抗菌药材的筛选方法技术

为解决抗菌药材筛选问题，发明专利技术人提供一种抗菌药材的筛选方法，包括如下步骤：在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材，以制成预设浓度梯度的药敏培养基；在所述药敏培养基上接种致病菌，并将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为待筛药材的最低抑菌浓度。具有操作简便、快捷、耗时短、处理量大，试验成本低，以及药敏试验结果准确可靠等优点。

【技术实现步骤摘要】
抗菌药材的筛选方法
本专利技术涉及药学领域，特别涉及一种抗菌药材的筛选方法。
技术介绍
筛选高效的抗菌药物仍然是治疗细菌性传染病的最主要方法。在测试致病性细菌对某一药物的敏感性时，常用的方法有纸片法、牛津杯法、试管二倍稀释法、平板二倍稀释法等。目前上述四种检测方法存在操作繁琐、工作量大、周期长、培养条件不一致等问题，不能快速地确定致病菌株对各药物的敏感性。尤其在初步筛选抗菌中药时，植物药材种类繁多，每种药材预先要粗提其有效部位，并去除萃取溶剂，操作程序更复杂、耗时更长。
技术实现思路
基于此，需要提供一种针对多菌种可同步进行初筛抗菌中药的快速简便的药敏试验方法。为解决上述问题，专利技术人提供了一种抗菌药材的筛选方法，包括如下步骤：在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材，以制成预设浓度梯度的药敏培养基；在所述药敏培养基上接种致病菌，并将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为待筛药材的最低抑菌浓度。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材的形式包括：加入经超微粉碎的抗菌药材，或，加入含有预设浓度的经超微粉碎的抗菌药材的药液。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，所述经超微粉碎的抗菌药材的尺寸为5-10μm。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，所述步骤“加入含有预设浓度抗菌药材的药液”具体包括：将抗菌药材的超微粉末加蒸馏水在高压灭菌锅中蒸煮，所得物经离心处理后提取上清液。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，加入经超微粉碎的抗菌药材的初始添加浓度为6g/mL。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，加入含有预设浓度的经超微粉碎的抗菌药材的药液的初始添加浓度为1g/mL。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，在步骤“制成预设浓度梯度的药敏培养基”和步骤“在所述药敏培养基上接种致病菌”间还包括步骤：对所述药品培养基进行灭菌处理。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，所述预设时间为24小时。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，在28℃的温度条件下培养24小时。进一步地，所述的抗菌药材的筛选方法中，步骤“在所述药敏培养基上接种致病菌”具体包括：将致病菌制备为107CFU/mL的菌液，以各2μL的剂量接种于所述药敏培养基上，每一块药敏培养基上接种9株致病菌。区别于现有技术，上述技术方案具有操作简便、快捷、耗时短、处理量大(即每一个90mm平皿可同时检测9-12株致病菌对药物的敏感度)，试验成本低，以及药敏试验结果准确可靠等优点，是一种高效率的药敏试验方法，在试验研究中具有很好的应用价值，为开发和应用抗菌植物药提供有益参考。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。第一实施例一种抗菌药材的筛选方法，包括如下步骤：S1、在培养基中加入经超微粉碎处理并保证颗粒尺寸位于5-10μm的抗菌药材，以初始添加浓度6g/mL开始进行二倍稀释，配置为不同浓度梯度的药敏培养基，并进行121℃、20min的灭菌处理。S2、将致病菌制备为107CFU/mL的菌液，以各2μL的剂量接种于所述药敏培养基上，每一块药敏培养基上接种9株病原菌。、S3、在28℃的温度条件下培养24小时，然后将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为作为待筛药材的最低抑菌浓度。第二实施例S1、以蒸馏水和经超微粉碎处理并保证颗粒尺寸位于5-10μm的抗菌药材配制为浓度为1g/mL的混合物在高压灭菌锅中蒸煮，所得混合物经离心处理后提取上清液。S2、对所提取的上清液进行二倍稀释，配置为不同浓度梯度的药敏培养基，并进行121℃、20min的灭菌处理。S3、将致病菌制备为107CFU/mL的菌液，以各2μL的剂量接种于所述药敏培养基上，每一块药敏培养基上接种9株病原菌。