一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒及其应用，所述心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，对MIA3、CDKN2A/B、CELSR2三个与心肌梗死相关基因的多态性位点进行检测，能了解个体在心肌梗死方面的遗传因素，评估心肌梗死发病的相对风险，对于心肌梗死早期诊断、早期治疗、早期干预具有积极的意义。同时还能辅助心肌梗死的诊断，指导合理用药，帮助预测后代患病风险等。

【技术实现步骤摘要】
一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种检验
，具体是一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒及其应用。
技术介绍
随着人类基因组计划(HumanGenomeProject，HGP)的完成，大量疾病相关基因的发现，促进了传统生物医学模式向可预测性、可预防性、个体化和参与性的基因组医学模式转变，为未来发展预防、诊断、治疗长期困扰人类的诸如癌症、心脑血管疾病、糖尿病、神经和精神疾病等重大复杂性疾病开辟了新途径，也为基因科学的产业化提供了良好的机遇。全基因组关联分析(GenomeWideAssociationStudies，GWAS)是应用人类基因组中数以百万计的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)为标记进行病例一对照关联分析，即在一定人群中收集病例组和对照组DNA，进行SNPs芯片扫描，采用关联分析比较受检SNPs标记的某一等位基因频率在病例组和对照组间有无显著性差异，筛选与疾病关联的基因序列变异，做出该SNPs是否与疾病关联的判断，预测疾病的患病率及风险。该方法研究前不需构建任何假设，不再局限于候选基因或候选染色体区域作为关联分析对象，而是针对基因组中所有SNPs，随机进行基因分型，分析SNPs与疾病的关联度，可在全基因组水平上，开展多中心、大样本、反复验证的基因与疾病的关联研究，全面及时疾病发生、发展和治疗的相关遗传基因。目前发现遗传因素，或其与环境因素之间的相互作用参与了几乎所有的人类疾病的发生过程。一些复杂的疾病往往不是由单一基因突变引起的，其发生发展与多基因多位点变异有关，且这些位点的变异可能与环境因素相关，这些位点可提高或降低个体患某种疾病的相对风险，被称为该种疾病的易感位点。根据大量的GWAS结果，已经发现并证明的一系列复杂疾病的易感位点已被普遍应用于基因检测领域。冠心病(CoronaryArteryDisease,CAD)是危害人类健康10大疾病杀手之一，在全世界范围内每年有几百万人死于冠心病，也因此耗费了大量医疗费用，给全世界人们带来深重的灾难。心肌梗塞(MyocardialInfraction，MI)是冠心病的常见并发症，急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfraction，AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。临床上多有剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯类药物不能完全缓解，伴有血清心肌酶活性增高及进行性心电图变化，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。中国心血管病2011年报告显示，心血管疾病的死亡率也逐年上升，农村增长速度高于城市。据美国心脏病协会统计，CAD是美国人民的头号疾病杀手，在美国大约有1400万CAD病人，750万心肌梗塞，而且每年美国大约有150万人患上急性心肌梗塞，其中有1/3的AMI患者死亡(MozaffarianD,BenjaminEJ,GoAS,etal.HeartDiseaseandStrokeStatistics—2015Update[J].Circulation,2015.)。SamaniNJ等在2007年发表在NEnglJMed杂志上的一篇关于CAD全基因组关联分析文章中首先报道SNPrs17465637(MIA3)是CAD的易感位点(SamaniNJ,ErdmannJ,HallAS,etal.Genomewideassociationanalysisofcoronaryarterydisease[J].NewEnglandJournalofMedicine,2007,357(5):443-53.)。Meta-分析结果显示染色体9p21.3遗传变异与冠心病发病风险相关联(PalomakiGE,MelilloS,BradleyLA.Associationbetween9p21genomicmarkersandheartdisease:ameta-analysis.[J].JamatheJournaloftheAmericanMedicalAssociation,2010,303(7):648-56.)，DandonaS等研究也发现染色体9p21常见的基因量变异与冠心病的严重程度相关(DandonaS,StewartAFR,LiC,etal.GeneDosageoftheCommonVariant9p21PredictsSeverityofCoronaryArteryDisease[J].JournaloftheAmericanCollegeofCardiology,2010,56(6):479-486.)