霍乱弧菌O1胶体金法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明专利技术提供一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体采用胶体金标记。本发明专利技术所提供的霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒首次通过胶体金免疫层析技术检测霍乱弧菌O1，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

Vibrio cholerae O1 colloidal gold assay kit

The invention relates to the field of biological detection, in particular to a Vibrio cholerae O1 colloidal gold detection kit, a preparation method and an application thereof. The present invention provides a kind of Vibrio cholerae O1 colloidal gold detection kit, including the test card, paper card comprises a bottom plate, and is located in the bottom surface from the sample end which are arranged in the sample pad, gold pad, a nitrocellulose membrane and absorbent pad, the pad contains gold labeled monoclonal anti cholera bacteria O1 arc antibody, the nitrocellulose membrane was coated on the detection line and control, anti Vibrio cholerae O1 monoclonal antibody on the gold standard pad using colloidal gold. Gold reagent box of Vibrio cholerae O1 colloid provided by the invention for the first time through the detection of Vibrio cholerae O1 colloidal gold immunochromatographic technique, both sensitivity and specificity, the operation is simple and accurate with fast and economical advantages.

【技术实现步骤摘要】
霍乱弧菌O1胶体金法检测试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。
技术介绍
霍乱弧菌(Vibriocholerae)是霍乱的病原体，根据其O抗原的不同可分为200多个血清群，其中Ol群是引起人类霍乱的主要血清群。霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。人类是霍乱弧菌的唯一易感者。霍乱弧菌进入消化道到达小肠，在肠粘膜表面吸附并迅速繁殖。产生的霍乱肠毒素作用于小肠粘膜，引起小肠液过度的分泌。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为上吐下泻，导致脱水和代谢性酸中毒、循环衰竭，死亡率甚高。属于国际检疫传染病。霍乱是我国法定的甲类传染病，国家要求在接诊24h内报出检验结果。因此，及早鉴定出霍乱弧菌对控制该病的流行和治疗有极其重要的意义。目前霍乱弧菌的快速诊断方法如快速制动试验和免疫荧光菌球试验等效果不理想，主要因为患者粪便中的霍乱弧菌时多时少，最少时检查结果呈阴性。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体采用胶体金标记。优选的，所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体采用150nm胶体金标记，具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。优选的，所述底板为PVC底板。优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。优选的，所述检测线上包被有抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体。所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体与检测线上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50-100mM。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和特异性，本专利技术所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。优选的，所述检测试剂盒用于检测霍乱弧菌O1。本专利技术所提供的霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒，可配套免疫定量分析仪器使用。免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值。使用前先将不同标准品滴加到试纸卡上，分析处理建立定标曲线(T/C信号值与标准品真实值的关系)，再将检测样品时获得的T/C值与标准曲线比较，即可获得检测样品中的霍乱弧菌O1抗原含量。本专利技术第二方面提供所述霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用胶体金标记的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体溶液喷涂金标垫，制得包含抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体的金标垫；2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体及羊抗鼠抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜；3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和特异性，本专利技术所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。本专利技术第三方面提供所述霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒在霍乱弧菌O1检测领域的用途。本专利技术的有益效果为：本专利技术所提供的霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒首次将霍乱弧菌O1通过胶体金免疫层析技术进行检测，兼具高灵敏性和高特异性，能够快速检测霍乱弧菌O1。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体采用胶体金标记。

【技术特征摘要】
1.一种霍乱弧菌O1胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体采用胶体金标记。2.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。3.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上包被有抗霍乱弧菌O1型单克隆抗体。4.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，质控线上包被羊抗鼠抗体。5.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50～100mM。6.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10～40mM。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁晓辉，
申请(专利权)人：上海凯创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31