本发明专利技术公开了一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液及其制备方法，是由保藏编号为CGMCC NO.8436的黑根霉和保藏编号为CGMCC NO.1443的拟康氏木霉经混合发酵制备而成。本发明专利技术混合发酵液可以明显提高番茄对灰霉病的诱抗作用，混合发酵液中所使用的黑根霉和拟康氏木霉均来源于自然环境，能有效诱导番茄对灰霉病菌的系统抗性，其使用方法简便，对环境无污染，对人畜无毒；发酵液生产方法简便、周期短，所用原料廉价，易于大规模批量生产，生产成本低。
Mixed fermentation liquid capable of inducing tomato gray mold and preparation method thereof
The invention discloses a method for inducing resistance of Botrytis cinerea mixed fermentation liquid and a preparation method thereof, by the preservation number of Rhizopus stolonifer and the preservation number is CGMCC NO.8436 CGMCC NO.1443 trichidermapseudokoningii prepared by mixing fermentation. The mixed fermentation liquid can significantly improve the effect of induced resistance of tomato to Botrytis cinerea, using mixed fermentation broth of Rhizopus and t.pseudokoningii are derived from the natural environment, the system can effectively induce the tomato resistance to Botrytis cinerea, the method is easy to use, no pollution to the environment, non-toxic to humans and animals production method; fermentation liquid is simple, short cycle, the low price of raw materials, easy mass production, low production cost.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及番茄灰霉病的生物防治
，特别是涉及一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液及其制备方法。
技术介绍
植物诱导抗病性也称系统获得抗性(SAR)，是指植物的某些部位在受到低毒或弱毒的病原菌或病原菌代谢物处理后，可诱导植物体产生一些保护物质，从而使植物由原来的易感状态转变为局部或整体对抗某种或某类病原物侵染的现象。由诱抗剂引发的SAR有以下四大特点和优点：一是系统性，即这种反应可以从诱导部位传遍全株，既可在诱导部位发生，也可以被传导到植物未经处理的其他组织或器官起作用，还可通过嫁接传递；二是持久性，SAR一经诱导，一般能持续几周至几个月，甚至在植物整个生长期起作用，持效期长；三是广谱性，SAR虽然是被特定诱抗剂诱导的，但作用却是广谱的，对真菌、细菌和病毒等多种病原物都起作用，这是因为诱导引起了SAR基因的启动和表达，导致一系列生理、生化和细胞学上的变化，进而抑制了病害的发生和扩展；四是安全性，即对人畜无毒、对环境安全，因为诱抗剂的作用机制是诱导植物内在抗病潜力，对病原物没有选择压力，不易产生抗药性，所以对环境也不产生副作用，这是许多化学杀菌剂所没有的优点，符合绿色、生态农业的发展趋势。番茄主要在设施内种植，设施的特殊环境条件使番茄灰霉病的发生越来越严重，每年有30％左右面积的番茄死苗和烂果，尤其早期第1-2穗果受害最严重，流行年份的发病率更高达50％以上，甚至绝产。同时由于生产上仍缺少抗病品种，且灰霉病菌已对多种化学杀菌剂产生了抗药性，防治效果大大降低，并且施药主要以果实为靶标，造成果实的农药残留超标，严重制约了番茄的安全生产。菜农在生产中主要利用化学农药来防治该病，能挽回总产量的15-30％，但农产品污染事件接连不断的发生，食品安全问题已成为民生的热点话题。目前市场也有防治番茄灰霉病的生物农药销售和使用，但现有的生物农药主要是在番茄灰霉病发生后使用，并且生物农药见效较慢，对使用环境的温度、光照等条件较为苛刻，另外对番茄产量也有一定影响。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液及其制备方法。该混合发酵液以黑根霉和拟康氏木霉的次生代谢物作为有效成分，可提早、并有效的提高番茄对灰霉病的抗性，大幅降低番茄灰霉病的发生；而且该混合发酵液的使用环境更为宽松，对人畜安全无害，环境兼容性好。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液，所述混合发酵液是由黑根霉和拟康氏木霉经混合发酵制备而成。本专利技术所选用的黑根霉为保藏编号为CGMCCNO.8436的黑根霉(Rhizopusnigricans)RN-9；该菌株已经记载在专利“一种具有抗癌活性的黑根霉多糖及其应用”(CN104017736A)中。