The present invention discloses blueberry shoots droplet vitrification cryopreservation method, is a method of long-term safety, stable and reliable, simple and effective preservation of blueberry germplasm resources, the bud stem tip material cryopreservation, a convenient, on the other hand, because the stem apex meristem containing. Cell regeneration ability, high genetic stability; after cryopreservation of blueberry shoots up to 100% survival rate of shoot regeneration rate was 91.7%.
【技术实现步骤摘要】
越橘植物种质的超低温保存方法
本专利技术涉及植物种质资源保存领域,具体地说,种越橘植物种质的超低温保存方法和超低温保存越橘植物种质恢复培养的方法。
技术介绍
越橘属于杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vacciniumspp.)植物,为多年生落叶或常绿灌木或小灌木树种。全世界越橘属植物约有400个种,我国约有91个种、28个变种,分布于我国东北和西南地区。果实富含花色苷等抗氧化物质,具有改善视力、抗氧化、抗癌及延缓脑神经衰老等保健功能,被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一,同时也被誉为“浆果之王”。种质资源保存是越橘育种和保持遗传多样性的重要保证,培育高产、优质和高抗新品种离不开丰富的种质资源,因此开展越橘种质资源的保存具有重要的意义。目前有关越橘种质资源的保存方法的研究较少,主要集中在原地栽培、迁地栽培以及种子库保存,但原地和迁地栽培管理和取材需要大量的人力、物力,且保存的种质资源占地面积大,易受到病虫害和自然条件的影响。随着生物技术的发展,基于利用植物组织培养技术对越橘种质资源进行保存的研究仅局限于在实验室中对研究材料的保存。一方面保存过程繁琐、费时费力,成本较高;另一方面,随着保存时间的延长和继代次数的增加,保存的材料易受到污染的干扰。超低温保存技术是20世纪70年代在低温保存的基础上发展起来的一门新兴技术。超低温保存通常以液氮(-196℃)为冷源,生物材料保存在如此低温条件下,活细胞内的代谢活动几乎完全停止,因而可使生物材料在该温度下不会发生遗传性状的改变,且保存过程中细胞的活力及形态发生的全能性不受影响。因其具有操作简单,可保存时间长,占用 ...
【技术保护点】
一种越橘植物种质的超低温保存方法,其特征在于,它包括:1)炼苗:选取4周苗龄的组培苗,取0.4‑0.6 cm带有顶芽的茎段接种到WPM培养基上4℃暗处理2—4周;2)越橘茎尖剥取:在无菌条件下,在体视显微镜下剥取炼苗后的顶芽,茎尖长为1.5—2.0mm;3)预培养:将剥取的茎尖接种于添加有0.3M蔗糖的WPM固体培养上,于组培室黑暗培养18—30h;4)装载:将预培养后的离体茎尖转接于装载液中,于室温下装载处理20‑40min;5)玻璃化处理:将装载处理后的茎尖转接于PVS2溶液中,于0℃处理30‑50min;6)小液滴制作:将PVS2处理后的茎尖转移到铝箔条上 ,并向每个茎尖滴加6μLPVS2溶液,使茎尖完全包裹于PVS2小液滴中,每个锡箔条上放9‑11个茎尖;7)超低温冷冻保存:将上述制作好的含有小液滴的锡箔条直接浸入液氮中进行冷冻,然后将冷冻后的锡箔条置于冷冻离心管中,盖紧盖子后,投入液氮中保存。
【技术特征摘要】
1.一种越橘植物种质的超低温保存方法,其特征在于,它包括:1)炼苗:选取4周苗龄的组培苗,取0.4-0.6cm带有顶芽的茎段接种到WPM培养基上4℃暗处理2—4周;2)越橘茎尖剥取:在无菌条件下,在体视显微镜下剥取炼苗后的顶芽,茎尖长为1.5—2.0mm;3)预培养:将剥取的茎尖接种于添加有0.3M蔗糖的WPM固体培养上,于组培室黑暗培养18—30h;4)装载:将预培养后的离体茎尖转接于装载液中,于室温下装载处理20-40min;5)玻璃化处理:将装载处理后的茎尖转接于PVS2溶液中,于0℃处理30-50min;6)小液滴制作:将PVS2处理后的茎尖转移到铝箔条上,并向每个茎尖滴加6μLPVS2溶液,使茎尖完全包裹于PVS2小液滴中,每个锡箔条上放9-11个茎尖;7)超低温冷冻保存:将上述制作好的含有小液滴的锡箔条直接浸入液氮中进行冷冻,然后将冷冻后的锡箔条置于冷冻离心管中,盖紧盖子后,投入液氮中保存。2.根据权利要求1所述的越橘植物种质的超低温保存方法,其特征在于:步骤1)所述的的炼苗时间为3周...
【专利技术属性】
技术研发人员:张志东,孙海悦,刘海广,唐雪东,李亚东,汪立宇,
申请(专利权)人:吉林农业大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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