透明质酸钠制剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及透明质酸钠制剂的新方法，该方法以鸡冠为原料，经过组织消化、季铵盐分离、提纯、精制，所得产品质量好，收率比现有方法提高５倍以上，成本大幅度下降，宜于规模型工业生产。本发明专利技术公开了该制剂在人体心外科、小儿泌尿外科、椎管外科、妇产科、腹部外科等手术中以及鼓室成型术和防止术后肌腱粘连等方面的新应用。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属透明质酸钠制剂制备方法
透明质酸钠的医用制剂(Sodium Hyaluroanale Product简称SHP)是一种用途广泛的生物材料。目前，一般采用从动物组织中提取制备透明质酸钠制剂，主要原材料有鸡冠或脐带，但因原料及加工成本高而收率低等因素影响了扩大使用。例如美国专利USP4,141,973(1979)揭示的工艺路线鸡冠→清洗→蒸馏水浮联→氯仿萃取/酶消化→氯仿萃取→己醇萃取→成品(透明质酸钠)该方法以5公斤鸡冠投料获得3.97克，收率0.8g/公斤。本专利技术的目的在于克服上述缺点，研制一种成本低、产品质量好、收率高的新方法。本专利技术公开了从鸡冠中提取透明质酸钠制备透明质酸钠制剂的新方法。本专利技术的制备透明质酸钠制剂的新方法的工艺流程如下清洗 绞碎 消化沉淀溶解鸡冠→原料→组织→组织液→沉淀物→分离 溶解 沉淀溶解除菌解离液→粗品→溶解液→沉淀物→溶解液→沉淀 配料 灌装 灯检 包装除菌溶液→沉淀物→制品→→→成品本专利技术的透明质酸钠制剂的制备方法包括下列步骤一.原料处理取新鲜鸡冠或冷藏解冻的鸡冠，用水洗净表面污物、剪去冠尖、冠叶以及附带在鸡冠上含鸡毛的鸡皮等，同时去除鸡冠中所含的淤血块。用水漂洗数次后用蒸馏水漂洗3次，沥干后，置电动绞肉机中绞碎，粉碎的鸡冠组织用乙醇或丙酮浸渍，换浸渍液3次后将该鸡冠组织沥干备用；二.鸡冠组织清化取上述沥干的鸡冠组织，加入2倍量蒸馏水进行热萃取，热萃取的温度30～50℃，萃取时间为2～8小时，然后进入酶消化。(1)胃蛋白酶消化，消化条件为PH1.0～4.0，反应温度25～45℃，消化时间1～6小时，酶用量每公斤原料为10～50克胃蛋白酶，(2)胰蛋白酶消化，消化条件为PH6.0～9.0，反应温度30～50℃，消化时间1～6小时，酶用量每公斤原料为1～20克胰蛋白酶，消化完毕后升温至60～80℃，保温10～30分钟，自然冷却至室温备用；三.季铵盐沉淀及解离液分离取上述消化液，加1～5倍量蒸馏水稀释，依据总体积按重量体积比，加入硅藻土，硅藻土用量为1～5％(w/v)，搅拌均匀后，用真空抽滤法或高速离心法，去除硅藻土，收集澄清上清液，量取体积，加入季铵盐，该季铵盐可以是氯代十六烷基、溴代十六烷基吡啶或硫酸铵，加量为每公斤原料加5～15克季铵盐，搅拌、静置。收集沉淀物、废弃上清液，收集的沉淀物称重，用解离液解商解离液的配制，1000ml蒸馏水中含0.1～1M Nacl，10～50％的乙醇，PH6～9之间，解离后备用；四.有机溶液分离取上述解离液，量取体积，按重量体积比加入硅藻土，硅藻土用量为1～5％(w/v)，搅拌1～3小时后，用真空抽滤法或高速离心法，去除硅藻土，收集上清液，量取体积，根据体积加入1～5倍量的乙醇或丙酮，搅拌、静置、过滤，收集沉淀物，脱水干燥后得透明质酸钠干粉备用；五.