一种荧光分析方法和装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种检测待测物的检测方法和基于所述检测方法的检测装置，本发明专利技术提供一测试片，所述测试片包括：加样区、测试区、质控区、和吸水区；将可能含有待测物的测试样本与第一测试液进行混合，形成第一混合液；将第一混合液滴加于所述测试片的加样区，使得所述混合液向所述吸水区流动，并流经所述的测试区和质控区；基于所述测试区的荧光值的变化，并结合质控区的检测结果，获得所述测试样本中待测物存在与否和/或数量的结果。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光分析方法和装置
本专利技术涉及检测检验
，具体地涉及一种基于测量荧光强度的分析方法和装置。
技术介绍
有机磷与氨基甲酸脂类杀虫剂在农业种植领域运用广泛，占杀虫剂用量的70％以上。随着无公害农产品的开发，农药在蔬菜水果中的残留问题已引起人们的普遍关注。如何实现对农产品、食品和环境中农药残留的快速、准确、灵敏检测是控制化学农药施用的关键之一。目前常用的快速检测法---酶抑制法，是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性之原理，向蔬菜的提取液中加入生化反应底物碘化乙酰硫代胆碱和乙酰胆碱酯酶，如果蔬菜不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量低，酶的活性就不被抑制，实验中加入的底物就能被酶水解，水解产物与加入的显色剂反应产生黄色物质。如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，底物就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。用分光光度计测定吸光值，根据计算出的抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。但在实际应用中，还存在诸多问题，如：乙酰胆碱酯酶工作液不能常温保存，只能放于冰箱，使用中容易失活，影响检测结果的可靠性；在测量吸光度时容易受叶绿素等色素的干扰，易产生假阳性，为消除色素干扰，需使用活性炭或硅藻土，操作繁琐。1990年，Beggs等综合胶体金和免疫分析技术，建立了胶体金免疫层析法(GICA)，用于检测人尿和血清中的HCG(BEGGSM，NOVOTNYM，SAMPEDROS.Aselfperformingchromatographicimmunoassayforthequalitativedeterminationofhumanchorionicgonadotrophin(HCG)inurineandserum[J].ClinChem，1990，36：1084-1085)。由于GICA性质稳定、可室温存放、使用方便，此后20多年，GICA在人类医学诊断、兽医以及食品安全监测等领域得到广泛应用，但主要是定性检测。近来有研究人员试图用GICA法检测农药残留，目的在于为了克服酶抑制法检测农药残留的缺陷，由于很难得到针对农药分子的特异性抗体，所以未有明显进展。因此，本领域急需稳定性好、灵敏度高、使用方便同时又抗色素干扰且无须针对农药的特异性抗体的免疫层析检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于荧光淬灭原理的农药残留检测方法和装置。在本专利技术的第一方面，提供了一种检测待测物存在与否和/或数量的免疫分析方法，包括步骤：(a)提供一测试片，所述测试片包括：加样区、测试区、质控区、和吸水区，其中所述的测试区包含用于捕获乙酰胆碱酯酶的第一捕获剂，而所述的质控区包含用于捕获质控物质的第二捕获剂；(b)将可能含有待测物的测试样本与第一测试液进行混合，形成第一混合液，其中第一测试液含有：乙酰胆碱酯酶和任选的质控物质，其中所述的乙酰胆碱酯酶被吸光物质标记；而所述的待测物选自下组：有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、或其组合；(c)将第一混合液滴加于所述测试片的加样区，使得所述混合液向所述吸水区流动，并流经所述的测试区和质控区；和(d)基于所述测试区的荧光值的变化，并结合质控区的检测结果，获得所述测试样本中待测物存在与否和/或数量的结果。在另一优选例中，所述的质控物质是质控抗体。在另一优选例中，所述的质控抗体标记有可检测标记物。在另一优选例中，所述的可检测标记物包括：胶体金、荧光团、发光团、或其组合。在另一优选例中，所述胶体金的粒径为20-40nm。在另一优选例中，所述的质控抗体被吸光物质或淬灭剂所标记。在另一优选例中，所述的测试区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的质控区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的测试区具有背景荧光并且不添加额外的产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的质控区具有背景荧光并且不添加了额外的产生荧光的物质。在另一优选例中，在步骤(d)中，基于测试区的荧光值的下降，获得所述测试样本中待测物数量的定量结果。在另一优选例中，在步骤(d)中，基于标准曲线或下列公式I和II，得出所述测试样本中待测物数量的定量结果：C测试＝k×Δ荧光值IΔ荧光值＝Y测试－Y0II式中，C测试为测试样本中待测物的浓度；k为常数(可通过实验确定)；Y测试为测试所述测试样本时获得测试区的荧光值；Y0为未添加所述测试样本或第一混合液时测试区的空白荧光值。在另一优选例中，所述的荧光物质选自下组：荧光素、羧基荧光素、2-甲氧基荧光素、4，5-二甲氧基荧光素、罗丹明、藻红蛋白、量子点和稀土元素离子(如Eu3+)及其螯合物。