The invention discloses a method for synthesizing a two amino acid peptide, nerve including tert butoxycarbonyl phenylalanine arginine methyl ester (BOC Phe Arg OMe) synthesis, BOC tryptophan glycine ethyl ester (BOC Trp Gly OEt) synthesis, BOC tryptophan glycine ethyl ester (BOC Trp Gly OEt) BOC Phe deprotection, Arg Trp Gly OEt synthesis, separation and purification of peptide products, the invention in non-aqueous enzymatic synthesis of amino acid nerve two peptides, two peptides synthesis selection of two organic solvents dimethylformamide (DMF), and appropriate increase water content by adding three triethylamine solvent and in non-aqueous organic solvent, to increase the solubility of hydrophilic amino acid, improve the utilization degree of hydrophilic amino acids, reaction conditions of enzymatic mild, stereo specificity, no side chain protecting groups, do not produce chiral molecules .
【技术实现步骤摘要】
一种氨基酸神经二肽的合成方法
本专利技术属于肽合成
,尤其涉及一种氨基酸神经二肽的合成方法。
技术介绍
酶催化肽合成的研究现状:生物活性肽是一类重要的物质,在生命活动中具有各种各样的生物功能,但它们在体内含量极少,提取困难,因此用人工方法合成它们,具有重要的理论意义和实际意义。例如高血压、胃肠病、糖尿病等的起因与治疗均与活性肽相关。目前,在国外,尤其美、日、德等发达国家,医用肽的研究非常活跃。生物技术在肽研制方法的应用已经产生了一批以新方式治疗疾病并确之有效的新药。我国在这一领域的研究有了飞速的发展。合成功能短肽,已有不少报导,有些功能短肽合成已达到工业化的规模。酶法合成的肽类现在主要集中在有实际意义的多肽激素与具有营养的肽类,并且在这些方面,国内外有文献报导,其中较为成功的有利用嗜热菌蛋白酶或木瓜蛋白酶进行天冬糖精的生产,它是一种低热量的新型食品添加剂,对糖尿病人尤其有益。用木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶合成Leu和Met-脑菲肽,用羧肽酶-Y和胰凝乳蛋白酶合成Met-脑菲肽,用嗜热菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶等合成雨蛙肽等。陈水田等人用Alcalse在乙醇中合成了含有D型氨基酸的二肽,在理论和实际应用上都有重要的意义。在国外生物活性肽的研究非常活跃,并在肽研制的应用方面产生了一批新药,带来巨大经济效益。日本Grnrtch公司研制的松弛肽用来治疗创伤和侏儒症,以及美国Telios制药公司生产的一种治疗创伤的小肽。创伤愈合肽类在美国年销售额达十亿美元。应用肽类药物攻克艾滋病HIV-1已成为新的尝试,生物活性肽的合成也是一个很活跃的领域,继 ...
【技术保护点】
一种氨基酸神经二肽的合成方法,其特征在于,该氨基酸神经二肽的合成方法包括以下步骤:叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂的合成:叔丁氧羰基苯丙氨酸加入质量为0.53g,精氨酸甲脂加入质量为1.04g,有机溶剂二甲基甲酰胺20ml,1ml三乙胺,三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液,加入胰凝乳蛋白酶2g,40℃水浴振荡3天,每隔8h取50μl加入500μl冰乙酸终止反应,用质谱检测产物的生成;叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的合成:BOC‑Trp加入质量为0.16g,Gly‑OEt加入质量为0.62g,有机溶剂二甲基甲酰胺20ml,1ml三乙胺,三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液,加入胰凝乳蛋白酶g,40℃水浴振荡3天,每隔8h取50μl加入500μl冰乙酸终止反应,用质谱检测产物的生成;叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂和叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的处理:将含有叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂和叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的有机溶剂二甲基甲酰胺,分别减压蒸馏除去有机溶剂二甲基甲酰胺,再用乙酸乙酯溶解,乙酸乙酯分别用冷柠檬酸洗三次,冷的碳酸氢钠洗两次,再用冷水洗两次,减压蒸馏,除乙酸乙酯,得微黄色无定型物;叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸 ...
【技术特征摘要】
1.一种氨基酸神经二肽的合成方法,其特征在于,该氨基酸神经二肽的合成方法包括以下步骤:叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂的合成:叔丁氧羰基苯丙氨酸加入质量为0.53g,精氨酸甲脂加入质量为1.04g,有机溶剂二甲基甲酰胺20ml,1ml三乙胺,三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液,加入胰凝乳蛋白酶2g,40℃水浴振荡3天,每隔8h取50μl加入500μl冰乙酸终止反应,用质谱检测产物的生成;叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的合成:BOC-Trp加入质量为0.16g,Gly-OEt加入质量为0.62g,有机溶剂二甲基甲酰胺20ml,1ml三乙胺,三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液,加入胰凝乳蛋白酶g,40℃水浴振荡3天,每隔8h取50μl加入500μl冰乙酸终止反应,用质谱检测产物的生成;叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂和叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的处理:将含有叔丁氧羰基苯丙氨酸精氨酸甲脂和叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂的有机溶剂二甲基甲酰胺,分别减压蒸馏除去有机溶剂二甲基甲酰胺,再用乙酸乙酯溶解,乙酸乙酯分别用冷柠檬酸洗三次,冷的碳酸氢钠洗两次,再用冷水洗两次,减压蒸馏,除乙酸乙酯,得微黄色无定型物;叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂脱保护:叔丁氧羰基色氨酸甘氨酸乙脂产物用TFA:苯甲醚=9:1刚好溶解,0℃振荡2-4小时后加入乙醚:石油醚=1:3,得沉淀,离心,再加入由乙醚与石油醚按照1:3比例构成的混合液洗沉淀,得色氨酸甘氨酸乙脂;肽产物分离纯化:柱料采用SephadexG-10,层析柱为16mm×1000mm,洗脱液采用蒸馏水,检测波长为220nm,流速为1.0ml/min,取100gSephadexG-10干柱料,加500ml蒸馏水浸泡过夜,减压除气泡后装柱,洗脱液平衡过夜,待分离液体0.5ml上样层析,收集产品峰,冻干得产物。2.如权利要求1所述的氨基酸神经二肽的合成方法,其特征在于,该氨基酸神经二肽的合成方法采用高效液相法检测肽合成纯度,定量分析肽产物的方法用于合成肽的分析检测,...
【专利技术属性】
技术研发人员:李世军,梁广,李校堃,
申请(专利权)人:温州医科大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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