本发明专利技术利用现代生物学技术和生物信息学分析对麝香酮(Muscone，简称Mus)在治疗阿尔茨海默病领域进行了研究，发现Mus能够抑制Aβ神经毒性作用，减少神经元死亡，可将麝香酮制备成治疗阿尔茨海默病的注射制剂，对阿尔茨海默病进行治疗。以麝香酮化合物2％(v/v)乙醇和98％(v/v)生理盐水混合，按照500μg：1000ul，制成治疗阿尔茨海默病的注射液制剂。注射液制剂体内腹腔注射剂量为2mg/Kg/天。
Preparation of musk ketone for treating Alzheimer's disease
The invention is the use of modern biological technology and bioinformatics analysis of musk ketone (Muscone, Mus) were studied in the field of treatment of Alzheimer's disease, found that Mus could inhibit A beta neurotoxicity, reduce neuronal death, can be prepared into injections of Muscone in treatment of Alzheimer's disease, the treatment of Alzheimer's disease. An injection preparation for treating Alzheimer's disease is made by mixing 500 keto compound 2% (v/v) ethanol and 98% (v/v) physiological saline, according to the g:1000ul. The amount of intraperitoneal injection in injection preparations was 2mg/Kg/ days.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药
，具体涉及化合物麝香酮(Muscone，简称Mus)作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,简称AD)是一种进行性中枢神经系统退行性疾病，其主要临床特征为进行性记忆及认知功能障碍。65岁以上人群患病率约5％，85岁以上人群患病率则为20％，AD已成为仅次于心脏病、恶性肿瘤、中风的第四位死亡病因，给家庭和社会带来沉重的负担。研究表明，学习与记忆相关的突触形成和重塑与染色质的重塑密切相关，其中组蛋白乙酰化在认知功能方面的重要作用越来越受关注。组蛋白乙酰化稳态受组蛋白乙酰基转移酶(Histoneacetytransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(Histonedeacetylases,HDACs)调控,HATs能够提高转录活性，而HDACs能抑制基因转录。文献研究提示AD患者脑内组蛋白乙酰化水平降低，非特异性HDAC抑制剂(HDACi)能促进组蛋白乙酰化，增强海马长时程增强(Longtermpotentiation,LTP)并增强突触可缩性，改善学习记忆功能。人类HDAC具有11种锌依赖的亚型，其中HDAC2是已被验证的与记忆形成和突触可塑性密切相关的HDAC亚型。HDAC2可结合于一系列与记忆相关的突触形成及突触重塑基因启动子，抑制相关基因表达，损害突触可塑性和记忆形成；相反，阻断HDAC2可改善突触可塑性并增强记忆功能，促进记忆形成。目前临床治疗AD的药物主要分为两类:1)乙酰胆碱酯酶抑制剂；2)N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂。但上述药物可暂时缓解AD临床症状，并不能阻止AD病理进展。非特异性HDACi治疗AD已进入临床实验(II/III期)。但非特异性HDACi作用底物广，因此可能产生较严重的毒副作用。故针对AD的HDAC亚型靶向治疗药物有望为临床AD治疗提供新的理念和策略。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服上述缺陷，研制一种Mus作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用。本专利技术的技术方案是：麝香酮作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用，其主要技术特征在于将麝香酮制备成治疗阿尔茨海默病的注射制剂。所述麝香酮的分子量为238.415Da。所述麝香酮注射制剂为每次腹腔注射2mg/Kg。所述麝香酮2％(v/v)乙醇和98％(v/v)生理盐水混合，按照500μg：1000ul，制成治疗阿尔茨海默病的注射液制剂。所述注射液制剂体内腹腔注射2mg/Kg/天。本专利技术的优点和效果在于治疗阿尔茨海默病时，由于麝香酮(以下简称Mus)：1.是一种小分子化合物，注射用药，可透过血脑屏障；2.