一种同时处理多种生物组织的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时处理多种生物组织的方法，包括步骤：预处理、脱脂、脱细胞、交联、灭菌。本发明专利技术所提出的同时处理多种生物组织的方法，可同时处理多种生物组织，批处理生物组织量大，处理程度均一，工艺简单，易于产业化，实现高效生产。本发明专利技术所提出的同时处理多种生物组织的方法，完全避免使用强酸、强碱和蛋白酶，可保留多种生物组织细胞外基质的天然三维胶原支架纤维结构，去除组织中引起免疫原性的细胞成分。采用本方法制备的生物组织，具有良好的生物相容性及机械性能，且相比天然生物组织，具有较高抗降解能力，可用于各类软组织损伤修复。

A method of treating multiple biological tissues simultaneously

The invention discloses a method for simultaneously processing a plurality of biological tissues, comprising the steps of pretreatment, degreasing, acellular, cross-linking and sterilization. At the same time, a variety of biological tissue processing method provided by the invention can also handle a variety of biological tissues, batch biological tissue volume, degree of uniform, simple process, easy industrialization, efficient production. At the same time, a variety of biological tissue processing method provided by the invention, completely avoid the use of strong acid, strong alkali and protease, can retain the natural three-dimensional collagen scaffold fiber structure of a variety of biological tissue extracellular matrix, cell components caused by the immunogenicity of tissue removal. The biological tissue prepared by this method has good biocompatibility and mechanical properties. Compared with natural biological tissue, the biological tissue prepared by the method has high degradation resistance and can be used for repairing various kinds of soft tissue injuries.

