一种提取红豆活性蛋白的方法技术

本发明专利技术提供一种提取红豆活性蛋白的方法，包括以下提取步骤：1）选取新鲜红豆，将新鲜红豆置于2‑4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至150‑240目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，酶解3.6‑4.7h后灭酶10‑22min，搅拌，回流浸提3‑4次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入92‑96%的乙醇，搅拌，浸泡14‑22h，得沉淀物；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.02‑0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤，得粗制蛋白液；5）将粗制蛋白液通过大孔树脂纯化，得洗脱液，干燥，得红豆活性蛋白，本发明专利技术提供的这种提取红豆活性蛋白的方法，去除了活性蛋白质内的色素，提高了活性蛋白质的纯度，提取步骤简单，操作方便。

Method for extracting red bean active protein

The invention provides a method for extracting red bean active protein, which comprises the following steps: 1) extracting samples of fresh red beans, red beans soak fresh in 2 4 times of water, grinding to 150 240, red Soybean Milk; 2) adding compound enzyme in red Soybean Milk, 3.6 4.7H after enzymatic hydrolysis 10 22min inactivation, stirred, refluxed and extracted 4 times with 3, extract; 3) mixing in the leaching solution of 96% adding 92 ethanol, 14 soaking 22h, to precipitate; 4) bleaching agent is dissolved, the precipitate in the deionized water and add 0.02 0.04% centrifugal well, ultrafiltration membrane filtration, crude protein solution; 5) the crude protein liquid through macroporous resin purification, elution liquid, drying, have bean protein, red bean protein extract this method provided by the invention, the active protein in the pigment removal, improve The purity of the active protein is simple, and the operation is convenient.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及活性蛋白提取
，尤其是一种提取红豆活性蛋白的方法。
技术介绍
红豆即海红豆(学名:AdenantherapavoninaLinn.var.microsperma)豆科海红豆属，乔木，羽装复叶，小叶长椭圆，圆锥花序，花白色，荚果扁平，种子鲜红色，心材暗褐色，质坚而耐腐，可为支柱、船舶、建筑用材和箱板，种子鲜红色而光亮，甚为美丽，可作装饰品，红豆养心，自古就认为如果心火过旺，则很有可能会引发口疮疖肿、头晕、心悸、烦躁等不适症状。而红豆则具有清热去湿、消肿解毒、补血安神的功效，因此夏天的时候人们都会煮红豆或者绿豆汤来解暑，也就是这个原因了，薏米红豆粥也有有止血调理、清热解毒的功能。在现有蛋白质提取技术中，例如一种提取绿豆活性蛋白的方法，CN102860406A，其包括：将绿豆浸泡、冻结与脱皮后与水按照质量比1:2-3的比例充分混合，然后将其进行充分研磨得到绿豆浆；将所述绿豆浆冷却至0℃-4℃，然后将其加入胶体磨内充分研磨八至十个循环得到料浆；将所述料浆在常温下静置后进行离心分离、低温浓缩与干燥浓缩后，制得淡黄色的绿豆活性蛋白质粉末，该专利技术通过脱皮、研磨、离心、溶出等物理提取方法，将蛋白与淀粉分离，提高了绿豆活性蛋白的制得率，该方法提取的活性蛋白的得率可高达86.7%，纯度高达93.2%，在提取过程无需添加化学试剂，使该专利技术产品绿色环保，无污染。该专利技术的提取活性蛋白步骤中，尚未去除蛋白质中的色素，制备相对简单，提取的活性蛋白纯度相对较低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种提取纯度较高，蛋白含量优质，制备简便的一种提取红豆活性蛋白的方法。为解决上述现有的技术问题，本专利技术采用如下方案：一种提取红豆活性蛋白的方法，包括以下提取步骤：1）选取新鲜红豆，将新鲜红豆置于2-4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至150-240目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，酶解3.6-4.7h后灭酶10-22min，搅拌，回流浸提3-4次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入92-96%的乙醇，搅拌，浸泡14-22h，得沉淀物；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.02-0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤，得粗制蛋白液；5）将粗制蛋白液通过大孔树脂纯化，得洗脱液，干燥，得红豆活性蛋白。作为优选，提取步骤1~5中溶液均处于低温状态，温度为1-5℃，其中步骤2中酶解时温度提升至51-54℃，在低温中提取可防止蛋白质的降解，可提高提取蛋白质的纯度。作为优选，步骤1中选取的新鲜红豆均为除去豆皮的新鲜红豆，浸泡时间为10-18h，去除豆皮便于红豆与水接触，提高红豆有机物的溶解速度。作为优选，步骤2中所加入得复合酶为：通过纤维素酶和果胶酶按1:2-3.7的比例制备的混合物，按该比例制备的复合酶更有效的提高酶解效果。作为优选，步骤2中还需加入蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种，在加温酶解时防止蛋白质的降解。作为优选，步骤3中乙醇加入量为浸提液得2-4倍，促使易容与乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白质等一些不溶于高浓度乙醇的沉淀，起到分离作用。