本专利技术所选用的拟康氏木霉为保藏编号为CGMCCNO.1443的拟康氏木霉(Trichodermapseudokiningii)TRIPI；该菌株已经记载在专利“一种复合生物土壤改良剂及其应用”(CN102391876A)中。本专利技术的第二方面，提供上述诱抗番茄灰霉病的混合发酵液的制备方法，步骤如下：(1)将黑根霉和拟康氏木霉进行活化处理；(2)将活化后的黑根霉和拟康氏木霉接种于发酵培养基中，在22-30℃、100-130r/min的条件下培养5-7天，过滤，滤液浓缩，即得诱抗番茄灰霉病的混合发酵液。步骤(1)中，所述活化处理的方法为：将黑根霉和拟康氏木霉接种在PDA平板培养基上，24℃恒温培养48h。步骤(2)中，活化后的拟康氏木霉和黑根霉接种量的比为(3-5)：1。步骤(2)中，所述发酵培养基为PDB培养基。所述PDB培养基的组成为：马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000ml；其制备方法如下：将马铃薯切成0.5cm左右厚的小块，放入水中，煮沸20min后，4层纱布过滤，取滤液(加水定容至1000ml)，煮沸后加入葡萄糖，完全溶解后，分装于500ml的三角瓶中，装量为200ml，126℃、0.15MPa条件下高压蒸汽灭菌30min，备用。步骤(2)中，在35-45℃下浓缩滤液5-10倍。(即浓缩后滤液的质量为浓缩前滤液质量的1/5-1/10)。步骤(2)中，制备的诱抗番茄灰霉病的混合发酵液中，孢子数不少于108个/ml。本专利技术的第三方面，提供上述混合发酵液在制备诱抗番茄灰霉病的生防制剂中的应用。本专利技术的第四方面，提供一种诱抗番茄灰霉病的生防制剂，由上述的混合发酵液和常规的助剂制备而成；其活性成分为上述的混合发酵液。所述生防制剂的剂型为粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、水分散颗粒剂和悬浮剂等。本专利技术还提供上述混合发酵液或生防制剂诱抗番茄灰霉病的应用方法，步骤为：将上述的混合发酵液或生防制剂加水稀释，在番茄初花后7-10天内叶面喷施，之后每隔10-15天可喷施一次。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术以保藏编号为CGMCCNO.8436的黑根霉和保藏编号为CGMCCNO.1443的拟康氏木霉作为诱抗菌株，其混合发酵液可以明显提高番茄对灰霉病的诱抗作用。其中，保藏编号为CGMCCNO.8436的黑根霉，前期主要是关于该菌株能够产抑制胃癌BGC-823细胞生长活性的黑根霉菌丝多糖的研究；保藏编号为CGMCCNO.1443的拟康氏木霉，前期主要是关于该菌株在防治黄瓜黄萎病和棉花枯萎病中的应用研究。本专利技术意外的发现，以保藏编号为CGMCCNO.8436的黑根霉和保藏编号为CGMCCNO.1443的拟康氏木霉作为中心组分，经发酵后得到的混合发酵液能明显提高番茄对灰霉病的诱抗作用，番茄灰霉病的诱抗效果可达87.9％。(2)本专利技术的混合发酵液是由黑根霉和拟康氏木霉经混合发酵而成，涉及上述两株诱抗菌株的初级代谢和次级代谢，化学成分复杂；而且，通过混合发酵的过程，增加了上述两菌株的协同作用方式和化学成分的渗透性，提高了作用效率。(3)本专利技术所使用的黑根霉和拟康氏木霉均来源于自然环境，能有效诱导番茄对灰霉病菌的系统抗性，其使用方法简便，对环境无污染，对人畜无毒；发酵液生产方法简便、周期短，所用原料廉价，易于大规模批量生产，生产成本低。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，现有技术中防治番茄灰霉病的生物农药主要是在番茄灰霉病发生后使用，生物农药的见效较慢，对使用环境的温度、光照等条件较为苛刻。基于此，本专利技术提供了一种新型的诱抗番茄灰霉病的混合发酵液。在本申请的一种实施方式中，提供了该诱抗番茄灰霉病的混合发酵液的制备方法，步骤如下：(1)将保藏编号为CGMCCNO.8436的黑根霉和保藏编号为CGMCCNO.1443的拟康氏木霉进行活化处理；活化处理的方法为：将黑根霉和拟康氏木霉接种在PDA平板培养基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液，其特征在于，所述混合发酵液是由黑根霉和拟康氏木霉经混合发酵制备而成。
【技术特征摘要】
1.一种诱抗番茄灰霉病的混合发酵液，其特征在于，所述混合发酵液是由黑根霉和拟康氏木霉经混合发酵制备而成。2.根据权利要求1所述的混合发酵液，其特征在于，所述黑根霉的保藏编号为CGMCCNO.8436；所述拟康氏木霉的保藏编号为CGMCCNO.1443。3.权利要求1或权利要求2所述的混合发酵液的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)将黑根霉和拟康氏木霉进行活化处理；(2)将活化后的黑根霉和拟康氏木霉接种于发酵培养基中，在22-30℃、100-130r/min的条件下培养5-7天，过滤，滤液浓缩，即得诱抗番茄灰霉病的混合发酵液。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述活化处理的方法为：将黑根霉和拟康氏木霉接种在PDA平板培养基上，24℃恒温培养48h。5.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：国淑梅，牛贞福，高瑞杰，于安军，张鹤，
申请(专利权)人：山东农业工程学院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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