用85％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2.5BV/h，乙醇的洗脱量为5BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得9.7g杨梅叶多酚。经HPLC检测，成品中杨梅叶多酚的纯度为97.8％，杨梅叶多酚的得率为6.4mg/g以上。实施例31)打浆、酶解：取洗净沥干杨梅叶1000g,采用料液比1:4加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆4min，然后加入3g蛋白酶充分搅拌后在50℃静置酶解1.5h，然后用900目滤网过滤取上清酶解液备用；2)粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：2ml加入45％乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液50000道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.5BV/h，先水洗柱，水洗流速为2.8BV/h，水的洗脱量为5.5BV；然后用75％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2.3BV/h，乙醇的洗脱量为4.5BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得9.6g杨梅叶多酚。经HPLC检测，成品中杨梅叶多酚的纯度为98.4％，杨梅叶多酚的得率为6.4mg/g以上。实施例4将上述实施例1-3得到的杨梅叶多酚对超氧阴离子O2-·清除效果的测定：在试验浓度范围内,杨梅叶多酚对O2-·的清除能力较强,0.5mg/mL～2.5mg/mL浓度范围内清除率随浓度上升而提高的趋势明显。当杨梅叶多酚浓度达到2.5mg/mL时,对O2-·的清除率已超过90%。实施例5将上述实施例1-3得到的杨梅叶多酚对羟基自由基·OH清除效果的测定：杨梅叶多酚浓度在0.5mg/mL～2.0mg/mL范围内对·OH清除率随浓度上升而显著提高。当杨梅叶多酚浓度达到2.0mg/mL时,清除率已超过90%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杨梅叶多酚的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：1)打浆、酶解：采用料液比1: 3‑5，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆3‑5min，然后加入蛋白酶充分搅拌后进行酶解，用 800‑1000 目滤网过滤取上清酶解液备用；2) 粗提：用乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液过膜过滤装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上大孔树脂柱，上样流速为0.4～0.6BV/h，上大孔树脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得杨梅叶多酚。

【技术特征摘要】
1.一种杨梅叶多酚的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：1)打浆、酶解：采用料液比1:3-5，用打浆机将洗净沥干的杨梅叶打浆3-5min，然后加入蛋白酶充分搅拌后进行酶解，用800-1000目滤网过滤取上清酶解液备用；2)粗提：用乙醇对杨梅叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到杨梅叶粗提液；3)过膜：将上清液过膜过滤装置进行过滤，得到澄清液；4)纯化：将澄清液上大孔树脂柱，上样流速为0.4～0.6BV/h，上大孔树脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得杨梅叶多酚。2.根据权利要求1所述的一种杨梅叶多酚的提取方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：万雪峰，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：重庆都好生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50