米槠组织培养的快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种米槠组织培养的快速繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根。本发明专利技术缩短了米槠的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

Rapid propagation of tissue culture method of C.carlesii

The invention discloses a method for rapid propagation of tissue culture of Castanopsis carlesii, including explant selection, explant, bud induction culture, proliferation culture, strong bud culture and rooting culture acquisition process, semi lignified and robust growth in Castanopsis carlesii shoots as explants. The explants were cut, sterilization and disinfection treatment after the initial inoculation to obtain the initial bud bud inducing culture medium, then inoculated on bud proliferation medium after 3 4 cycles of proliferation, formation of buds, the clusters of medium access bud strong buds, the single bud is more than or equal to 2cm into the culture medium for rooting and rooting. The invention shortens the breeding cycle of C.carlesii, saving seedling material, overcomes the problem of materials needed, long cycle of the traditional breeding methods in the nursery there, greatly reduce the production cost, improve production efficiency, and has good economic benefits, social benefits and ecological benefits.

【技术实现步骤摘要】
米槠组织培养的快速繁殖方法
本专利技术属于植物繁殖
，涉及一种米槠组织培养的快速繁殖方法。
技术介绍
米槠（Castanopsiscarlesii（Hemsl.）Hay.），壳斗科锥属，乔木，高可达20米，芽小，叶披针形，叶全缘，或兼有少数浅裂齿，嫩叶叶背有红褐色或棕黄色稍紧贴的细片状蜡鳞层，成长叶呈银灰色或多少带灰白色；雄圆锥花序近顶生，花序轴无毛或近无毛，果序无毛，壳斗近圆球形或阔卵形，坚果近圆球形或阔圆锥形，熟透时无毛，果脐位于坚果底部。3-6月开花，次年9-11月结果成熟。产中国长江以南各地。生于山地或丘陵常绿或落叶阔叶混交林中。喜雨量充沛和温暖气候，能耐荫，喜深厚、温润之中性和酸性土，亦耐干旱和贫瘠。既是优良的用材树种，又是培育食用菌的优良原料，培肥土壤、涵养水源能力都比较强。米槠树形高大、美观，叶椭圆或长圆形。早期生长迅速，适应能力强，抗风力强，又耐烟尘、抗污染并能杀菌。在庭院观赏及营造防火林带中有着广阔的应用前景和发展潜力。组织培养能通过无性繁殖，遗传树种的优良特性，能在短时间内快速繁殖获得大量优质的组培苗，为优质种源推广提供可能。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对米槠组织培养过程中芽增殖系数低，生长缓慢等问题,提供一种生长效果好、扩繁快的米槠嫩枝组培繁殖方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种米槠组织培养的快速繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA4.0-6.0mg/L+IAA2.0-3.0mg/L+KT1.0-2.0mg/L+ZT1.5-2.0mg/L+VC15mg/L+叶酸10mg/L+VB215mg/+琼脂3.0g/L+卡拉胶25g/L。以上所述的增殖培养基的配方为：改良1/2MS培养基+6-BA6.0-8.0mg/L+IAA2.0-3.0mg/L+ZT0.5-1.0mg/L+VC15mg/L+VB215mg+L-半胱氨酸20mg/L+琼脂3.6g/L+卡拉胶30g/L。以上所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA3.0-4.0mg/L+IAA1.0-1.5mg/L+VC15mg/L+VB215mg+L-半胱氨酸20mg/L+琼脂3.5g/L+卡拉胶25g/L。以上所述的生根培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA1.5-2.5mg/L+IAA1.0-1.5mg/L+琼脂3.5g/L+卡拉胶30g/L。以上所述的改良MS培养基的配方为：KNO3890mg·L-1；NH4NO3850mg·L-1；CaCl2·2H2O196mg·L-1；MgSO4·7H2O370mg·L-1；Ca(NO3)2·4H2O720mg·L-1；KH2PO4280mg·L-1；MnSO4·H2O22.3mg·L-1；ZnSO4·7H2O8.6mg·L-1；CuSO4·5H2O0.025mg·L-1；H3BO36.2mg·L-1；Na2MoO4·2H2O0.025mg·L-1；KI0.83mg·L-1；CoCl2·6H2O0.025mg·L-1；维生素B11.0mg·L-1；维生素B60.5mg·L-1；烟酸0.5mg·L-1；甘氨酸2.0mg·L-1；肌醇90mg·L-1。以上步骤（3）所述的初始芽诱导培养的培育控制条件为：光培养、光照500-1000lx，培养温度20±1℃；步骤（4）所述的增殖培养、步骤（5）所述的壮芽培养、步骤（6）所述的生根培养的培育控制条件均为：光培养，光照2500-4000lx，每日光照16h，培养温度25-28℃。相对于现有技术，本专利技术具有的优点和有益效果如下：1、本专利技术以米槠当年生嫩枝作为外植体，经过初始芽培养基培养，初始芽萌动率90%以上；经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，芽增殖系数5/30d-7/30d，再将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，从而缩短了米槠的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率。2、本专利技术将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，余下小芽丛继续增殖培养，使得材料能够多次继代，实现大量增殖，规模化生产壮芽，实现黄樟油素型樟树的扩繁。3、本专利技术对MS基本培养基进行了改良，同时重点调整了与米槠出芽壮芽相关元素，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使米槠芽诱导的发生、增殖和壮芽，效果显著。4、本专利技术操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数达到5以上的组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，置于光培养、光照500lx，培养温度20±1℃的环境中培养30-35d，初始芽萌发、生长；所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA4.0mg/L+IAA2.0mg/L+KT1.0mg/L+ZT1.5mg/L+VC15mg/L+叶酸10mg/L+VB215mg/+琼脂3.0g/L+卡拉胶25g/L；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，置于光培养，光照2500lx，每日光照16h，培养温度25-28℃的环境中，35-40d转接一次本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10‑15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15‑20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30‑35 d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35‑40 d转接一次，循环往复，经3‑4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4‑5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35‑40 d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。...

【技术特征摘要】
1.一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。2.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA4.0-6.0mg/L+IAA2.0-3.0mg/L+KT1.0-2.0mg/L+ZT1.5-2.0mg/L+VC15mg/L+叶酸10mg/L+VB215mg/+琼脂3.0g/L+卡拉胶25g/L。3.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的增殖培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-B...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐春艳，陈素云，
申请(专利权)人：唐春艳，陈素云，
类型：发明
国别省市：广西,45