固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法技术

固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10‑蒽醌残留量的方法，属于检测技术领域。其包括以下步骤：1）样品提取；2）样品净化；3）GC‑MS/MS测定；4）空白试验；5）结果计算和表述；6）判断。本发明专利技术的测定方法具有以下有益效果：开发了固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10‑蒽醌残留量的方法，简化了实验操作步骤，降低了时间成本；实验过程不涉及柱净化步骤，减少了有机溶剂使用量，降低环境负担。

【技术实现步骤摘要】
固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法
本专利技术属于检测
，具体涉及固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法。
技术介绍
9,10-蒽醌（Anthraquinone，CASNo84-65-1）是茶叶中出现的一种新型污染物，欧盟规定其在茶叶中的最大残留限量（MRL）为0.02mg/kg。2012年，欧盟首次通报了中国茶叶中9,10-蒽醌超标；2014年我国9,10-蒽醌位于欧盟茶叶中污染物超标通报之首。目前，对于茶叶中9,10-蒽醌的检测方法研究较少。已有的文献报道多通过凝胶色谱、TPT或实验室自制玻璃柱净化，实验步骤繁琐，有机溶剂用量大，造成实验时间成本高，环境负担高。9,10-蒽醌分子结构式如下所示：。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术目的在于设计提供一种固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法。该方法通过弗罗里硅土的固相分散，有效地简化实验步骤和降低有机溶剂使用量。该方法操作简便快速，有机溶剂用量少，在回收率、检出限及精密度等方面均能满足国内外茶叶中残留限量要求，可为茶叶9,10-蒽醌残留量的测定提供技术支持。所述的固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法，其特征在于包括以下步骤：1）样品提取取粉碎茶叶样品2g于50mL聚四氟乙烯离心管，加入2mL蒸馏水，充分润湿后浸泡30min；加入10mL体积比为4：1的正己烷和丙酮混合溶液，超声提取30min；加入2g无水硫酸镁摇匀冷却，涡旋30s，以6000r/min离心5min；取5mL上清液于鸡心瓶，35℃旋转蒸发至近干，用5mL体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液溶解残渣，待净化；2）样品净化取待净化液于10mL离心管中，加入0.7g加水脱活弗罗里硅土，涡旋1min，6000r/min离心5min；移取4mL上清液于鸡心瓶中，35℃旋转蒸发至近干，氮气吹干；0.8mL含内标氘代蒽醌体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液定容，加入0.8mL乙腈液液分配后静置，取乙腈层溶液过0.22μm有机膜，供GC-MS/MS测试；3）GC-MS/MS测定基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的气相色谱-质谱/质谱条件下进样：A）气相色谱-质谱/质谱仪器参数：气相色谱：色谱柱：VF-5ms，规格30m×0.25mm×0.25μm；程序柱温：80℃保持1min，以15℃/min的速率升温至240℃，再以25℃/min升温至280℃，保持5min；载气：氦气，纯度99.999%，流速1.0mL/min；进样口温度：250℃；进样方式：不分流进样；质谱条件：电离方式：EI；碰撞气:氩气，纯度99.999%，2.0mTorr；电离能量：70eV；离子源温度：210℃；传输线温度：280℃；测定方式：多级反应检测模式；定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差：相对离子丰度＞50％，允许的相对偏差±20％；相对离子丰度＞20％～50％，允许的相对偏差±25％；相对离子丰度＞10％～20％，允许的相对偏差±30％；相对离子丰度≤10％，允许的相对偏差±50％；B）9,10-蒽醌质谱参数4）空白试验除不加样品外，均按上述步骤1）、步骤2）、步骤3）操作进行；5）结果计算和表述按以下公式计算样品中蒽醌的质量浓度，处理结果须扣除空白值：式中：Xi──样品中蒽醌的残留量，单位为毫克每千克；Ci──从标准曲线上得到蒽醌的溶液浓度，单位为毫克每升；V──样液最终定容体积，单位为毫升；m──最终样液所代表的试样质量，单位为克；6）判断以质量浓度X为横坐标，峰面积比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量测定，样品溶液中待测物的响应值满足仪器检测的线性范围；定量和定性离子对同时存在，且信噪比≥3；样品溶液中待测物出现的色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液一致，允许偏差小于±0.5％，则可确定含有该药物。所述的固相分散净化快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法，其特征在于：弗罗里硅土500℃条件下烘干4h，于干燥器内冷却至室温，加入7%水w/w脱活。本专利技术采用固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量，操作简便快速，有机溶剂用量少。在回收率、检出限及精密度等方面均能满足国内外茶叶中残留限量要求。本专利技术的测定方法具有以下有益效果：开发了固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法，简化了实验操作步骤，降低了时间成本；实验过程不涉及柱净化步骤，减少了有机溶剂使用量，降低环境负担。附图说明图1为9,10-蒽醌（0.01mg/L）和氘代-蒽醌（0.04mg/L）标样质谱图；图2为提取溶剂不同丙酮含量对9,10-蒽醌提取效率影响；图3为弗罗里硅土含水量对9,10-蒽醌提取效率的影响；图4为弗罗里硅土量对9,10-蒽醌回收率的影响。具体实施方式以下结合实施例来进一步说明本专利技术。实施例一：质谱条件的建立全扫描方式获得9,10-蒽醌特征离子m/z208，180和152，选择离子丰度最高的208作为母离子。逐级增加碰撞能量，获得特征子离子180和152以及最优碰撞能量，选择不受茶叶基质干扰的m/z208>152离子通道作为定量离子对，m/z208>180作为定性离子对。同样的方式优化得氘代-蒽醌的定性定量离子对。质谱图见图1。实施例二：提取溶剂的优化丙酮和正己烷的混合比例对9,10-蒽醌回收率的影响见图2。当丙酮在正己烷中的体积分数低于10%时，平均回收率低于70%；增加提取溶剂中丙酮含量至20%及以上，回收率基本稳定在80-90%，满足残留分析的要求。由于丙酮含量增加会增加茶叶中极性物质的共提取，因此最终选择丙酮+正己烷（V/V=1+4）作为提取溶剂。实施例三：弗罗里硅土使用筛选1）设置弗罗里硅土中含水量为1%，3%，5%，7%，10%，12%的不同处理，发现随着含水量的增加，9,10-蒽醌回收率提高（图3），含水量超过5%时，回收率稳定在80%左右。随着加水量的增加，提取液的颜色加深，因此选择7%含水量作为弗罗里硅土吸附剂的活化条件。2）优化了弗罗里硅土加入量对回收率的影响（图4）。增加弗罗里硅土的量，可以有效提高净化效果。但是由于弗罗里硅土的吸附作用，弗罗里硅土的加入量与9,10-蒽醌的回收率呈明显的负相关关系，且在9,10-蒽醌的回收率在0.7g以上时下降显著，因此弗罗里硅土的用量选用0.7g。实施例五：固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法1、试剂和材料1.1正己烷：色谱纯。1.2丙酮：色谱纯。1.3乙腈：色谱纯。1.4无水硫酸镁：分析纯，650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。1.59,10-蒽醌标准物质(Anthraquinone,,CAS:84-65-1，C14H8O2)：纯度99.0%。1.6氘代-蒽醌标准物质(D8-Anthraquinone,CAS:10439-39-1)：纯度98.6%。1.7标准储备溶液：准确称取标准物质(1.5)0.010g（精确至0.0001g）于50mL容量瓶中，以丙酮定容，配制成100mg/L储备标准溶液，于-20℃保存。1.8D8-蒽醌标准储备溶液：准确称取标准品(1.6)0.010g（精确本文档来自技高网...