、S4、在28℃的温度条件下培养24小时，然后将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为作为待筛药材的最低抑菌浓度。专利技术人同时以滤纸片法和平板二倍稀释法对上述二实施例所述的方法进行了对照，三种方法的具体实施还包括相同的其他条件或过程如下：所使用的药品与试剂：五倍子(GallaChinensis，缩写GC，产地湖北)、石榴皮(PomegranateRind，缩写PR，产地安徽)、大黄(RhubarbOfficinale，缩写RO，产地甘肃)、黄芩(BaicalSkullcapRoot，缩写BSR，产地河北)、虎杖(RhizomaPolygoniCuspidati，缩写RPC，产地福建)、黄连(GoldenThread，缩写GT，产地四川)、连翘(WeepingForsythiaCapsule，缩写WFC，产地江西)、知母(CommonAnemarrhenaRhizome，缩写CAR，产地河北)、首乌藤(CaulisPolygoniMultiflori，缩写CPM，产地江苏)、地榆(RadixSanguisorbae，缩写RS，产地福建)、贯众(DryopterisSetosa，缩写DS，产地四川)、金银花(FlosLonicerae，缩写FL，产地辽宁)、紫花地丁(PurpleflowerViolet，缩写PV，产地河南)；马齿苋(PortulacaOleraceaLinn，缩写POL，产地福建)、苦楝皮(CortexMeliae，缩写CM，产地四川)，国药控股福建有限公司；标准肉汤培养基(Mueller-HintonBroth，M-H)，广东环凯微生物科技有限公司(批号：201111072)。致病菌菌株：9株气单胞菌均为厦门市渔用药物工程技术研究中心从漳浦、莆田、龙岩、福清等养殖场病鳗中分离得到，并经人工感染试验证实为致病菌，同时菌株进行生理生化和基因鉴定，分别确定为气单胞菌属(Aeromonassp.B01、B19)、豚鼠气单胞菌(AeromonascaviaeB14)、嗜水气单胞菌(AeromonashydrophilaB10、B15、B18、B20、B27)、肠棕气单胞菌(AeromonasenteropelgenesB09)。菌悬液制备：从保种斜面上挑取菌苔划线接种M-H琼脂(Mueller-HintonAgar)平板，置于28℃恒温培养箱内培养20h；挑取单个菌落划线至新鲜斜面上，28℃培养24h后，用无菌生理盐水将菌体冲洗下来，采用酶标仪测定菌液浓度，测定波长为600nm。采用菌落计数法确定细菌浊度与吸光度OD600的关系，不同菌株的菌液OD600值约为0.2～0.3时，对应活菌计数值约为108CFU/mL，将菌液浓度稀释10倍调至107CFU/mL，即可作为药敏试验接种的菌悬液。中药高压浸提液的制备：称取50g的中药超微粉，加蒸馏水300mL置于20kHz超声处理40min后，置于高压灭菌锅中煎煮(110℃、10min，95℃、30min)提取，然后用50mL离心管分装，用冷冻离心机8000rpm离心10min，取上清液，放置4℃冰箱保存备用。采用实施例一或二所述技术方案测定9株气单胞菌对15种常用中药的敏感度，实验结果见表1，可见其中五倍子的抑菌效果最佳，其次是首乌藤、地榆，再次为石榴皮、贯众、大黄、黄芩、虎杖，其余中药的抑菌效果极差。B01、B27对五倍子极度敏感，其余7株菌为高度敏感；除B19、B20对首乌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗菌药材的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材，以制成预设浓度梯度的药敏培养基；在所述药敏培养基上接种致病菌，并将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为待筛药材的最低抑菌浓度。

【技术特征摘要】
1.一种抗菌药材的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材，以制成预设浓度梯度的药敏培养基；在所述药敏培养基上接种致病菌，并将培养预设时间后供菌落形成的最低浓度作为待筛药材的最低抑菌浓度。2.如权利要求1所述的抗菌药材的筛选方法，其特征在于，在培养基中加入经超微粉碎处理的抗菌药材的形式包括：加入经超微粉碎的抗菌药材，或加入含有预设浓度的经超微粉碎的抗菌药材的药液。3.如权利要求2所述的抗菌药材的筛选方法，其特征在于，所述经超微粉碎的抗菌药材的尺寸为5-10μm。4.如权利要求2所述的抗菌药材的筛选方法，其特征在于，所述步骤“加入含有预设浓度抗菌药材的药液”具体包括：将抗菌药材的超微粉末加蒸馏水在高压灭菌锅中蒸煮，所得物经离心处理后提取上清液。5.如权利要求2所述的抗菌药材的筛选方法，其特征在于，加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：李忠琴，刘宏伟，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35