除菌过滤取上述的脱水干燥后的透明质酸钠干粉，用蒸馏水配成一定浓度(0.01～～2％)，用0.3um醋酸纤维膜进行除菌过滤，收集除菌滤液，加入1～5倍量无菌丙酮或乙醇过滤，收集沉淀物，真空干燥后得无菌的透明质酸钠制品备用；六.配制灌装透明质酸钠医用制剂取上述无菌的透明质酸钠制品干粉，用无菌配制液将该品配制为0.5-2％浓度的液体或胶体制剂，然后进行灌装可以装在瓶内，亦可直接装入注射器中。该配制液可以是常规药用的生理平衡液、防腐剂、稳定剂、细胞营养液，如氯化钠、磷酸缓冲液、林格氏液等。经上述方法制得透明质酸钠的收率为4.5克纯透明质酸钠/每1公斤鸡冠。比现有方法提高5倍。用本专利技术方法制得的透明质酸钠制剂检测结果如下经上海生物材料研究测试中心抽样测试结果外观 无色透明粘稠状液体蛋白质含量0.025％(w/v)葡萄糖醛酸含量39.78(w/v)特性粘度 1694.16cm3/g平均分子量9.8×105紫外吸收257nm波长 1.72280nm波长 0.30PH值 7.33无菌试验 合格细胞毒性试验 1级毒性反应(0～5分级)溶血试验 无溶血反应热源试验 无热源反应全身急性毒性试验 无急性毒性反应皮内刺激试验无刺激反应短期肌肉种植试验合格(3个月)测试结论合格用本专利技术方法制得的透明质酸钠制剂的急性毒性实验结果如下(由苏州医学院药理教研室实验)一.材料药材(辅料)1％透明质酸钠，无色透明，胶体状，PH7.1，由上海建华精细生物制品厂生产提供，(批号930301)。动物昆明种小白鼠，由苏州医学院实验动物中心供应。二.方法和结果取小白鼠40只，体重18.5～21克，雌雄各半，均分两组，一组为灌胃，另一组为腹腔注射给药。实验前禁食18小时，不禁水，每只小鼠分别给1％透明质酸钠0.5ml/10g(体重)，观察给药后动物活动、进食、饮水及存活情况。实验结果给药后动物活动如常，腹腔注射给药动物未见腹部刺激症状，给药后共观察7日，小鼠活动、进食、饮水、毛的光泽等均未见异常，实验动物全部存活，药后7日称各鼠体重，体重增长均正常。实验结果表明，用相当人临床用量(5ml/次/成人计)500倍的1％透明质酸钠给小鼠灌胃或腹腔注射，未出现动物死亡，也未见任何异常反应。表明该透明质酸钠制剂毒性甚低。该制剂为静脉禁注剂。根据本实验结果，灌胃或腹腔注射给药的LD50＞＞50ml/kg，因而用于各科临床的量是相当安全的。透明质酸钠医用制剂已用于人体临床，例如眼外科、骨关节等，但至今未见其他临床应用的报道。本专利技术人致力于探索其在临床上的新应用，经悉心研究和试验，现证实透明质酸钠医用制剂在人体心外科、小儿泌尿外科、椎管外科、妇产科、腹部外科等手术中以及鼓室成形术和防止术后肌腱粘连等方面有新的应用。本专利技术的另一目的是公开了透明质酸钠医用制剂在人体心外科、小儿泌尿外科、椎管外科、妇产科、腹部外科等手术中以及鼓室成形术和防止术后肌腱粘连等方面的新应用。一.透明质酸钠医用制剂用于心外科手术的临床观察上海中山医院选用上海建华精细生物制品厂提供的医用透明质酸钠制剂-(SHP)应用于心脏病手术防止术后心包粘连，现将观察结果报告如下材料和方法5例中女性3例，男性2例，年龄平均为35岁。病种动脉导管未闭1例，二尖瓣狭管扩张术2例，先天心脏病1例，二尖瓣换瓣术1例。手术方法动脉导管未闭1例采用怀管结扎术后在纵腹胸膜内注入SHP3CC后再缝合纵腹胸膜。