在另一优选例中，所述的待测物选自下组：氯吡硫磷、敌敌畏、涕灭威、或其组合。在本专利技术的第二方面，提供了一种用于检测待测物存在与否和/或数量的试剂盒或试剂组合，包括：(i)一测试片，所述测试片包括：加样区、测试区、质控区、和吸水区，其中所述的测试区包含用于捕获乙酰胆碱酯酶的第一捕获剂，而所述的质控区包含用于捕获质控物质的第二捕获剂；(ii)第一容器，以及位于所述第一容器中的、用于与测试样本进行混合的第一测试试剂，所述第一测试试剂为乙酰胆碱酯酶，其中所述的乙酰胆碱酯酶被吸光物质标记；(iii)任选的第二容器，以及位于第二容器中的质控物质；其中，所述的第一容器和第二容器是相互独立的或是同一容器；并且，所述的待测物选自下组：有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、或其组合。在另一优选例中，所述的待测物选自下组：氯吡硫磷、敌敌畏、涕灭威、或其组合。在另一优选例中，所述的第一测试试剂为溶液形式或固态形式。在另一优选例中，所述的第二测试试剂为溶液形式或固态形式。在另一优选例中，所述的第一容器和第二容器是同一容器，并且所述的第一测试试剂和第二测试试剂为混合的干粉形式。在另一优选例中，所述的质控物质是质控抗体。在另一优选例中，所述的质控抗体标记有可检测标记物。在另一优选例中，所述的可检测标记物包括：胶体金、荧光团、发光团、纳米金棒、纳米银或其组合。在另一优选例中，所述胶体金的粒径为20-40nm。在另一优选例中，所述的质控抗体被吸光物质或淬灭剂所标记。在另一优选例中，所述的测试区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的质控区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的测试区具有背景荧光并且不添加额外的产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的质控区具有背景荧光并且不添加了额外的产生荧光的物质。在另一优选例中，所述的荧光物质选自下组：荧光素、羧基荧光素、2-甲氧基荧光素、4，5-二甲氧基荧光素、罗丹明、藻红蛋白、量子点和稀土元素离子(如Eu3+)及其螯合物。在本专利技术的第三方面，提供了一种定量检测待测物的荧光测量装置，所述的装置包括：(a)一如本专利技术第二方面所述的试剂盒或试剂组合；和(b)一用于检测荧光强度的检测器。在另一优选例中，所述的试剂盒还含有使用说明书，所述说明书描述了本专利技术第一方面所述的方法。在另一优选例中，所述装置还包括光源和计算机。所述光源通过光导纤维照射到检测线处，激发出的荧光通过光导纤维进入检测器，由计算机进行数据处理和分析。应理解，在本专利技术范围内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测待测物存在与否和/或数量的免疫分析方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一测试片，所述测试片包括：加样区、测试区、质控区、和吸水区，其中所述的测试区包含用于捕获乙酰胆碱酯酶的第一捕获剂，而所述的质控区包含用于捕获质控物质的第二捕获剂；(b)将可能含有待测物的测试样本与第一测试液进行混合，形成第一混合液，其中第一测试液含有：乙酰胆碱酯酶和任选的质控物质，其中所述的乙酰胆碱酯酶被吸光物质标记；而所述的待测物选自下组：有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、或其组合；(c)将第一混合液滴加于所述测试片的加样区，使得所述混合液向所述吸水区流动，并流经所述的测试区和质控区；和(d)基于所述测试区的荧光值的变化，并结合质控区的检测结果，获得所述测试样本中待测物存在与否和/或数量的结果。

【技术特征摘要】
1.一种检测待测物存在与否和/或数量的免疫分析方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一测试片，所述测试片包括：加样区、测试区、质控区、和吸水区，其中所述的测试区包含用于捕获乙酰胆碱酯酶的第一捕获剂，而所述的质控区包含用于捕获质控物质的第二捕获剂；(b)将可能含有待测物的测试样本与第一测试液进行混合，形成第一混合液，其中第一测试液含有：乙酰胆碱酯酶和任选的质控物质，其中所述的乙酰胆碱酯酶被吸光物质标记；而所述的待测物选自下组：有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、或其组合；(c)将第一混合液滴加于所述测试片的加样区，使得所述混合液向所述吸水区流动，并流经所述的测试区和质控区；和(d)基于所述测试区的荧光值的变化，并结合质控区的检测结果，获得所述测试样本中待测物存在与否和/或数量的结果。2.如权利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于，所述的质控物质是质控抗体。3.如权利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于，所述的质控抗体被吸光物质或淬灭剂所标记。4.如权利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于，所述的测试区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。5.如权利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于，所述的质控区具有背景荧光、或任选地添加了产生荧光的物质。6.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李久彤，周雪雷，田晓峰，
申请(专利权)人：上海鑫谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31