本发明专利技术公开了一种松杉灵芝蛋白多糖及其制备方法与应用，本发明专利技术的松杉灵芝蛋白多糖，提取自松杉灵芝子实体，其平均分子量在０．５－１．６万道尔顿之间，由蛋白与多糖组成，所述蛋白与多糖的重量比为蛋白∶多糖＝（１５．５－１９．５）∶（８０－８６）；所述多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖组成，它们的重量比为半乳糖∶葡萄糖∶甘露糖∶果糖＝（１．６０－１．７５）∶１．００∶（０．１５－０．２２）∶（０．１０－０．２０），主链以β（１→３）连接。本发明专利技术的松杉灵芝蛋白多糖混合物具有显著的抑制肿瘤的作用和提高免疫功能的作用，具有广阔的药用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种蛋白多糖及其制备方法与应用，特别是涉及从松杉灵芝(Ganoderma tsugae Murrill.)中得到的一种蛋白多糖及其提取方法和该蛋白多糖作为药物的活性成分的应用。
技术介绍
目前临床上治疗肿瘤疾病，主要采用三种方式手术、放疗和化疗，但放疗、化疗严重杀伤人体正常细胞和组织，使许多患者体质迅速下降，甚至不能持续治疗。长期以来，人们在不断地寻找新的具有毒性小、抑瘤率高等特点地抗癌药物。由于肿瘤的发生和扩散与人体的免疫功能有密切关系，所以产生了肿瘤免疫治疗法。二十世纪中后期，发现了一些来源于真菌类的多糖药物，如云芝多糖、香菇多糖、裂褶菌多糖等，它们均具有提高机体免疫力抗肿瘤地作用。这些药物地作用机制一方面是通过宿主中介，激活机体的各种免疫活性细胞，促进各种淋巴因子的分泌，提高机体的抵抗力，达到吞噬和消除肿瘤细胞的作用，另一方面某些多糖，特别是蛋白-多糖对癌细胞有直接杀伤作用，抑瘤率很高，其特点是有效剂量小，抑瘤效果高，毒性很小，甚至无毒。与化疗相比，没有白血球降低，呕吐，免疫力下降等毒副作用。该类天然药物与化疗药物共同使用还可以降低化疗药物的毒副作用。蛋白-多糖抗肿瘤药物是与化疗药物完全不同的一类新的抗癌药物。松杉灵芝(Gamoderma tsugae Murrill.)属于担子菌纲，多孔菌科，灵芝属的一种珍品，具有悠久的民间用药历史，药理活性广泛，且毒性极小。子实体为其地上部分，包括菌盖和菌柄，一起入药，松杉灵芝子实体的化学成分复杂，有三萜类，核苷类，生物碱类，呋喃类，氨基酸类及微量元素等等。水溶性成分主要有多糖类，糖-蛋白类，蛋白-多糖类等等。目前研究表明，多糖及糖-蛋白或蛋白-多糖类复合物具有提高机体免疫功能和抗癌作用。由于多糖的来源不同，分子量大小及空间三维螺旋结构不同，特别是与蛋白质结合方式不同，在药理活性方面，表现出较大差异。MIZUNO等人从赤芝子实体中获得分子量为100万和45万两种水溶性多糖，经小鼠腹腔注射给药，以S180瘤株做实验，具有显著的抑瘤作用。李荣芷，何云庆等从赤芝中获得分子量分别为16200，24500，35000，和40000四种多糖均能显著增加正常小鼠脾细胞IL-2的产生。北京医科大学药学院分离出的分子量为7100-9300的灵芝多糖能促进TNFα、TNFγ mRNA的表达，增加TNFα、TNFγ mRNA的分泌等等。目前对赤芝(Ganoderma Lucidum)和紫芝(Ganoderma Sinersis)的研究比较多。对松杉灵芝(Ganoderma tsugae Murrill.)的研究却罕见报道，其中仅有2003年台湾国际扬名大学在美国申报了名称为《Polysaccharide-based extract from ganoderma，pharmaceutical use thereof，and process for preparing the same》的专利，公开了一种获得松杉灵芝水溶性粗提物的工艺，但该工艺只是涉及到水提醇沉和脱蛋白等步骤，得到的产品是松杉灵芝的初级粗制品。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种松杉灵芝蛋白多糖纯品及其制备方法和以该松杉灵芝蛋白多糖为活性成分的抗肿瘤治疗药和抗肿瘤辅助治疗药。一种松杉灵芝蛋白多糖，提取自松杉灵芝子实体，其平均分子量为0.5-1.6万道尔顿。由蛋白与多糖组成，所述蛋白与多糖的重量比为蛋白∶多糖＝(15.5-19.5)∶(80-86)；所述多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖组成，它们的重量比为半乳糖∶葡萄糖∶甘露糖∶果糖＝(1.60-1.75)∶1.00∶(0.15-0.22)∶(0.10-0.20)，主链以β(1→3)连接。