一种智慧基因的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种智慧基因的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括PCR反应试剂，基因位点SNP检测的特异性引物和荧光探针，所述的基因位点包括JMJD1C基因位点rs7923609，LRRC14基因位点rs2721173，本发明专利技术的试剂盒在单管PCR体系中即可完成两个位点不同基因型的检测，操作步骤少，耗时短，无需开管操作，减少了PCR产物污染的可能性，且检测特异性高，结果容易判读。

【技术实现步骤摘要】
一种智慧基因的检测试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种智慧基因的检测试剂盒。
技术介绍
智慧(即认知能力)，是人脑加工、储存和提取信息的能力，即人们对事物的构成、性能、与他物关系、发展动力、发展方向以及基本规律的把握能力。知觉、记忆、注意、思维和想象的能力都被认为是认知能力，它是人们成功的完成活动最重要的心理条件。人们的智慧特点对于社会经济状况都有显著的影响，增强人们的智慧也已经被发现与财富增长和预期寿命的增加有关。近年来分子生物学技术的发展和遗传医学的研究表明，人类的智力发育和大脑各部分功能的发展与完善受遗传和环境因素的共同影响和制约，其中大约40-50％受遗传因素的影响。由于遗传因素人们无法改变，而环境因素却可以人为去创造，因此我们可以根据儿童本身的遗传因素为其量身打造外部环境(社会环境和自然环境等)，强化优势天赋，因材施教，进行个性化教育培养。目前对智慧相关基因的检测技术主要是直接测序法，但该方法不仅费用较高而且操作繁琐、周期长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种智慧基因的检测试剂盒，利用简单、快速、价格低廉且易于判读的检测方法，在PCR体系中即可完成两个位点不同基因型的检测，无需开管操作，减少了PCR产物污染的可能性。具体地，一种智慧基因的检测试剂盒，试剂盒包括基因检测的PCR试剂，所述PCR试剂包括基因位点SNP检测的特异性引物和荧光探针，所述特异性引物检测的基因位点包括JMJD1C基因位点rs7923609，LRRC14基因位点rs2721173中的一种或两种，根据NCBI的Genbank数据库公开的基因JMJD1C(rs7923609)和LRRC14(rs2721173)序列为模板，采用Primer5软件设计引物和探针，引物在多态性位点的上下游进行设计，且目的片段的长度控制在100bp左右，保证探针序列包含多态性位点，具体如下：①当检测JMJD1C基因位点rs7923609时，正向引物：5'-CAAACAAGCATTCTCACTTC-3'SEQIDNO.1，反向引物：5'-CATAGTTTGCTTAGCCAGTT-3'SEQIDNO.2，JMJD1C荧光探针：5'-TAATGACAATATCCCGTTGC-3'SEQIDNO.5；②当检测LRRC14基因位点rs2721173时，正向引物:5'-AGGTTGAAAAGACCGAGAC-3'SEQIDNO.3，反向引物:5'-TTTAGGCCAGTGGTAAGG-3'SEQIDNO.4，LRRC14荧光探针：5'-TCCGTGCTTGGTGACGCTCTG-3'SEQIDNO.6。本专利技术引物和探针也可为本专利技术上述核苷酸序列SEQIDNO：1至SEQIDNO：6的互补序列。进一步地，所述的JMJD1C荧光探针和LRRC14荧光探针分别为5'末端区域具有荧光基团，3'末端区域具有淬灭基团的双标记探针。进一步地，所述的5'末端区域采用：FAM，TET，VIC，HEX，ROX，JOE，CY3或CY5其中的一种荧光基团标记；3'末端区域采用：BHQ，DABCYL或TAMRA其中的一种淬灭基团标记。进一步地，所述的PCR试剂中各引物和探针在PCR试剂中的浓度为：JMJD1C正向引物的终浓度为0.08-0.15μM，JMJD1C反向引物的终浓度0.45-0.13μM，JMJD1C荧光探针的终浓度为0.04-0.25μM；LRRC14正向引物的终浓度为0.45-0.13μM，LRRC14反向引物的终浓度为0.08-0.15μM，LRRC14荧光探针的终浓度为0.04-0.25μM。进一步地，试剂盒还包括PCR缓冲液、阴性对照品、阳性对照品、核酸DNA提取试剂、PCR反应所需的Taq聚合酶、dNTP中的一种或多种。进一步地，试剂盒的检测程序为37℃5min，95℃15min；然后95℃20sec，51℃30sec，72℃30sec收集荧光，40个循环；熔解曲线分析：95℃30sec，40℃30sec，40-75℃收集荧光。本专利技术具有如下优点：1.本专利技术技术方案中的设计出一种新的检测人智慧基因JMJD1C(rs7923609)和LRRC14(rs2721173)基因多态性的检测引物和相应的荧光探针，PCR检测特异性非常高，能够实现高度特异性扩增，采用“不对称PCR技术”进行PCR扩增，结合实时荧光PCR技术，分析熔解曲线产生的熔解峰，通过特定熔解峰的有无方便的判读不同的基因型。2.本专利技术技术方案中的检测引物与探针价格低廉，在不影响特异性的前提下，单个基因仅需单条荧光探针即可实现基因多态性的检测。3.本专利技术技术方案在实验过程中只需单管就可完成不同基因型的检测，操作简单；且无需进行PCR产物的后续分析，检测成本低、周期短、效率高，同时还降低了PCR产物污染引起的假阳性风险。附图说明图1第1个PCR管在FAM通道出现Tm为53.9的JMJD1C-GG型熔解峰；图2第1个PCR管在HEX通道出现Tm为52.8℃的LRRC14-AA型熔解峰；图3第2个PCR管在FAM通道出现Tm为48.4℃的JMJD1C-AA型熔解峰；图4第2个PCR管在HEX通道出现Tm为63.3℃的LRRC14-GG型熔解峰；图5第3个PCR管在FAM通道出现Tm为48.8℃和55.2℃的JMJD1C-AG型熔解峰；图6第3个PCR管在HEX通道出现Tm为53.1℃和62.9℃的LRRC14-GA型熔解峰；图7第4个PCR管在FAM通道出现Tm为47.7℃和Tm为53.7℃的JMJD1C-AG型熔解峰；图8第4个PCR管在HEX通道出现Tm为53.4℃和63.4℃的LRRC14-GA型熔解峰；图9阴性对照管在FAM通道的熔解峰；图10阴性对照管在HEX通道的熔解峰。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。智慧基因JMJD1C(rs7923609)和LRRC14(rs2721173)基因多态性检测1.DNA提取人唾液样本采用Chelex-100法提取DNA，具体步骤如下：A.取300μL唾液加入1.5mL离心管中，13000rpm离心3min，弃上清，向沉淀中加入500μL灭菌双蒸水，剧烈振荡后室温下静置15min，13000rpm离心3min，弃上清，收集沉淀；B.沉淀中加入100μL核酸提取液，核酸提取液内含颗粒物，每次吸取前应充分摇匀，确保将颗粒一起吸出，在振荡器上反复振荡，56℃保温30min以上；C.取出后充分振荡，100℃保温8min，取出后充分振荡，13,000rpm离心3min，上清液可直接用于PCR扩增，在4℃下可保存一周，也可存放在-20℃冰箱待用。样本还可包括体液、组织样品或脱落细胞中的一种，例如血滤纸片、带毛囊的毛发、口腔黏膜刮片或全血样本等，血液样本于-20℃以下保存不超过一年，根据取样方式以及被测样本的不同，可对样本进行相应的预处理。2.引物和荧光探针的设计根据NCBI的Genbank数据库公开的基因JMJD1C(rs7923609)和LRRC14(rs2721173)序列为模板，采用Primer5软件设计引物和探针，引物在多态性位点的上下游进行设计，且目的片段的长度控制在100bp左右，保证探针序列包含多态性位点，具体如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种智慧基因的检测试剂盒，特征在于：试剂盒包括基因检测的PCR试剂，所述PCR试剂包括基因位点SNP检测的特异性引物和荧光探针，所述特异性引物检测的基因位点包括JMJD1C基因位点rs7923609，LRRC14基因位点rs2721173中的一种或两种，其中：①当检测JMJD1C基因位点rs7923609时，正向引物：5'‑CAAACAAGCATTCTCACTTC‑3'         SEQ ID NO.1，反向引物：5'‑CATAGTTTGCTTAGCCAGTT‑3'         SEQ ID NO.2，JMJD1C荧光探针：5'‑TAATGACAATATCCCGTTGC‑3'   SEQ ID NO.5；②当检测LRRC14基因位点rs2721173时，正向引物:5'‑AGGTTGAAAAGACCGAGAC‑3'          SEQ ID NO.3，反向引物:5'‑TTTAGGCCAGTGGTAAGG‑3'           SEQ ID NO.4，LRRC14荧光探针：5'‑TCCGTGCTTGGTGACGCTCTG‑3'  SEQ ID NO.6。