【技术保护点】
固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10‑蒽醌残留量的方法，其特征在于包括以下步骤：1）样品提取取粉碎茶叶样品2 g于50 mL聚四氟乙烯离心管，加入2 mL蒸馏水，充分润湿后浸泡30 min；加入10 mL体积比为4：1的正己烷和丙酮混合溶液，超声提取30 min；加入2 g 无水硫酸镁摇匀冷却，涡旋30 s，以6000 r/min离心5 min；取5 mL上清液于鸡心瓶，35 ℃旋转蒸发至近干，用5 mL体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液溶解残渣，待净化；2）样品净化取待净化液于10 mL离心管中，加入0.7 g加水脱活弗罗里硅土，涡旋1 min，6000 r/min 离心5 min；移取4 mL上清液于鸡心瓶中，35 ℃旋转蒸发至近干，氮气吹干；0.8 mL含内标氘代蒽醌体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液定容，加入0.8 mL乙腈液液分配后静置，取乙腈层溶液过0.22μm 有机膜，供GC‑MS/MS测试；3）GC‑MS/MS测定基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的气相色谱‑质谱/质谱条件下进样：A）气相色谱‑质谱/质谱仪器参数：气相色谱：色谱柱：VF‑5ms，规格30 m×0.25 mm×0.25μm；程序柱温：80℃保持1min，以15℃/min 的速率升温至240℃，再以25℃/min升温至280℃，保持5min；载气：氦气，纯度99.999%，流速1.0 mL/min；进样口温度：250℃；进样方式：不分流进样；质谱条件：电离方式：EI；碰撞气: 氩气，纯度99.999%，2.0 mTorr；电离能量：70eV；离子源温度：210℃；传输线温度：280℃；测定方式：多级反应检测模式；定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差：相对离子丰度＞50％，允许的相对偏差±20％；相对离子丰度＞20％～50％，允许的相对偏差±25％；相对离子丰度＞10％～ 20％，允许的相对偏差±30％；相对离子丰度≤10％，允许的相对偏差±50％；B）9,10‑蒽醌质谱参数...

【技术特征摘要】
1.固相分散净化技术快速测定茶叶中9,10-蒽醌残留量的方法，其特征在于包括以下步骤：1）样品提取取粉碎茶叶样品2g于50mL聚四氟乙烯离心管，加入2mL蒸馏水，充分润湿后浸泡30min；加入10mL体积比为4：1的正己烷和丙酮混合溶液，超声提取30min；加入2g无水硫酸镁摇匀冷却，涡旋30s，以6000r/min离心5min；取5mL上清液于鸡心瓶，35℃旋转蒸发至近干，用5mL体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液溶解残渣，待净化；2）样品净化取待净化液于10mL离心管中，加入0.7g加水脱活弗罗里硅土，涡旋1min，6000r/min离心5min；移取4mL上清液于鸡心瓶中，35℃旋转蒸发至近干，氮气吹干；0.8mL含内标氘代蒽醌体积比为39:1的正己烷和丙酮混合溶液定容，加入0.8mL乙腈液液分配后静置，取乙腈层溶液过0.22μm有机膜，供GC-MS/MS测试；3）GC-MS/MS测定基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的气相色谱-质谱/质谱条件下进样：A）气相色谱-质谱/质谱仪器参数：气相色谱：色谱柱：VF-5ms，规格30m×0.25mm×0.25μm；程序柱温：80℃保持1min，以15℃/min的速率升温至240℃，再以25℃/min升温至280℃，保持5min；载气：氦气，纯度99.999%，流速1.0mL/min；进样口温度：250℃；进样方式：不分流进样；质谱条件：电离方式...

【专利技术属性】
技术研发人员：周利，汪煊，罗逢健，陈宗懋，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33