另4例，均在心包膜内手术结束，止血后在心脏切口表面及心包膜内注入SHP3CC后缝合心包。术后12小时、24小时、2、3、7天观察全身情况及有无不良反应，记录如下，观察结果术后能正常复苏，术后12小时内无一例出血，心律正常，血压均在正常范围，无高热等，24小时至7天内隔日查血常规，WBC由高逐日降至正常，与原来未用SHP的病人术后情况相同，病员使用SHP后无肝功能、肾功能损害或衰落现象，无恶心呕吐、血压等异常现象，伤口均愈合。结论临床应用证明，透明质酸钠医用制剂无菌、无毒、无感染、无异常反应，经5例病人应用观察，未发现不良反应，术后病人恢复良好。二.透明质酸钠医用制剂在小儿泌尿外科应用的报告上海医科大学儿科医院采用由上海建华精细生物制品厂生产的医用透明质酸钠制剂，进行临床观察。方法1.先天性肾盂积水10例，男8例，女2例年龄5个月—10岁。2.局部本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从鸡冠中提取制备透明质酸钠制剂的方法，其特征在于该方法包括下列步骤： 一．原料处理 取新鲜鸡冠或冷藏解冻的鸡冠，用水洗净表面污物、剪去冠尖、冠叶以及附带在鸡冠上含鸡毛的鸡皮等，同时去除鸡冠中所含的淤血块。用水漂洗数次后用蒸馏水漂洗３次，沥干后，置电动绞肉机中绞碎，粉碎的鸡冠组织用乙醇或丙酮浸渍，换浸渍液３次后将该鸡冠组织沥干备用； 二．鸡冠组织消化 取上述沥干的鸡冠组织，加入２倍量蒸馏水进行热萃取，热萃取的温度３０～５０℃，萃取时间为２～８小时，然后进入酶消化， （１）胃蛋白酶消化，消化条件为ＰＨ１．０～４．０，反应温度２５～４５℃，消化时间１～６小时，酶用量每公斤原料为１０～５０克胃蛋白酶。 （２）胰蛋白酶消化，消化条件为ＰＨ６．０～９．０，反应温度３０～５０℃，消化时间１～６小时，酶用量每公斤原料为１～２０克胰蛋白酶，消化完毕后升温６０～８０℃，保温１０～３０分钟，自然冷却至室温备用； 三．季铵盐沉淀及解离液分离 取上述消化液，加１～５倍量蒸馏水稀释，依据总体积按重量体积比，加入硅藻土，硅藻土用量为１～５％（ｗ／ｖ），搅拌均匀后，用真空抽滤法或高速离心法，去除硅藻土，收集澄清上清液，量取体积，加入季铵盐，搅拌、静置，收集沉淀物、废弃上清液，收集的沉淀物称重，用解离液解离，解离后备用； 四．有机溶液分离 取上述解离液，量取体积，按重量体积比加入硅藻土，硅藻土用量为１～５％（ｗ／ｖ），搅拌１～３小时后，用真空抽滤法或高速离心法，去除硅藻土，收集上清液，量取体积，根据体积加入１～５倍量的乙醇或丙酮，搅拌、静置、过滤，收集沉淀物，脱水干燥后得透明质酸钠干粉备用； 五．除菌过滤 取上述的脱水干燥后的透明质酸钠干粉，用蒸馏水配成一定浓度（０．０１～～２％），用０．３ｕｍ醋酸纤维膜进行除菌过滤，收集除菌滤液，加入１～５倍量无菌丙酮或乙醇过滤，收集沉淀物，真空干燥后得无菌的透明质酸钠制品备用； 六．配制灌装透明质酸钠医用制剂 取上述无菌的透明质酸钠制品干粉，用无菌配制液将该品配制为０．５－２％浓度的液体或胶体制剂，然后进行灌装可以装在瓶内，亦可直接装入注射器中。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：顾其胜，
申请(专利权)人：顾其胜，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]