作为优选，步骤4中脱色剂的成分及其重量份为：无水乙醇50-60份，硅藻土15-25份，活性炭15-25份，游离酸1-5份，氰钴胺0.1-0.2份，硫氰酸胍0.01-0.02份，去除蛋白质中含有的色素，提高提取蛋白质的纯度。作为优选，步骤4中超滤膜过滤采用截留分子量为6000-10000Dal的超滤膜，去除杂质，体高纯度。作为优选，步骤5中大孔树脂纯化时先用92-95%的乙醇溶液以1-2.2BV/h的洗脱流速进行洗脱，再用84-90%的乙醇溶液以1.3-2.3BV/h的洗脱流速进行洗脱，最后用蒸馏水以1.4-2.7BV/h的洗脱流速进行洗脱，进行梯度洗过，纯化浓度更高。有益效果：本专利技术提供的这种提取红豆活性蛋白的方法，去除了活性蛋白质内的色素，提高了活性蛋白质的纯度，提取步骤简单，操作方便。氰钴胺和硫氰酸胍通过活性炭具有促进色素脱除的作用，从而使蛋白纯度更高，本专利技术采用了上述技术方案提供一种提取红豆活性蛋白的方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。具体实施方式以下实施例作进一步详细描述：实施例1：一种提取红豆活性蛋白的方法，包括以下提取步骤：1）选取新鲜红豆，将新鲜红豆置于4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至180目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，酶解4.7h后灭酶22min，搅拌，回流浸提4次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入96%的乙醇，搅拌，浸泡22h，得沉淀物；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤，得粗制蛋白液；5）将粗制蛋白液通过大孔树脂纯化，得洗脱液，干燥，得红豆活性蛋白。提取步骤1~5中溶液均处于低温状态，温度为3℃，其中步骤2中酶解时温度提升至51℃，在低温中提取可防止蛋白质的降解，可提高提取蛋白质的纯度。步骤1中选取的新鲜红豆均为除去豆皮的新鲜红豆，浸泡时间为18h，去除豆皮便于红豆与水接触，提高红豆有机物的溶解速度。步骤2中所加入得复合酶为：通过纤维素酶和果胶酶按1:3.7的比例制备的混合物，按该比例制备的复合酶更有效的提高酶解效果。步骤2中还需加入蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种，在加温酶解时防止蛋白质的降解。步骤3中乙醇加入量为浸提液得4倍，促使易容与乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白质等一些不溶于高浓度乙醇的沉淀，起到分离作用。步骤4中脱色剂的成分及其重量份为：无水乙醇50份，硅藻土25份，活性炭15份，游离酸1份，氰钴胺0.1份，硫氰酸胍0.02份，去除蛋白质中含有的色素，提高提取蛋白质的纯度。步骤4中超滤膜过滤采用截留分子量为8000Dal的超滤膜，去除杂质，体高纯度。步骤5中大孔树脂纯化时先用95%的乙醇溶液以2.2BV/h的洗脱流速进行洗脱，再用90%的乙醇溶液以2.3BV/h的洗脱流速进行洗脱，最后用蒸馏水以2.7BV/h的洗脱流速进行洗脱，进行梯度洗过，纯化浓度更高。步骤1~5中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，在此不作详细叙述。实施例2：一种提取红豆活性蛋白的方法，1）选取新鲜红豆，其中选取的新鲜红豆均为除去豆皮的新鲜红豆，去除豆皮便于红豆与水接触，提高红豆有机物的溶解速度，将新鲜红豆置于3倍的清水中浸泡，浸泡时间为15h，研磨粉碎至240目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，加温至53℃增强酶的活性，提高酶解，酶解4.2h后灭酶19min，酶解过程中还需加入0.3%的蛋白酶抑制剂，蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种，在加温酶解时防止蛋白质的降解，搅拌，回流浸提4次，每次浸提的时间为16h，合并得浸提液，其中复合酶为：通过纤维素酶和果胶酶按1:2.9的比例制备的混合物，按该比例制备的复合酶更有效的提高酶解效果；3）在浸提液中加入96%的乙醇，乙醇加入量为浸提液得3倍，搅拌，浸泡22h，得沉淀物，促使易容与乙醇的成分在乙醇中充分溶解，使蛋白质等一些不溶于高浓度乙醇的沉淀，起到分离作用；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤时采用截留分子量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取红豆活性蛋白的方法，其特征在于，包括以下提取步骤：1）选取新鲜红豆，将新鲜红豆置于2‑4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至150‑240目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，酶解3.6‑4.7h后灭酶10‑22min，搅拌，回流浸提3‑4次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入92‑96%的乙醇，搅拌，浸泡14‑22h，得沉淀物；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.02‑0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤，得粗制蛋白液；5）将粗制蛋白液通过大孔树脂纯化，得洗脱液，干燥，得红豆活性蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种提取红豆活性蛋白的方法，其特征在于，包括以下提取步骤：1）选取新鲜红豆，将新鲜红豆置于2-4倍的清水中浸泡，研磨粉碎至150-240目，得红豆浆；2）在红豆浆中加入复合酶，酶解3.6-4.7h后灭酶10-22min，搅拌，回流浸提3-4次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入92-96%的乙醇，搅拌，浸泡14-22h，得沉淀物；4）将沉淀物置于去离子水中并加入0.02-0.04%的脱色剂溶解，离心，超滤膜过滤，得粗制蛋白液；5）将粗制蛋白液通过大孔树脂纯化，得洗脱液，干燥，得红豆活性蛋白。2.根据权利要求1所述的一种提取红豆活性蛋白的方法，其特征在于：所述提取步骤1~5中溶液均处于低温状态，温度为1-5℃，其中步骤2中酶解时温度提升至51-54℃。3.根据权利要求1所述的一种提取红豆活性蛋白的方法，其特征在于：所述步骤1中选取的新鲜红豆均为除去豆皮的新鲜红豆，浸泡时间为10-18h。4.根据权利要求1所述的一种提取红豆活性蛋白的方法，其特征在于：所述步骤2中所加入得复合酶为：通过纤维素酶和果胶酶按1:2-3.7的比例制...

【专利技术属性】
技术研发人员：施春华，张美芬，
申请(专利权)人：嵊州市派特普科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33