一种制备玻尿酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备玻尿酸的方法，以兽疫链球菌为发酵菌株，包括如下步骤：a、将兽疫链球菌接种至固体培养基上进行菌种培养，得到单克隆菌种；b、配制种子培养基，兽疫链球菌种子培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾组成，将兽疫链球菌接种至种子培养基进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液。

【技术实现步骤摘要】
一种制备玻尿酸的方法
本专利技术属于发酵
，涉及一种生产玻尿酸发酵液的方法。
技术介绍
透明质酸(HyaluroIlicacid，简称HA)又名玻尿酸、玻璃酸，是一种大分子粘多糖，由葡萄糖醛酸和N．乙酰氨基葡萄糖胺通过β-1,3和β-1,4糖苷键反复交替连接而成的一种链状高分子聚合物中。基于透明质酸高粘度、润滑性、保水性、良好的生物相容性及特殊的生理作用，透明质酸在医药、美容、保健食品等领域具有广泛的应用。透明质酸既可以通过传统的鸡冠提取法生产，也可以通过微生物发酵法进行生产。由于发酵法成本低、产品纯度高，而传统的动物组织提取法由于透明质酸的含量少，组织成分复杂，提取分离困难，造成生产成本高，因此目前微生物发酵法正逐步取代组织提取法。在现有细菌发酵生产过程中，由于使用的营养物质主要是各种单糖、蔗糖和淀粉水解物、蛋白胨、酪蛋白水解液、酵母膏或浸出液、大豆蛋白水解液等，实验证明，在这些不同批次营养物质存在下，微生物并不能稳定很好生长，从而影响发酵周期及正常生产。
技术实现思路
专利技术目的：为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种制备透明质酸的方法。技术方案：本专利技术通过以下方案解决该技术问题。一种制备玻尿酸的方法，以兽疫链球菌为发酵菌株，包括如下步骤：a、将兽疫链球菌接种至固体培养基上进行菌种培养，得到单克隆菌种。b、配制种子培养基，兽疫链球菌种子培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾组成，将兽疫链球菌接种至种子培养基进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液。c、配制发酵培养基，所述发酵培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、谷氨酸钠，微量元素液组成，所述微量元素由氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰、乙二胺四乙酸二钠组成，发酵培养基灭菌后调节pH至7.5，将兽疫链球菌种子培养液接种至发酵培养液，即可得到透明质酸发酵液。作为优选，所述b步骤的种子培养液中葡萄糖浓度为1-10g/L，酵母粉浓度为5-10g/L，蛋白胨浓度为10-20g/L，硫酸镁浓度为0.5-2g/L，磷酸二氢钾浓度为0.5-2g/L。作为优选，所述c步骤的发酵培养液中葡萄糖浓度为50-100g/L，酵母粉浓度为5-10g/L，蛋白胨浓度为10-20g/L，硫酸镁浓度为0.5-2g/L，磷酸二氢钾浓度为0.5-2g/L，谷氨酸钠为10-20g/L，微量元素液浓度为0.5-10ml/L；所述微量元素中氯化钙浓度为0.5-5g/L，硫酸镁浓度为1-20g/L，硫酸亚铁为0.200-2g/L，硫酸锰为0.2-2g/L，乙二胺四乙酸二钠浓度为1-50g/L。作为优选，所述b步骤中种子培养基的培养条件为培养温度33-37℃，振荡培养10-14小时。作为优选，所述c步骤中的发酵过程中，发酵搅拌速度为200-500rpm，发酵温度为33-37℃，用30%氢氧化钠溶液调节，使发酵培养基的pH值在7.5±0.5，通气量为1-3vvm，发酵周期在12-18小时。有益的效果：本专利技术在发酵培养基中添加了微量元素液，明显缩短发酵周期，提高透明质酸钠发酵液粘度。本专利技术所述生产透明质酸钠的发酵液经过纯化处理，可以得到化妆品级的透明质酸钠。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。一种制备玻尿酸的方法，以兽疫链球菌为发酵菌株，包括如下步骤：d、将兽疫链球菌接种至固体培养基上进行菌种培养，得到单克隆菌种；e、配制种子培养基，兽疫链球菌种子培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾组成，将兽疫链球菌接种至种子培养基进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液；f、配制发酵培养基，所述发酵培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、谷氨酸钠，微量元素液组成，所述微量元素由氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰、乙二胺四乙酸二钠组成，发酵培养基灭菌后调节pH至7.5，将兽疫链球菌种子培养液接种至发酵培养液，即可得到透明质酸发酵液。