新型双特异性抗体及其用途制造技术

本申请提供了新型双特异性抗体，其包含针对人CD3E的抗原结合部和/或针对HER2的抗原结合部。此外，本申请还提供了所述新型双特异性抗体的医学和生物学用途。

【技术实现步骤摘要】
新型双特异性抗体及其用途
本申请大体涉及抗体药物领域，具体而言，本申请提供了新型双特异性抗体及其医学和生物学用途。
技术介绍
双特异性抗体(bispecificantibody，BsAb)是一类人工抗体，其包含两个不同的抗原结合位点。双特异性抗体在生物医药领域，尤其是肿瘤免疫治疗方面应用广泛。双特异性抗体从作用机制上可分为双重信号阻断型和介导细胞功能型。通常，介导细胞功能型双特异性抗体指介导T细胞杀伤的抗CD3双特异性抗体。1985年，利用T细胞杀死肿瘤细胞的概念就已被提出(Stearzatal.Nature1985，314：628-631)。通常认为有效激活T细胞需要双重信号，第一信号来自抗原呈递细胞上MHC-抗原复合物与T细胞受体TCR-CD3的结合，第二信号为T细胞与抗原呈递细胞表达的共刺激分子相互作用后产生的非抗原特异性共刺激信号。由于多数癌细胞表面MHC的表达下调甚至缺失，从而使癌细胞逃逸免疫杀伤。靶向CD3的双特异性抗体则能够分别结合T细胞表面CD3分子和癌细胞表面抗原，从而拉近细胞毒性T细胞(cytotoxicTcell，Tc或CTL)与癌细胞的距离，引导T细胞直接杀伤癌细胞，而不再依赖于T细胞的双重激活信号。双特异性抗体可以是三功能抗体，即一条臂靶向肿瘤细胞上的抗原，另一条臂靶向T细胞的CD3分子，Fc段结合Fc受体。这种抗体使得T细胞、肿瘤细胞和结合抗体Fc结构域的效应细胞形成复合体(MullerandKontermann，BioDrugs2010；24：89-98)。CD3分子有δ、ε、γ、ζ共4个亚基，分子量分别为18.9kDa、23.1kDa、20.5kDa、18.7kDa，各包括171个、207个、182个和164个氨基酸残基。四种亚基组成的6条多肽链与T细胞受体(Tcellreceptor，TCR)紧密结合，形成包含8条多肽链的TCR-CD3复合物，该复合物传导T细胞激活信号，稳定TCR结构。CD3的胞内部分含有免疫受体酪氨酸激活基序(immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif，ITAM)，TCR识别和结合MHC分子呈递的抗原肽，使得T细胞内的酪氨酸蛋白激酶p561ck磷酸化CD3分子中ITAM的酪氨酸残基，之后募集含有SH2(Scrhomology2)结构域的酪氨酸蛋白激酶(如ZAP-70)。ITAM磷酸化和结合ZAP-70是T细胞激活早期信号传导过程的重要生化反应之一。因此，CD3分子有传导TCR识别抗原产生的激活信号的功能。抗CD3E抗体能结合T细胞表面TCR受体复合物中的CD3E亚基，能够提供T细胞激活的第一信号(类似于抗原递呈细胞上的MHC-肽复合物结合到TCR)，有利于T细胞的激活。而且包含针对CD3E的的抗原结合部的双特异性抗体，可以实现T细胞在肿瘤细胞周边的富集，提高T细胞对肿瘤细胞的杀伤效率。由于早期在免疫原性、结构稳定性以及抗体质量控制等方面的不足，限制了双特异性抗体的进一步发展。近年来，上游基因工程抗体和下游生产工艺技术的改进，克服了传统双特异性抗体的缺陷，从而推动了多类新型双特异性抗体进入临床开发阶段。为了解决将两个不同的半抗体进行正确装配的问题，设计开发了多种结构的双特异性抗体。一类双特异性抗体不含Fc区。这类结构抗体的优点是分子量小，可以在原核细胞中表达，不需要考虑正确装配的问题；缺点是由于没有抗体Fc段，不能介导相应的生物学功能，而且半衰期短，因而临床应用受到一定限制。目前已有报道的此类双特异性抗体包括BiTE、DART、TrandAbs、bi-Nanobody等。德国Micromet公司开发的BiTE(bispecificT-cellengager)系列产品是将抗CD3scfv与不同抗肿瘤细胞表面抗原scfv通过肽段进行连接获得的，可同时结合CD3+T细胞和肿瘤细胞。此类抗体克服了稳定性差、表达量低、溶解性低等生产问题，其中Blinatumomab已成功上市。另一类是保留抗体Fc结构域的抗体。此类抗体形成IgG样结构，具有Fc介导的生物学功能。此类双特异性抗体主要有Triomabs、kihIgG、Cross-mab、orthoFabIgG、DVDIgG、IgGscFv、scFv2-Fc等。这些包含Fc段的双特异性抗体，都具有体内半衰期长，能够介导ADCC和CDC等优点。HER2基因位于人17q21染色体，编码分子量185kD的跨膜蛋白，该蛋白有酪氨酸激酶活性，正常状态下以无活性形式存在，参与调节细胞正常分化，通常只在婴儿期表达，成人只在少数组织中低水平表达。HER2基因在正常细胞中是双拷贝基因，通过基因突变激活，其扩增导致转录上调，蛋白表达增加。HER2是人表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)家族的第二个成员，属于I型受体酪氨酸激酶家族，在许多正常和异常表皮细胞的生长、分化和代谢过程中起重要的调节作用，多种肿瘤的发生、发展和疾病状态都与HER2相关。该家族共有4种受体，分别命名为HER1、HER2、HER3和HER4，这些受体相互作用形成同源或异源二聚体，尤以HER2异二聚体为主，在细胞的信号传导过程中发挥重要作用。HER2激活抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞增殖；上调VEGF/VPF，加速肿瘤血管生成，促进肿瘤细胞转移，破坏组织抗侵袭功能(ArtufelMV，ValeroAC，LladoRR，etal.ClinTranslOncol，2005，7.(11)：504-511)。HER2蛋白过表达对诱导细胞分化、增殖和转化以及促进肿瘤转移、侵袭和粘附具有重要作用(HynesNE，StemDF.BiochemBiophysAcTa，1994，1198(2-3)：165-184.)。由于在20％的乳腺癌病例中过表达，而且与不良预后相关，因此HER2在乳腺癌中的作用格外受到关注(Reeseetal.，StemCells1997；15：1-8；Andrecheketal.，ProcNatlAcadSciUSA2000；97：3444-3449.Slamonetal.，Science1987；235：177-182)。因而，靶向CD3和/或HER2的双特异性抗体会在肿瘤治疗中有良好的应用前景。
技术实现思路
第一方面，本申请提供双特异性人IgG1抗体，其包含针对人CD3E的抗原结合部，所述针对人CD3E的抗原结合部包含：如SEQIDNO：3所示的HCDR1，如SEQIDNO：4所示的HCDR2，如SEQIDNO：5所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据Kabat定义。第二方面，本申请提供双特异性人IgG1抗体，其包含针对HER2的抗原结合部，所述针对HER2的抗原结合部包含：如SEQIDNO：9所示的HCDR1，如SEQIDNO：10所示的HCDR2，如SEQIDNO：11所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据K本文档来自技高网...