。9p21.3上CAD风险相关基因多态性位点成簇存在于一个53kb的区域中，该区域包括两组细胞周期蛋白激酶抑制因子编码基因，细胞周期依赖性激酶抑制基因2A(Cyclin-dependentkinaseinhibitor2A，CDKN2A)和细胞周期依赖性激酶抑制基因2B(Cyclin-dependentkinaseinhibitor2B，CDKN2B)。SatoK等观察发现ANRIL尾部缺失和存在冠心病高风险遗传标记的小鼠体内CDKN2A和CDKN2B基因表达量明显发生了改变(SatoK,NakagawaH,TajimaA,etal.ANRILisimplicatedintheregulationofnucleusandpotentialtranscriptionaltargetofE2F1.[J].OncologyReports,2010,24(3):701-7.)。周丽婷的研究表明，与对照组人群相比，冠心病病患者外周血中CDKN2A、CDKN2BmRNA的表达水平显著降低(P＜0.05)(周丽婷.染色体9p21区域遗传变异及其相邻基因表达与冠心病的关系[D].吉林大学,2014.)。BeigiSSH研究发现，rs4977574突变与伊朗人心肌梗死疾病密切相关。(BeigiSSH,DoostiA.Investigationoftheassociationbetweenrs4977574A>GpolymorphisminANRILgeneandcoronaryarterydiseaseiniranianpopulation[J].InternationalCardiovascularResearchJournal,2015,9(3):139-144.)CELSR(Cadherin,EGF-like,LAG-like,andseven-passreceptor)家族基因CELSR1，CELSR2和CELSR3编码长度超过3000个氨基酸的非典型钙粘蛋白，其胞外域极大，由以下几部分组成：9个N末端重复钙粘结构域，而典型的钙粘蛋白有5个重复结构域，6个表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)类似结构域，2个层粘连蛋白G重复结构域，1个激素受体(hormonereceptormotif，HRM)基序，和1个G蛋白偶联受体的蛋白水解位点(G-protein-coupledreceptorproteolyticsite，GPS)。在胞外域之后紧接着的是7次跨膜结构域(经典钙粘蛋白是单次跨膜类型I蛋白)和胞质尾区(C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCR Buffer、dNTP Mixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'‑GCGAGAGCAGGCCATCTTACAT‑3'，R：5'‑CAGAAATTTGCTGTTCCGTGACTG‑3',2)F：5'‑AGCATGTTTGCTTTCAGGGTACAT‑3'，R：5'‑AATGGAGGTGTGGTCAGCACAG‑3',3)F：5'‑TCGGGAGACTCAGACACCACTG‑3',R：5'‑TCCTTGGAAATGCCAGGAAATG‑3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRa Taq

【技术特征摘要】
1.一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCRBuffer、dNTPMixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'-GCGAGAGCAGGCCATCTTACAT-3'，R：5'-CAGAAATTTGCTGTTCCGTGACTG-3',2)F：5'-AGCATGTTTGCTTTCAGGGTACAT-3'，R：5'-AATGGAGGTGTGGTCAGCACAG-3',3)F：5'-TCGGGAGACTCAGACACCACTG-3',R：5'-TCCTTGGAAATGCCAGGAAATG-3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRaTaqTM酶；所述测序试剂盒采用美国ABI公司的Terminatorv3.1CycleSequencingKit。2.根据权利要求1所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述扩增引物为基于基因MIA3、CDKN2A/B和CELSR2进行设计合成的。3.一种如权利要求1-2任一所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒的应用，其特征在于，具体步骤为：(1)首先，将采集回来的样本按照D...

【专利技术属性】
技术研发人员：何侃，栗娟，王佳，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：上海易瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31