生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用技术

本发明专利技术是关于一种生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用，该生防菌株制剂及其粗毒素的制备方法包括以下步骤：1)将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在25‑30℃振荡培养20‑30h，得到种子培养液；2)将所述的种子培养液接种于发酵培养基中在25‑30℃振荡培养5‑7天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂；3)将发酵产物离心后收集上清液，用乙酸乙酯溶液萃取后旋蒸浓缩，最后用甲醇定容即为茄葡柄霉粗毒素；其中，所述的生防菌株分离于自然发病的田旋花叶片。本发明专利技术的生防菌株制剂和粗毒素对田旋花具有较强的致病力，对棉花无抑制作用，可以作为一个田旋花的潜在生防资源。本发明专利技术制剂和粗毒素的制备方法简单，适用于大规模生产。

The preparation method of biocontrol agents and toxin and Application

The present invention relates to a preparation method of biocontrol agents and crude toxin and application, preparation method of the biocontrol strains of crude toxin preparation and comprises the following steps: 1) will be activated after biocontrol strains were inoculated in the seed culture medium, cultured for 20 30h in 25 30 DEG C to get oscillation. The seed medium; 2) the seed medium inoculated in fermentation medium in 25 30 C 5 shaking culture for 7 days, get the fermentation liquid after culture, namely the biocontrol strains preparation of Convolvulus arvensis; 3) the fermentation supernatant was collected after centrifugation, steam condensed with ethyl acetate solution after extraction with methanol and spin, constant volume is eggplant Portuguese by toxin which handle; the biocontrol strains were isolated from naturally infected field bindweed leaves. The invention of biocontrol agents and crude toxin has strong pathogenicity of field bindweed, had no inhibitory effect on cotton, can be used as a potential field bindweed prevention resources. The preparation of the invention and the preparation method of crude toxin are simple and suitable for large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用
本专利技术涉及一种生防菌株制剂，特别是涉及一种生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用。
技术介绍
近年来棉田杂草严重威胁棉花生产，造成严重经济损失，我国每年因其危害造成皮棉损失约为25.5万t，均减产14.8％，重者达50％。近些年来新疆棉田杂草防治以播种前使用土壤封闭剂进行土壤封闭为主，有效的控制杂草的爆发，但其一直未能有效控制恶性杂草田旋花的危害，因为田旋花对化学除草剂具有天然耐受能力。随着种植业结构的不断调整、机械化程度的不断提高及化学除草剂的大面积使用，棉田杂草群落结构随之发生变化，但田旋花一直是新疆棉田优势种群，严重制约着新疆棉花早熟、优质、高产及低耗。田旋花(ConvolvulusarvensisL.)是一种世界范围内的多年生恶性杂草，被世界粮农组织列为世界上危害最为严重的杂草之一，田旋花以根芽及种子进行繁殖，每10cm的地下根可产生9-21个不定根和7个不定芽，其结种量大，种皮坚硬，抗逆能力强，根部断开后仍能进行生长。田旋花靠根部与作物争夺水和养分资源，凭借强有力缠绕能力，与作物争夺光照和空间资源，一旦进入农田，农作物生长发育严重受阻，最终导致作物品质和产量下降。田旋花在棉花吐絮期危害时，其缠绕棉株棉株，严重影响机械化采收质量。目前对棉田中田旋花的防治措施主要以出苗后人工拔除及定向喷施灭生性除草剂为主，人工拔除不仅费时费力，且大大增加了生产成本，定向喷施灭生性除草剂难度较大且极易对棉株造成药害，难以大面积的在新疆棉田中应用。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于，提供一种新型生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用，所要解决的技术问题是使其能够抑制田旋花的生长，从而更加适于实用。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种生防菌株制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在25-30℃振荡培养20-30h，得到种子培养液；2)将所述的种子培养液接种于发酵培养基中在25-30℃振荡培养5-7天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂；其中，所述的生防菌株分离于自然发病的田旋花叶片。本专利技术的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。优选的，前述的生防菌株制剂的制备方法，其中所述的种子培养基为：去皮马铃薯煮沸滤液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸馏水定容至1L。优选的，前述的生防菌株制剂的制备方法，其中所述的发酵培养基的为：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰红0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸馏水定容至1L，pH为7.0～7.5；其中所述的含氮化合物为氯硝胺和可溶性铵盐中的一种。