【技术保护点】
双特异性人IgG1抗体，其包含针对人CD3E的抗原结合部，所述针对人CD3E的抗原结合部包含：如SEQ ID NO：3所示的HCDR1，如SEQ ID NO：4所示的HCDR2，如SEQ ID NO：5所示的HCDR3，如SEQ ID NO：6所示的LCDR1，如SEQ ID NO：7所示的LCDR2，和如SEQ ID NO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据Kabat定义。。

【技术特征摘要】
1.双特异性人IgG1抗体，其包含针对人CD3E的抗原结合部，所述针对人CD3E的抗原结合部包含：如SEQIDNO：3所示的HCDR1，如SEQIDNO：4所示的HCDR2，如SEQIDNO：5所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据Kabat定义。。2.双特异性人IgG1抗体，其包含针对HER2的抗原结合部，所述针对HER2的抗原结合部包含：如SEQIDNO：9所示的HCDR1，如SEQIDNO：10所示的HCDR2，如SEQIDNO：11所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据Kabat定义。3.双特异性人IgG1抗体，其包含针对人CD3E的抗原结合部和针对HER2的抗原结合部，所述针对人CD3E的抗原结合部包含：如SEQIDNO：3所示的HCDR1，如SEQIDNO：4所示的HCDR2，如SEQIDNO：5所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；并且所述针对HER2的抗原结合部包含：如SEQIDNO：9所示的HCDR1，如SEQIDNO：10所示的HCDR2，如SEQIDNO：11所示的HCDR3，如SEQIDNO：6所示的LCDR1，如SEQIDNO：7所示的LCDR2，和如SEQIDNO：8所示的LCDR3；其中HCDR和LCDR根据Kabat定义。4.如权利要求1或3所述的双特异性人IgG1抗体，其中所述针对人CD3E的抗原结合部包含如SEQIDNO：12所示的重链可变区和如SEQIDNO：13所示的轻链可变区。5.如权利要求2或3所述的双特异性人IgG1抗体，其中所述针对HER2的抗原结合部包含SEQIDNO：14所示的重链可变区和如SEQIDNO：13所示的轻链可变区。6.如权利要求1-5中任一项所述的双特异性人IgG1抗体，其中所述针对HER2的抗原结合部为单链抗体(scfv)或Fab片段，和/或所述针对人CD3E的抗原结合部为单链抗体(scfv)或Fab片段。7.如权利要求6所述的双特异性人IgG1抗体，其中所述抗体具有第一臂和第二臂，所述第一臂和第二臂具有选自以下的结构：(1)第一臂包含单链抗体(scfv)形式的针对HER2的抗原结合部，第二臂包含单链抗体(scfv)形式的针对人CD3E的抗原结合部，其中第一臂包含如SEQIDNO：15所示的氨基酸序列并且第二臂包含如SEQIDNO：16所示的氨基酸序列，或者第一臂包含如SEQIDNO：21所示的氨基酸序列并且第二臂包含如SEQIDNO：22所示的氨基酸序列；(2)第一臂包含Fab片段形式的针对HER2的抗原结合部，第二臂包含单链抗体(scfv)形式的针对人CD3E的抗原结合部，其中第一臂包含如...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志刚，刘玉兰，郝小勃，郭晶晶，
申请(专利权)人：北京智仁美博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11