水痘带状疱疹病毒gE抗原及其在检测抗水痘带状疱疹病毒抗体中的用途制造技术

本发明专利技术公开了能够检测抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是抗水痘带状疱疹病毒中和抗体的水痘带状疱疹病毒gE糖蛋白抗原，还公开了该抗原在制备检测抗水痘带状疱疹病毒中和抗体的检测试剂中的用途以及相应的检测试剂盒。

Varicella zoster virus gE antigen and its use in detection of antibodies against varicella zoster virus

The present invention discloses to the detection of anti varicella zoster virus antibody, especially the varicella zoster virus glycoprotein gE antigen and anti varicella zoster virus antibody detection reagent, and also discloses the application of the antigen in the preparation and detection of anti varicella zoster virus antibody and the corresponding detection kit.

【技术实现步骤摘要】
水痘带状疱疹病毒gE抗原及其在检测抗水痘带状疱疹病毒抗体中的用途
本专利技术涉及抗体的免疫检测领域，特别是抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体的免疫检测领域。
技术介绍
水痘是由水痘带状疱疹病毒(varicella-zostervirus，VZV)原发感染引起的疾病。水痘属于高传染性疾病，在世界范围流行性传播。水痘的易感人群主要是儿童，其特征为全身性疱疹并常伴有发热症状。对于绝大多数具有正常免疫能力的儿童而言，水痘属于一种良性的自限性疾病；但是对于因各种原因导致免疫功能低下的人群，VZV感染可能引起严重的、甚至是致命的疾病。研究表明，自然感染或免疫接种水痘减毒活疫苗后，机体可以再次被水痘病毒感染或激活而不产生任何临床症状，临床上二次感染水痘较罕见。VZV属疱疹病毒科疱疹病毒亚科，为双链DNA病毒。VZV呈现为典型的脂质双层结构。基因组为线性双链DNA分子，由大约124884个碱基对组成，分子量为(80±3)×106道尔顿。该病毒基因组由71个开放读码框(ORF)组成，编码约69种蛋白质。基因产物按立即早期基因(IE)、早期基因(E)、晚期基因(L)顺序进行表达。L基因编码一些结构蛋白，如衣壳蛋白及糖蛋白。VZV病毒基因至少编码9种糖蛋白：gE、gB、gH、gI、gC、gL、gK、gM、gN，他们主要存在于病毒囊膜和感染细胞的细胞膜中，与病毒的致病性和免疫原性有着密切关系。国内关于水痘方面的研究往往限于疫苗的研制和开发，而缺乏大范围人群正式使用后的评估。只有从病人及人群进行研究才能更好地对疫苗免疫效果进行评估，并且经临床试验证明有效的疫苗应继续进行上市后大规模人群应用后的研究，这样能得到真实的保护效果状况。随着接种水痘疫苗人数的增加，现在迫切需要一种快速、简便同时具有高灵敏度、高特异性优点的检测抗VZV抗体的方法，以此来判断接种疫苗后个体对VZV的敏感度以及对疫苗的免疫应答状况。目前检测VZV抗体的方法主要有酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)、兔抗糖蛋白抗体ELISA(gpELISA)、膜抗原荧光抗体测定(fluorescentantibodytomembraneantigenassay，FAMA)、间接荧光抗体试验(indirectfluorescent-antibodytechnique，IFAT)、补体结合试验(CF)、免疫吸附血凝试验((immuneadherencehemagglutinationassay，IAHA)、放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)、中和试验(ENT)、乳胶凝集试验(LA)等，其中最常用的是FAMA和ELISA法。FAMA法是目前进行血清中抗体检测的金标准，是检测人群VZV抗体水平最佳的方法，可以较准确的确定免疫效果，已经成为评价其他方法的标准。FAMA法在VZV与其它疱疹病毒一起时，并不会出现交叉性反应，特异性良好，特别是在血清中抗VZV血清抗体水平比较低时灵敏度也较高，很适合用于疫苗免疫后血清学的评价。但FAMA法存在一些缺点，例如反应时间长，操作繁琐，不能实现自动化、标准化、不宜检测大批量样本，这使FAMA法不适合大批量的检测血清，无法广泛使用。由于ELISA操作简单、快速，并且可进行大批量检测，因此它是目前使用最为广泛的方法。ELISA检测特异性IgG抗体水平应用广，ELISA间接法具有方法简单、准确度高、无需特殊仪器等特点，通过包被纯化的表位抗原，以WHOVZV血清抗体参考品为标准品，建立了定量检测抗VZV中和抗体的ELISA方法。但目前市售的ELISA试剂盒采用的是全病毒抗原包被，因此敏感性较差。血清学方法检测VZV抗体对于易感人群的确定和鉴别、水痘疫苗免疫策略的研究以及疫苗免疫效果的评价具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术经过对VZV病毒基因组以及表达蛋白进行分析找到了能够特异性检测抗VZV抗体的gE抗原，并且基于所发现的gE抗原可以实现特异性检测人血中抗VZV抗体。具体而言，在本专利技术的一个方面中，涉及一种检测抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体的水痘带状疱疹病毒gE抗原，其中所述抗原选自如下氨基酸序列中的一种或一种以上：a.SEQIDNO.1所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.1所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列的序列；b.SEQIDNO.2所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.2所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列的序列。在本专利技术的另一个方面中，涉及上述水痘带状疱疹病毒gE抗原在检测抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体中的用途。在该方面的一些实施方案中使用上述水痘带状疱疹病毒gE抗原通过免疫检测方法检测所述抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体，免疫检测方法例如酶联免疫法、放射免疫法、荧光免疫法、化学发光法、胶体金法、乳胶法以及其它方法，并且其中酶联免疫法例如酶联免疫吸附测定法，荧光免疫法例如时间分辨荧光免疫法。在本专利技术的再一个方面中，涉及测定抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体的试剂盒，所述试剂盒包括检测抗水痘带状疱疹病毒抗体、尤其是中和抗体的水痘带状疱疹病毒gE抗原，其中所述抗原选自如下氨基酸序列中的一种或一种以上：a.SEQIDNO.1所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.1所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列的序列；b.SEQIDNO.2所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.2所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列的序列。除此之外，试剂盒还包括免疫诊断方法例如酶联免疫法、放射免疫法、荧光免疫法、化学发光法、胶体金法或乳胶法等通常所使用的其它试剂。所述的这些试剂例如是检测人IgG、IgM或者IgA的试剂，诸如羊或兔抗人IgG、IgM或IgA的抗体等。附图说明图1是描述水痘带状疱疹病毒gE序列抗原性分析的图。图2显示3种水痘带状疱疹病毒gE抗原纯化后的SDS-PAGE图。具体实施方式VZV的gE也称作gpI，是由ORF68编码的包含623个氨基酸的糖蛋白，分子量为60kDa-98kDa，具有典型的I型跨膜蛋白结构，包括一个544aa的亲水性胞外区、17aa的疏水性跨膜区和62aa的富含电荷的胞内区。VZVⅠ型糖蛋白是VZV所有糖蛋白中表达量最大的。gE蛋白主要分布在病毒颗粒的包膜以及感染VZV的细胞质和细胞膜上。基于此，本专利技术人认为gE糖蛋白可能是潜在的VZV抗体检测用抗原。目前，水痘带状疱疹病毒中和抗体的检测多以血凝试验检测为主，通过检测待测血清能否抑制由水痘带状疱疹病毒引发的红细胞的凝集作用，确定水痘带状疱疹病毒中和抗体的存在。但该检测过程中使本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测抗水痘带状疱疹病毒抗体的水痘带状疱疹病毒gE抗原，其特征在于所述抗原选自如下氨基酸序列中的一种或一种以上：a. SEQ ID NO.1所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQ IDNO.1具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQ ID NO.1所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQ IDNO.1具有80%以上相似性的序列的序列；b. SEQ ID NO.2所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQ IDNO.2具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQ ID NO.2所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQ IDNO.2具有80%以上相似性的序列的序列。

