一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗。本发明专利技术提供一种布鲁氏菌病凝胶剂型疫苗，为以泊洛沙姆为凝胶基质，布鲁氏菌病活疫苗为活性成分的凝胶剂型疫苗。本发明专利技术将布鲁氏菌病活疫苗与温敏凝胶结合应用于布鲁氏菌病的粘膜免疫(点眼、口服、滴鼻、阴道灌注)，所涉及的适用于布鲁氏菌病的温敏凝胶剂型疫苗及其制备方法未见报道。温敏凝胶剂型能够有效消除现有布病疫苗粘膜免疫散毒的危险，提高粘膜免疫的安全性，同时减少了疫苗免疫时有效成份的流失，延长了有效成份的作用时间，提高疫苗的生物利用度。

【技术实现步骤摘要】
一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗
本专利技术属于生物制品领域，尤其涉及一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗。
技术介绍
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(革兰氏阴性胞内寄生菌)寄生在人和动物体内所引起的一种严重人畜共患病，给人类和动物的健康带来很大威胁，世界上仅少数发达国家或发达国家的某一地域消灭本病，疫苗免疫是预防和控制布病的重要措施之一。现在预防布鲁氏菌病主要依靠光滑弱毒活疫苗，有牛种弱毒活疫苗A19(S19)，羊种弱毒活疫苗Rev.1和M5(M5-90)，还有猪种弱毒活疫苗S2。布鲁氏菌病疫苗都具有良好的免疫保护效果，对控制布鲁氏菌病流行有明显效果。但这些疫苗对人仍有一定感染性，现在中国布病疫苗主要以口服等粘膜免疫方式为主，存在易于在体表(粘膜表面)扩散造成污染环境和现场人员等生物安全问题，同时流失的疫苗也会降低免疫动物对疫苗的生物利用度。温敏凝胶系统是近年来发展起来的一种新兴的递送系统，主要用于药物、细胞、基因等的传送，在治疗疾病，组织修复和再生方面起到了很大作用。温度敏感型原位凝胶，是一类对温度变化敏感的智能型高分子聚合物凝胶，可随贮藏条件和用药部位的温度变化发生相转变形成非化学交联的凝胶，其形成是温度改变后氢键或疏水作用也随之改变，导致聚合物的物理状态发生改变，即环境温度低于最低临界相变温度(LCST)时呈现液体状态，高于LCST时呈现半固体凝胶状态，在体内可迅速发生相转变，从而达到局部给药或延长药物在用药部位的滞留时间的目的，提高了药物的生物利用度，同时也避免了多次给药的不便。比较常见的温敏凝胶有泊洛沙姆(poloxamer)，它是一类由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)组成的PEO-PPO-PEO型非离子三嵌段共聚物，已被美国和欧洲药典收录，已注册的商品名有Pluronic，Synperonic或Tetronic。该聚合物达到临界胶束温度时，其链上疏水性PPO嵌段脱水，泊洛沙姆分子在水溶液中聚集成以脱水PPO链为内核、以水化膨胀的PEG链为外壳的球状胶束，随着温度升高，胶束间的缠结和堆砌作用加剧而发生胶凝。它具有良好的生物相容性、顺应性、缓控释能力和较高的安全性。现温敏凝胶系统主要应用于药物制剂上，在生物制品上偶见报道，2012年，中科院过程工程研究所马光辉研究员领导的研究团队在温敏性水凝胶作为黏膜免疫投递系统的研究中获得进展，将温敏凝胶创新性地用于H5N1裂解疫苗的鼻黏膜免疫投递系统，其效果显著优于单纯H5N1裂解疫苗经鼻免疫的效果；2014年管晓燕等人进行了温敏型生物降解水凝胶载体防龋基因疫苗pVAX1-spap/A经不同途径免疫新西兰大白兔的实验研究，目的蛋白能够在免疫部位表达，能够有效诱导动物的体液免疫和黏膜免疫应答。粘膜感染是布鲁氏菌入侵机体的一种主要途径，通过粘膜免疫能够模拟感染途径产生相应免疫保护。而且，粘膜免疫对于怀孕牲畜来讲更加安全，所以针对布病防控研制出一种安全有效的用于粘膜免疫的疫苗是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供一种布鲁氏菌病凝胶剂型疫苗。本专利技术提供的疫苗，为以泊洛沙姆为凝胶基质，布鲁氏菌病活疫苗为活性成分的凝胶剂型疫苗。上述疫苗中，所述凝胶基质包括泊洛沙姆407和泊洛沙姆188；所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188的质量比为1.9-2.2:0.1-0.4。上述疫苗中，所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188的质量比(点眼免疫最优比)为2.2:0.4。上述疫苗中，所述凝胶基质按照如下方法制备：将所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188按照质量比为2.2:0.4加入专用生理盐水溶液中，静置，得到凝胶基质。上述基质中还可以含有药学上可接受的稳定剂、染色剂和免疫增强剂；临用前，用制备好的凝胶基质稀释已经制备的布鲁氏菌活疫苗，充分混匀。上述疫苗中，所述专用生理盐水由溶质和溶剂组成，溶质为NaCl，溶剂为由质量百分含量0.1-1％的胰蛋白胨、5-10mg/L黄芪多糖、5-25mg/L台盼蓝和水组成；溶质在溶剂中的质量百分含量为0.9％；所述静置的温度为4℃，所述静置的时间为18-24h。