所述b步骤的种子培养液中葡萄糖浓度为1-10g/L，酵母粉浓度为5-10g/L，蛋白胨浓度为10-20g/L，硫酸镁浓度为0.5-2g/L，磷酸二氢钾浓度为0.5-2g/L；所述c步骤的发酵培养液中葡萄糖浓度为50-100g/L，酵母粉浓度为5-10g/L，蛋白胨浓度为10-20g/L，硫酸镁浓度为0.5-2g/L，磷酸二氢钾浓度为0.5-2g/L，谷氨酸钠为10-20g/L，微量元素液浓度为0.5-10ml/L；所述微量元素中氯化钙浓度为0.5-5g/L，硫酸镁浓度为1-20g/L，硫酸亚铁为0.200-2g/L，硫酸锰为0.2-2g/L，乙二胺四乙酸二钠浓度为1-50g/L。所述b步骤中种子培养基的培养条件为培养温度33-37℃，振荡培养10-14小时。所述c步骤中的发酵过程中，发酵搅拌速度为200-500rpm，发酵温度为33-37℃，用30%氢氧化钠溶液调节，使发酵培养基的pH值在7.5±0.5，通气量为1-3vvm，发酵周期在12-18小时。实施例2下面对本专利技术做进一步的说明：以兽疫链球菌为发酵菌株生产透明质发酵液的方法，其步骤为：1、将兽疫链球菌接种至种子固体培养上进行培养，于33℃培养16小时；2、配置1L种子培养基种子培养基的组成：葡萄糖10g/L，酵母粉浓度为5g/L，蛋白胨浓度为10g/L，硫酸镁浓度为1g/L，磷酸二氢钾浓度为1g/L；培养基配置后灭菌后，将兽疫链球菌接种至种子培养基培养，于33℃振荡培养12小时，得到兽疫链球菌种子培养液。3、配置6L发酵培养基发酵培养基的组成：葡萄糖浓度为100g/L，酵母粉浓度为10g/L，蛋白胨浓度为20g/L，硫酸镁浓度为0.5g/L，磷酸二氢钾浓度为2g/L，谷氨酸钠为20g/L，微量元素液浓度为5ml/L；其中微量元素液的组成为：氯化钙浓度为5g/L，硫酸镁浓度为10g/L，硫酸亚铁为2g/L，硫酸锰为1g/L，乙二胺四乙酸二钠浓度为10g/L。配制发酵培养基后，装入10L的发酵罐中，配制后的发酵培养基灭菌后使用30%氢氧化钠调节至7.5，将兽疫链球菌种子培养液接种至发酵培养液，接种后在搅拌转速为100-500rpm，温度为33℃，pH值为7.5，通气量为1vvm条件下培养16小时，得到透明质酸发酵液，发酵过程中用30%氢氧化钠调节发酵液的pH值，使pH值保持在7.5±0.5。表1实施例2所生产的透明质酸发酵液表1发酵液黏度56000mPa.s玻尿酸产量12g/L发酵周期20小时生产的发酵液再经过本领域常用的乙醇沉淀法进行纯化处理即可得到高质量的玻尿酸。表2是所生产的玻尿酸的质量表以下是实施例2对照例：所有操作均一致，仅仅将发酵培养基中的微量元素去除，其生产的玻尿酸发酵液结果见表3表3发酵液黏度40000mPa.s玻尿酸产量8g/L发酵周期24小时生产的发酵液再经过本领域常用的乙醇沉淀法进行纯化处理即可得到高质量的透明质酸。表4是所生产的玻尿酸的质量表综上所述，在发酵培养基中添加微量元素生产玻尿酸，在保证产品质量的情况下，可以缩短发酵周期，节约生产成本，同时提高了玻尿酸产量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备玻尿酸的方法，以兽疫链球菌为发酵菌株，包括如下步骤：将兽疫链球菌接种至固体培养基上进行菌种培养，得到单克隆菌种；配制种子培养基，兽疫链球菌种子培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾组成，将兽疫链球菌接种至种子培养基进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液；配制发酵培养基，所述发酵培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、谷氨酸钠，微量元素液组成，所述微量元素由氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰、乙二胺四乙酸二钠组成，发酵培养基灭菌后调节pH至7.5，将兽疫链球菌种子培养液接种至发酵培养液，即可得到透明质酸发酵液。

【技术特征摘要】
1.一种制备玻尿酸的方法，以兽疫链球菌为发酵菌株，包括如下步骤：将兽疫链球菌接种至固体培养基上进行菌种培养，得到单克隆菌种；配制种子培养基，兽疫链球菌种子培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾组成，将兽疫链球菌接种至种子培养基进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液；配制发酵培养基，所述发酵培养基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、谷氨酸钠，微量元素液组成，所述微量元素由氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰、乙二胺四乙酸二钠组成，发酵培养基灭菌后调节pH至7.5，将兽疫链球菌种子培养液接种至发酵培养液，即可得到透明质酸发酵液。2.根据权利要求1所述的制备玻尿酸的方法，其特征在于：所述b步骤的种子培养液中葡萄糖浓度为1-10g/L，酵母粉浓度为5-10g/L，蛋白胨浓度为10-20g/L，硫酸镁浓度为0.5-2g/L，磷酸二氢钾浓度为0.5-2g/L。3.根据权利要求1所述的制备玻尿酸的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴锋，祝俊，余玉奎，徐飞，王玉刚，楚志强，王会峰，卫锋，赵鑫军，
申请(专利权)人：江苏诚信药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32