优选的，前述的生防菌株制剂的制备方法，其中所述的种子培养液和发酵培养基中培养前的发酵液体积比为2％-5％。优选的，前述的生防菌株制剂的制备方法，其中所述的步骤1)和步骤2)中的振荡的速度均为150-250r/min。优选的，前述的生防菌株制剂的制备方法，其中所述的碳水化合物为葡萄糖、蔗糖或淀粉。本专利技术的目的及解决其技术问题还采用以下的技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种生防菌株制剂的应用，本专利技术所述的生防菌株制剂用于抑制田旋花的生长。本专利技术的目的及解决其技术问题还采用以下的技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种生防菌株粗毒素的制备方法，将本专利技术所述的培养后的发酵液离心，收集上清液，将所述的上清液萃取，浓缩，得到生防菌株粗毒素。本专利技术的目的及解决其技术问题还采用以下的技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种生防菌株粗毒素的应用，用甲醇将本专利技术所述的生防菌株粗毒素溶解后再用清水配成浓度为50-800mg/L的溶液，将所述的溶液用于抑制田旋花的生长。借由上述技术方案，本专利技术生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用至少具有下列优点：本专利技术的生防菌株制剂和粗毒素对田旋花具有较强的致病力，对棉花无抑制作用，可以作为一个田旋花的潜在生防资源，本专利技术的生防菌株制剂对田旋花的致死率为86.87％-91.23％，浓度为400-800mg/L生防菌株粗毒素对田旋花的抑制作用较高，对田旋花的致死率为88.00％-96.67％。本专利技术制剂和粗毒素的制备方法简单，适用于大规模生产。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并详细说明如后。具体实施方式为更进一步阐述本专利技术为达成预定专利技术目的所采取的技术手段及功效,以下结合较佳实施例，对依据本专利技术提出的生防菌株制剂和粗毒素的制备方法以及应用其具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征或特点可由任何合适形式组合。本专利技术的一个实施例提出的一种生防菌株制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在25-30℃振荡培养20-30h，得到种子培养液；较佳的，本专利技术实施例生防菌株制剂的制备方法中的种子培养基为：去皮马铃薯煮沸滤液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸馏水定容至1L；2)将所述的种子培养液接种于发酵培养基中在25-30℃振荡培养5-7天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂；其中，所述的生防菌株分离于自然发病的田旋花叶片。生防菌株从新疆自然发病的田旋花叶片上分离得到，具体的分离方法为：将自然发病的田旋花叶片置于无菌水中漂洗3次，在无菌工作台上用灭菌滤纸吸取多余水分，用无菌刀取病健交接处组织，置于体积浓度为75％酒精中消毒30s，再置于体积浓度为0.1％的HgCL溶液中30s，再用无菌水漂洗5次，最后置于灭菌滤纸上晾干，置于PDA培养基上28℃培养，用单菌丝分离法纯化，将其保存于PDA斜面上。较佳的，本专利技术实施例生防菌株制剂的制备方法中的发酵培养基的为：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰红0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸馏水定容至1L，pH为7.0～7.5；其中所述的含氮化合物为氯硝胺和可溶性铵盐中的一种；其中碳水化合物提供碳源，含氮化合物提供氮源。较佳的，本专利技术实施例菌株制剂的制备方法中的种子培养液和发酵培养基中培养前的发酵液体积比为2％-5％。较佳的，本专利技术实施例生防菌株制剂的制备方法的步骤1)和步骤2)中的振荡的速度均为150-250r/min。较佳的，本专利技术实施例生防菌株制剂的制备方法中的碳水化合物为葡萄糖、蔗糖或淀粉。实施例1将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在28℃、250r/min培养24h，得到种子培养液，种子培养基配方为：去皮马铃薯煮沸滤液200g，葡萄糖20g，蒸馏水定容至1000mL；将20mL的该种子培养液接种于发酵培养基中在25C、180r/min振荡培养5天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂，发酵培养基配方：酵母膏15g，蔗糖120g，氯硝胺0.8g，玫瑰红0.1g，氯霉素0.08g，蒸馏水定容至1000mL，pH7.0。实施例2将活化后的生防菌株接种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生防菌株制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在25‑30℃振荡培养20‑30h，得到种子培养液；2)将所述的种子培养液接种于发酵培养基中在25‑30℃振荡培养5‑7天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂；其中，所述的生防菌株分离于自然发病的田旋花叶片。

【技术特征摘要】
1.一种生防菌株制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将活化后的生防菌株接种于种子培养基中，在25-30℃振荡培养20-30h，得到种子培养液；2)将所述的种子培养液接种于发酵培养基中在25-30℃振荡培养5-7天，得到培养后的发酵液，即为防治田旋花的生防菌株制剂；其中，所述的生防菌株分离于自然发病的田旋花叶片。2.根据权利要求1所述的生防菌株制剂的制备方法，其特征在于，所述的种子培养基为：去皮马铃薯煮沸滤液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸馏水定容至1L。3.根据权利要求1所述生防菌株制剂的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基的为：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰红0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸馏水定容至1L，pH为7.0～7.5；其中所述的含氮化合物为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学坤，惠慧，刘政，林克剑，赵静，孙艳，郭甜甜，陈兵，冯丽凯，王振辉，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，石河子农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：新疆,65