上述疫苗中，所述布鲁氏菌病活疫苗为布鲁氏菌S2株活疫苗、布鲁氏菌A19株活疫苗或其余任一种布鲁氏菌株活疫苗(即可由布鲁氏菌S2、A19(S19)、Rev.1、M5(M5-90)等任一种制苗菌株制备)。上述疫苗中，所述疫苗按照如下方法制备：将所述布鲁氏菌病活疫苗与所述凝胶基质混匀，得到布鲁氏菌病凝胶剂型疫苗。上述凝胶基质也是本专利技术保护的范围。上述疫苗或上述凝胶基质在制备动物粘膜免疫产品中的应用也是本专利技术保护的范围。本专利技术申请的布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗用于粘膜免疫，呈现从体外的液态到机体粘膜表面转变为凝胶态，根据所测定的免疫动物(牛、羊)的粘膜温度最低为36.6度，所以通过调整两种不同规格的泊洛沙姆进行配比，通过对其胶凝温度进行测定，使其胶凝温度小于粘膜温度时触发其胶凝，试验研究表明，触发其胶凝的适当温度为34.0±2.0℃。本专利技术另一个目的是提供一种动物粘膜免疫产品。本专利技术提供的产品，其活性成分为上述疫苗。上述中，所述粘膜免疫为点眼、口服、滴鼻或阴道灌注；或所述动物为家畜，或所述家畜为牛或羊。本专利技术的实验证明，本专利技术将布鲁氏菌病活疫苗与温敏凝胶结合应用于布鲁氏菌病的粘膜免疫(点眼、口服、滴鼻、阴道灌注)，所涉及的适用于布鲁氏菌病的温敏凝胶剂型疫苗及其制备方法未见报道。温敏凝胶剂型能够有效消除现有布病疫苗粘膜免疫散毒的危险，提高粘膜免疫的安全性，同时减少了疫苗免疫时有效成份的流失，延长了有效成份的作用时间，提高疫苗的生物利用度。附图说明图1为使用配方四所制备的泊洛沙姆温敏凝胶体外活菌释放曲线；进行释放度试验时设定恒温摇床的温度为36.6℃，转速为100转，用口径为1.3mm的试管，先将2mL布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗(100亿/mL)加入到试管内，将其放入36.6℃的水浴中迅速凝固，在凝胶上层小心加入2.4mL的同温生理盐水，每20min将溶蚀液体在超净台内全部倒出，再缓慢补充同温生理盐水2.4mL，将溶蚀液体进行活菌计数，结果由图1可见，在3h时的活菌释放量已高于全部菌量水平的90％。图2为使用配方四所制备的温敏凝胶基质溶解A19疫苗后奶牛抗体效价变化规律。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下面结合具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明。冻干布鲁氏菌病活疫苗(S2株)(制苗菌株为中国兽医微生物菌种保藏管理中心编号CVCC70502菌株，参考《中国人民共和国兽用生物制品规程》二OOO年版157-158页)制成不低于100亿活菌/头份使用。冻干布鲁氏菌病活疫苗(A19株)(制苗菌株为中国兽医微生物菌种保藏管理中心编号CVCC70202菌株，参考《中国人民共和国兽用生物制品规程》二OOO年版159-160页)制成不低于600亿活菌/头份使用。泊洛沙姆407和泊洛沙姆188(购于BASF公司)；胰酪胨大豆琼脂培养基(BD)；台盼蓝(sigma)；黄芪多糖(索莱宝)。实施例1、布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗的制备一、泊洛沙姆凝胶基质的制备不同配方的泊洛沙姆凝胶基质按照如下方法制备：将泊洛沙姆407和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种布鲁氏菌病凝胶剂型疫苗，为以泊洛沙姆为凝胶基质，布鲁氏菌病活疫苗为活性成分的凝胶剂型疫苗。

【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌病凝胶剂型疫苗，为以泊洛沙姆为凝胶基质，布鲁氏菌病活疫苗为活性成分的凝胶剂型疫苗。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于:所述凝胶基质包括泊洛沙姆407和泊洛沙姆188；所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188的质量比为1.9-2.2:0.1-0.4。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188的质量比为2.2:0.4。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述凝胶基质按照如下方法制备：将所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188按照质量比为2.2:0.4加入生理盐水溶液中，静置，得到凝胶基质。5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述生理盐水由溶质和溶剂组成，溶质为NaCl，溶剂为由质量百分含量0.1-1％的胰蛋白胨、5-10mg/L黄芪多糖、5-25mg/L台盼...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛开荣，王苗苗，王楠，徐磊，张金亚，张贺，万仁玲，于晓辉，丁家波，朱良全，彭晓微，蒋卉，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京,11