【技术特征摘要】
1.一种智慧基因的检测试剂盒，特征在于：试剂盒包括基因检测的PCR试剂，所述PCR试剂包括基因位点SNP检测的特异性引物和荧光探针，所述特异性引物检测的基因位点包括JMJD1C基因位点rs7923609，LRRC14基因位点rs2721173中的一种或两种，其中：①当检测JMJD1C基因位点rs7923609时，正向引物：5'-CAAACAAGCATTCTCACTTC-3'SEQIDNO.1，反向引物：5'-CATAGTTTGCTTAGCCAGTT-3'SEQIDNO.2，JMJD1C荧光探针：5'-TAATGACAATATCCCGTTGC-3'SEQIDNO.5；②当检测LRRC14基因位点rs2721173时，正向引物:5'-AGGTTGAAAAGACCGAGAC-3'SEQIDNO.3，反向引物:5'-TTTAGGCCAGTGGTAAGG-3'SEQIDNO.4，LRRC14荧光探针：5'-TCCGTGCTTGGTGACGCTCTG-3'SEQIDNO.6。2.如权利要求1所述的一种智慧基因的检测试剂盒，其特征在于：所述的JMJD1C荧光探针和LRRC14荧光探针分别为5'末端区域具有荧光基团，3'末端区域具有淬灭基团的双标记探针。3.如权利要求2所述的一种智慧基因的...

【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，
申请(专利权)人：才赋基因科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11