作用于AD的病理过程，符合当今研制治疗AD药物的决策；首先直接抑制Aβ神经毒性作用，减少神经元死亡；其次，抑制组蛋白去乙酰化酶2(histonedeacetylase2,HDAC2)表达，调节记忆功能和突触可塑性。本专利技术的其他具体优点和效果将在下面继续说明。本专利技术利用现代生物学技术和生物信息学分析对麝香酮在治疗阿尔茨海默病领域进行了研究，发现Mus能够抑制Aβ神经毒性作用，减少神经元死亡，可将麝香酮制备成治疗阿尔茨海默病的注射制剂，对阿尔茨海默病进行治疗。附图说明图1——MTT检测神经元细胞活力示意图：A——不同浓度Mus处理原代神经元细胞活力图；B——Mus抑制Aβ降低的神经元活力图。图2——Calcein-AM/PI双染检测Mus对Aβ诱导原代神经元细胞凋亡率的影响示意图：A——正常对照组神经元、Mus单独处理组神经元、Aβ单独处理组神经元及Mus预处理后和Aβ共培养组神经元凋亡率示意图；B——各组细胞凋亡率统计图。图3——Westernblot检测Mus对Aβ诱导原代神经元Bcl-2、Bax蛋白表达的影响示意图:A——正常对照组神经元、Mus单独处理组神经元、Aβ单独处理组神经元及Mus预处理后和Aβ共培养组神经元Bax、Bcl-2、GAPDH蛋白条带示意图；B——各组细胞蛋白表达变化统计图。图4——APP/PS1小鼠morris水迷宫实验结果示意图：A——Mus处理后小鼠水迷宫平均逃避潜伏期图；B——第6天去平台，Mus处理后小鼠水迷宫穿越平台次数图；C——第6天去平台，Mus处理后小鼠水迷宫目标象限停留时间图；D——第6天去平台，Mus处理后小鼠水迷宫平均逃避潜伏期图；E——第6天去平台，各组小鼠水迷宫游泳轨迹图。图5——APP/PS1小鼠条件性恐惧实验结果示意图：A——Mus处理后小鼠关联条件恐惧测试凝滞时间示意图；B——Mus处理后小鼠暗示条件恐惧测试凝滞时间示意图。图6——APP/PS1小鼠旷场实验结果示意图：A——Mus处理后小鼠旷场中心区域停留时间示意图；B——Mus处理后小鼠旷场四周拐角区域停留时间示意图；C——Mus处理后小鼠在旷场内运动距离示意图。图7——Golgi染色检测Mus对APP/PS1小鼠脑内海马神经元树突棘密度的影响示意图：A——APP/PS1小鼠海马神经元树突棘密度示意图；B——Mus处理后APP/PS1小鼠海马神经元树突棘密度示意图；B——各组小鼠海马神经元树突棘密度统计图。图8——Westernblot检测Mus对APP/PS1小鼠海马HDAC2蛋白表达的影响示意图。A——Mus处理后小鼠海马HDAC2蛋白条带示意图；B——各组小鼠海马HDAC2蛋白表达变化统计图。具体实施方式本专利技术的技术思路是：从体外到体内水平，系统探讨Mus对Aβ诱导的原代神经元凋亡的影响及Mus对APP/PS1小鼠行为学的影响及其分子机制，以证明Mus系一种治疗AD的新型药物。本专利技术首先，从体外角度，通过体外研究Mus抑制Aβ诱导的原代神经元细胞凋亡作用，从而证明Mus能抑制Aβ神经毒性；其次，从体内角度，行为学验证Mus能改善APP/PS1转基因小鼠认知功能，从而证明Mus对AD具有治疗作用；最后，用分子生物学等技术研究Mus对APP/PS1小鼠海马神经元树突棘密度的影响及Mus对APP/PS1小鼠海马HDAC2蛋白表达的影响，以证明Mus可制备为治疗AD新型药物的应用。下面是本专利技术的具体实施例说明:Muscone，分子量为238.415，棕褐色粉状，干燥避光密封保存于0-5℃；与2％(v/v)乙醇和98％(v/v)生理盐水混合，按照500μg：1000ul，制成治疗阿尔茨海默病的注射液制剂；体内Muscone腹腔注射2mg/Kg/次。该剂量范围内,Mus未见毒、副作用。本专利技术应用过程及测试说明：实施例1：体外研究证明Mus抑制Aβ的神经毒性及其诱导的神经细胞凋亡对AD具有治疗作用：1)材料和方法原代皮层神经元培养：怀孕15-17dC57BL/6J(B6)小鼠，断颈处死后，取其胚胎，置于盛有预冷PBS的培养皿中，分离大脑皮层，1X胰酶消化后，置多聚赖氨酸包被的培养板中培养，1×105个细胞/ml，每2-3d部分换液，共培养8-10d。细胞培养在无血清、无酚红和无雌激素的培养液(Neurobasal加上Hepes、B27和谷氨酰胺)中，37℃，5％CO2培养箱。神经元细胞活力检测：使用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力。向100μl培养液/孔中本文档来自技高网...
【技术保护点】
麝香酮作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用。
【技术特征摘要】
1.麝香酮作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用。2.根据权利要求1所述的麝香酮作为制备治疗阿尔茨海默病药物的应用，其特征在于：麝香酮直接抑制Aβ神经毒性作用，减少神经元死亡；抑制组蛋白去乙酰化酶2(histonedeacetylase2,HDAC2)表达，调节记忆功能和突触可塑性。3.以麝香酮制备成治疗阿尔茨海默病的注射...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐运，杨卉，陈易简，于林杰，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。