采用卵磷脂液膜分离法提取肝素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从海参废弃物中提取低分子肝素及从仙人掌中提取的方法，属于肝素提取方法技术领域。本发明专利技术特征在于工艺流程如下：刺参肠＊乳液＊肝素提取液＊肝素粗品＊肝素精品。本发明专利技术１．从刺参废弃物提取制备生物活性保存完备的低分子肝素，国内外首创；２．本项目工艺先进，收得率高；采用离子交换树脂，解决提取液中肝素的收得率；３．采取现代生物技术中的膜分离技术提取制备低分子肝素，效率高，能耗低；４．采用刺参废弃物为主要原料，具有环保意义，研制的低分子肝素成本低廉，市场竞争潜力巨大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取低分子肝素的方法，尤其是从海参废弃物中提取低分子肝素的方法，属于肝素提取方法

技术介绍
由于刺参肝素与网状内皮细胞的特殊亲和性，使肝素-蛋白质复合物难以溶出，加上刺参肠内的溶酶活性强，对肝素破坏严重，因此，利用一般的肝素提取技术只能获得恒量的肝素。目前，国内外制备低分子肝素，大多以商品肝素为原料，采用酸、碱控制解聚法，由成品肝素降解而得到低分子肝素片段，或经分级法，经大孔树脂等交换媒介，得到低分子肝素组分，成本高，产品生物活性低。采用亚硝酸解聚法从LAAH(低抗凝肝素)中制备低分子肝素为收得率低，并且采用的亚硝酸会使肝素的生物活性降低。肝素制备涉及到现代生物专业中的分离、提取等多方面，以及药理、实验等多方面的知识，跨学科且专业性很强，并且需要相当的工作经验。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种采用卵磷脂液膜分离法、以刺参废弃物为原料、收得率大大提高的提取低分子肝素的方法。本专利技术采用液膜分离技术，使肝素在形成水包油的乳液的同时，被表面活性剂从内皮组织中“洗涤”出来，并被很好包封，与酶有效隔离。与此同时，通过表面活性物质使酶形成微团有利于与蛋白质的彻底水解，从而有效的提高收得率，提取过程肝素结构没有破坏，得到的肝素分布系数低，几乎是单质水平的高效、稳定的低分子肝素。本专利技术关键技术分析如下(1)从刺参废弃物中提取低分子肝素的可行性我国传统医学理论认为海参性味甘、咸、温、入心、肺、脾、肾经。现代营养学研究表明海参内含50多种营养成分，是高蛋白、低脂肪、低糖、无胆固醇的营养食品，其矿物质含量也很高。不过，用这些营养成分仍然不足以解释海参的滋补作用，所以现在的研究对海参进行了深入的分析，结果发现海参中存在着很多特殊成分，这些特殊成分成就了海参的滋补作用和药用价值。刺参体壁内有含量很高的胶原蛋白，刺参胶原蛋白可以与传统中药的阿胶、龟板胶、鳖甲胶、鹿角胶在营养成分上相媲美，其功能是补精填髓，生血养血，另外，延缓机体衰老，可使肌肤保持光滑及弹性。刺参皂甙的化学结构类似人参皂甙，其生物医学作用包括抗实验肿瘤细胞、抑制致病菌、抗氧化、调节免疫功能、促进造血、抗疲劳等。海参药效作用，在过去的30年中先后有专家提出以海参治疗肿瘤、再生障碍性贫血和糖尿病，并取得良好的效果，而在辅佐诸如癫疯、胃及十二指肠溃疡、慢性乙肝、慢性肾炎、高血压、肺结核、神经衰弱、静脉血栓、痔疮、脱肛和便秘等常见病治疗时和为一般病后或产后康复过程中所拟订的各种药膳或食疗组方中，海参也得到了广泛的认同和应用。20世纪中后期以来，采用化学和药理学等现代科技手段对海参各类成分进行生物活性测定的结果，海参的药效成分的药效作用，印证了既往三、四百年来中医临床经验所归结的海参保健医疗功能，而且在设置阳性参比物对照下，在整体进行器官、细胞或分子水平上的药效试验中还发现了海参成分的新的活性，从海参本身，各类粗制提取物，组分或单一成分的药理活性十分广泛，几乎涵盖当前对人类健康构成危害的主要病症，诸如肿瘤、心血管疾病、病毒性肝炎、艾滋病、免疫性疾患和老年病等。刺参粘多糖是海参体壁的一类重要成分，现已确定两种海参多糖HG和HF的结构特殊，都为海参所特有，海参多糖以其在组织中的含量之多和多糖的硫酸化程度之大在动物类食品资源中极为罕见。