【技术特征摘要】
1.检测抗水痘带状疱疹病毒抗体的水痘带状疱疹病毒gE抗原，其特征在于所述抗原选自如下氨基酸序列中的一种或一种以上：a.SEQIDNO.1所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.1所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.1具有80%以上相似性的序列的序列；b.SEQIDNO.2所示序列，或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列，或者包含SEQIDNO.2所示序列或者通过氨基酸替换、缺失或者增加而与SEQIDNO.2具有80%以上相似性的序列的序列。2.权利要求1所述的水痘带状疱疹病毒gE抗原，其特征在于所述的抗水痘带状疱疹病毒抗体是抗水痘带状疱疹病毒的中和抗体。3.权利要求1所述的水痘带状疱疹病毒gE抗原在检测抗水痘带状疱疹病毒的抗体中的用途。4.权利要求3所述的用途，其特征在于所述的抗水痘带状疱疹病毒的抗体是抗水痘带状疱疹病毒的中和抗体。5.权利要求3或4所述的用途，其特征在于使用所述的水痘带状疱疹病毒gE抗原通过免疫检测方法检测所述抗水痘带状疱疹病毒抗体。6.权利要求5所述的用途，其特征在于所述的免疫诊断方法包括酶联免疫法、放射免疫法、荧光免疫法、化学...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贺秋，孙妮娜，陈庆全，
申请(专利权)人：北京市华信行生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11