制备松杉灵芝单一蛋白多糖的方法包括以下步骤1)松杉灵芝子实体粉碎物用醇脱脂，得到药渣；2)药渣用去离子水提取，收集提取液；3)将提取液用醇沉淀；4)沉淀物用水溶解后进行微滤；5)滤液经过80-100KD的超滤膜后所得滤液用3-5KD膜超滤，收集膜上的截留物；6)截留物上DEAE-Sepharose(F.F.)、SepharoseCL-6B或DEAE-Cellulose(Cl-)层析柱，用去离子水洗脱，收集洗脱液，经3-5KD膜，收集膜上的截留物；7)截留物上凝胶柱，收集洗脱液中第一流份；8)经3-5KD膜超滤浓缩，冷冻干燥，得到产品。在上述制备方法中，所述用于松杉灵芝子实体脱脂的醇为75-95％的乙醇或甲醇，乙醇或甲醇的重量为所述松杉灵芝子实体粉碎物重量的6-12倍(8-10倍最好)，脱脂在75-80℃条件下进行，回流提取2-3小时，重复3-6次；所述药渣用去离子水提取，收集提取液中，去离子水的重量是所述松杉灵芝子实体粉碎物重量的10-30倍(15-25倍最好)，于90-100℃(98-100℃最好)，间歇搅拌，提取2-3小时，重复3-7次，提取液浓缩至所述松杉灵芝子实体粉碎物重量的7-12倍；所述将提取液用醇沉淀，是向提取液中加入乙醇或甲醇使其终浓度达到75-85％，边加边搅拌，在4-10℃条件下放置，离心(8000rpm，15min)得到沉淀；所述微滤进行至少二次，滤膜的孔径第一次为10μm，如果进行二次，滤膜的孔径分别是10μm、3μm为宜，如果进行三次，滤膜的孔径分别是10μm、5μm和1μm为宜；所述截留物上DEAE-Sepharose(F.F.)、SepharoseCL-6B或DEAE-Cellulose(Cl-)层析柱中，如果采用DEAE-Sepharose(F.F.)层析柱进行层析，一般选用3×80cm规格的层析柱，上样速度应为0.2-0.5ml/min，用去离子水洗脱的速度应为2-4ml/min，如果采用SepharoseCL-6B层析柱进行层析，一般选用3×70cm规格的层析柱，上样速度应为0.2-0.8ml/min，用去离子水洗脱的速度应为1-2ml/min，如果采用DEAE-Cellulose(Cl-)层析柱进行层析，一般选用3×75cm规格的层析柱，上样速度应为0.25ml/min，用去离子水作流动相洗脱柱子，的速度应为4ml/min；所述凝胶柱可以选用现有的凝胶柱，例如Sephadex-G100凝胶柱(3×80cm)，用0.1～0.4mol/L NaOH洗脱，流速一般为1～5ml/min。实验证明，以本专利技术的方法制备的松杉灵芝蛋白多糖为活性成分的药物具有明显的抑制和治疗肿瘤的作用，同时还可以增强机体的免疫力。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等。本专利技术的药物一般制成粉针剂，也可以制成注射液、片剂、粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。上述药物的用量一般为1-2mg松杉灵芝蛋白多糖/kg体重/天。以本专利技术的方法制备的松杉灵芝蛋白多糖是一种奶白色或黄白色的片状物，质轻，易溶于水，纯度高，粘度较小，易于选用各种剂型，给药方便。实验表明，本专利技术的药物抑瘤率高，毒性极小，经动物整体实验研究表明，急性毒理LD50本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种松杉灵芝蛋白多糖，提取自松杉灵芝子实体，其平均分子量在０．５－１．６万道尔顿之间，由蛋白与多糖组成，所述蛋白与多糖的重量比为蛋白∶多糖＝（１５．５－１９．５）∶（８０－８６）；所述多糖由半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖组成，它们的重量比为半乳糖∶葡萄糖∶甘露糖∶果糖＝（１．６０－１．７５）∶１．００∶（０．１５－０．２２）∶（０．１０－０．２０），主链以β（１→３）连接。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：费晓方，
申请(专利权)人：费晓方，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]
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