近20年来国内外对海参多糖，特别是HG的药理研究证实它有多种药效对抗多种实验动物肿瘤，对抗MA-73乳腺癌的人工肺转移，提高机体细胞免疫功能，改善和增强因使用抗癌药物引起的动物机体免疫功能低下状况，具有降低血清胆固醇和甘油三酯水平，抗炎作用等多种功效。(2)低分子肝素的提取影响肝素裂解的因素主要有温度、时间、PH值和氧化剂的用量。在固定其它影响因素的条件下，分析了温度和时间对肝素裂解程度的影响。在一定温度下，低分子肝素的分子量随反应时间的延长而降低。在一定时间下，低分子肝素的分子量随温度的升高而降低。因此，控制温度和时间就可得到一定分子量的低分子肝素。(3)液膜分离技术用液膜分离技术从海洋生物组织中分离提取生物活性物质，具有装置简单、操作容易、制造方便等优点，而且分离效率高，能耗低，提取物生物活性保存完备、成本低、效价高、毒副作用小，开辟了传统中药向现代化中药发展的新领域。本专利技术的目的通过以下技术方案实现。本专利技术利用液膜分离技术，从刺参废弃物中提取低分子肝素的方法可分为如下层次结构1、乳化、破乳层运用乳化技术，乳化过程中加入表面活性剂，从刺参废弃物中提炼出肝素提取液；运用液膜分离技术，使肝素在形成水包油的乳液的同时，被表面活性剂从内皮组织中“洗涤”出来，并被很好包封，与酶有效隔离；2、提取层通过表面活性物质使酶形成微团有利于蛋白质的彻底水解，如，分子量为5800的低分子肝素粗品经过精制得到分子量为5300的精品，产品为白色粉末，由粗品到精品的收得率为82.1％，提取过程肝素结构没有破坏，得到的肝素分布系数低，几乎是单质水平的高效、稳定的低分子肝素。本专利技术，其提取工艺流程如下 本专利技术，其原料采用刺参肠；选择的表面活性剂为卵磷脂，或壬基酚磷酸脂。精制工序选择离子交换树脂进行精制。本专利技术采用卵磷脂液膜分离技术，从海参废弃物中提取低分子肝素的关键技术在于1.解决刺参肝素与网状内皮系统和内皮细胞的特殊亲和力，选择高效无毒不影响肝素效价的表面活性剂卵磷脂，或壬基酚磷酸脂，提高肝素-蛋白质复合物的提取；2.解决肝素-蛋白质复合物的分解，选择既能方便消除，又能使酶形成微团，既保护肝素免遭破坏，有利于蛋白质的彻底水解的溶酶及表面活性物质；3.液膜破乳时，根据提取物低分子肝素的分子量，采用对应的微孔滤膜及破乳方法； 4.选择离子交换树脂精制，交换能力强，平衡快，生产周期短，着重解决提取液中肝素的收得率。本专利技术以刺参废弃物为原料提取低分子肝素，为国内外首创，本专利技术的低分子肝素提取的精品收得率为82％以上，比采用亚硝酸解聚法从LAAH(低抗凝肝素)中制备的收得率50％大大提高。四、具体实施方案以下给出本专利技术的具体实施方式，用来对本专利技术作进一步说明。具体实施例方式采用以下卵磷脂液膜分离法提取肝素的方法，但本专利技术并不限于以下所述实施例。，其提取工艺流程如下 原料采用刺参肠，表面活性剂为旦黄卵磷脂或壬基酚磷酸脂，精制工序选择离子交换树脂进行精制。国外低分子肝素产品多以商品肝素为原料制得，本专利技术产品以刺参肠粘膜为原料制得了分子量为5000-5600d的低分子肝素，其中5300d的LMWH具有强FXa作用和较弱的抗FII作用，经t检验，低分子肝素的OT值比LAAH、肝素、生理盐水均有明显的延长，说明其对血栓形成的抑制作用明显大于LAAH和肝素。与肝素相比，该低分子肝素的抗FXa/FIIa值大，皮下注射生物利用度高，在体内消除慢，半衰期长，口服易吸收，对血小板和脂解方面的副作用小，出血倾向也小，使用安全方便，因而临床应用潜力大。抗FXa活性是低分子肝素抗血栓潜力的一个重要的先决条件。一般以抗FXa活性与抗凝活性(APTT或抗凝效价)的比值表示低分子肝素的抗血栓潜力，其值越大，抗血栓作用越强，出血倾向越小。肝素的抗FXa/APTT值约为1，而低分子肝素一般为1.5-4，其国际标准品为2.51，本专利技术制备的5300d的低分子肝素的抗FXa/A本文档来自技高网...

【技术保护点】
采用卵磷脂液膜分离法提取肝素的方法，其特征在于其提取工艺流程如下：刺参肠＊乳液＊肝素提取液＊肝素粗品＊肝素精品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张荣显，孙红，刘树成，
申请(专利权)人：孙红，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]