【技术实现步骤摘要】
一种同时处理多种生物组织的方法
本专利技术涉及组织工程学医用生物材料
，具体地涉及一种同时处理多种生物组织的方法。
技术介绍
随着社会老龄化现象越来越严重，癌症发生率也随之增加。各类实体瘤切除后，常常造成肿瘤组织周围软组织的缺损或薄弱，如乳腺癌切除后，造成胸壁软组织薄弱，再行乳房重建术时，常易引发假体移位、突出等并发症。针对上述问题，采用同种异体脱细胞真皮基质及异种脱细胞基质进行肿瘤切除后软组织修复效果较佳，国内外临床应用已有二十余年历史。该类脱细胞基质产品也可用于其他原因造成的各类软组织薄弱处的增强或修复，如各类疝修复、肌腱加强、肩袖修复、肠胃吻合口加固等等。目前有较多制备脱细胞基质的专利技术报道，但由于方法均采用强酸、强碱、蛋白酶或表面活性剂等对组织破坏较大的试剂，无法同批次相同工艺参数同时处理多种不同组织结构、不同厚度、不同成分及来源的生物组织，否则各种生物组织无法同时实现较好的脱细胞效果或较好的降解性能。例如较厚、组织结构较致密的猪真皮与较薄、组织结构较松散的猪小肠粘膜下层进行同时处理，往往能够实现前者完全去除细胞并保证组织不受破坏、降解性能较好的工艺参数用于后者时，后者亦能完全去除细胞，但组织破坏则较大，降解性能无法保证；而能够实现后者完全去除细胞并保证组织不受破坏、降解性能较好的工艺参数用于前者时，前者无法实现细胞完全去除，不能满足产品安全性相关要求。除此之外，目前的专利技术报道也有下述缺陷：(1)采用酶及TritonX-100作为脱细胞试剂，试剂残留较难清洗，对胶原纤维破坏较大；(2)采用苯扎溴铵溶液消毒，NaCl或EDTA高渗溶液及去垢剂Tween、SDS或Triton脱细胞，最后采用磷酸盐缓冲液洗涤后环氧乙烷灭菌，该方法采用的消毒液毒性较大，采用的脱细胞试剂较难清洗，对胶原纤维破坏亦较大；(3)采用工艺中也使用到过氧乙酸强酸、去垢剂、胰酶等对材料破坏较大的试剂，材料完整性被破坏。(4)采用工艺中使用毒性较大的化学交联剂，如戊二醛、环氧化物等，交联剂残留易降低材料生物相容性，部分交联剂处理的材料长期植入体内易引发钙化。(5)单批次仅能处理单种生物组织，效率较低，产业化设备利用率低。为了解决上述问题，本专利技术亟需开发一种同时处理多种生物组织的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种同时处理多种生物组织的方法。本专利技术的第一方面，提供一种同时处理多种生物组织的方法，包括以下步骤：(a)预处理：将生物组织清洗后剥离无用组织，并进行消毒，获得预处理的目标组织；(b)脱脂：采用脱氧胆酸钠或异丙醇浸泡所述预处理的目标组织，获得脱脂的目标组织；(c)脱细胞：通过高压物理方法处理脱脂的目标组织以破碎细胞，再通过DNA酶浸泡及α-Gal酶溶液浸泡去除所有细胞碎片及抗原得到脱细胞的目标组织；(d)交联：采用物理交联方法或化学交联方法对所述脱细胞的目标组织进行交联。(e)灭菌：采用辐照或环氧乙烷对经步骤(d)交联的目标组织进行灭菌。在另一优选例中，所述生物组织指动物源或同种异体组织，包括猪小肠、猪皮、牛皮、牛心包、猪心包、同种异体皮、牛心脏瓣膜、猪心脏瓣膜等任意两种或两种以上生物组织。在另一优选例中，所述无用组织为脂肪。在另一优选例中，步骤a)中，所述清洗为采用纯化水进行清洗。在另一优选例中，步骤a)中，所述消毒为用75％乙醇或2％过氧化氢室温下消毒0.5-2h。在另一优选例中，步骤b)中，所述浸泡为将所述预处理的目标组织置于1-3％脱氧胆酸钠或异丙醇中室温下浸泡12-48h。在另一优选例中，步骤b)中，浸泡后再用纯化水冲洗3-8次，去除脱氧胆酸钠或异丙醇。在另一优选例中，所述高压物理方法是指将所述脱脂的目标组织置于超高压设备中，在1-10MPa、4-40℃条件下处理1-60min。在另一优选例中，所述DNA酶浸泡为室温下采用1-50U/mL的DNA酶溶液振荡浸泡4-24h。在另一优选例中，所述α-Gal酶溶液浸泡为室温下采用1-50U/L的α-Gal酶溶液振荡浸泡4-24h。在另一优选例中，所述振荡浸泡的振荡频率为80-150rpm。在另一优选例中，所述振荡浸泡后用纯化水清洗5-10次。在另一优选例中，所述物理交联方法是指将所述脱细胞的目标组织进行冷冻干燥，使其含水率低于10％，再置于真空干燥箱中，在80-130℃条件下，真空热处理24-120h，然后包装送灭菌。在另一优选例中，所述化学交联方法为将所述脱细胞的目标组织浸泡于0.01-0.5mol/L的EDC溶液中，在室温下交联12-48h，再用纯化水清洗3-8次，最后包装送灭菌。在另一优选例中，所述辐照采用的辐照源为伽马射线或电子束，灭菌剂量为15-30kGy。在另一优选例中，采用环氧乙烷灭菌的参数为35-55℃下，灭菌4-20h，环氧乙烷浓度500-900mg/L。本专利技术所提出的同时处理多种生物组织的方法，可同时处理多种生物组织，批处理生物组织量大，处理程度均一，工艺简单，易于产业化，实现高效生产。本专利技术所提出的同时处理多种生物组织的方法，完全避免使用强酸、强碱和蛋白酶，可保留多种生物组织细胞外基质的天然三维胶原支架纤维结构，去除组织中引起免疫原性的细胞成分。采用本方法制备的生物组织，具有良好的生物相容性及机械性能，且相比天然生物组织，具有较高抗降解能力，可用于各类软组织损伤修复。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1为同批次处理的多种生物组织的HE染色图片，其中A为脱细胞猪真皮基质，B为脱细胞猪小肠粘膜下层基质，C为脱细胞牛心包膜。图2为同批次处理的脱细胞猪真皮基质，脱细胞猪小肠粘膜下层基质及脱细胞牛心包膜在热处理前后的降解性能对比图片。图3为同批次处理的脱细胞猪真皮基质、脱细胞牛心包膜、脱细胞猪小肠粘膜下层基质与同类产品降解性能对比图片。图4为同批次处理的脱细胞猪心包，脱细胞牛真皮基质、脱细胞猪心脏瓣膜的细胞毒性检测结果图片。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次开发了一种同时处理多种生物组织的方法。所述方法包括步骤：预处理、脱脂、物理方法脱细胞、交联、辐照灭菌。本专利技术所提出的同时处理多种生物组织的方法，可同时处理多种生物组织，批处理生物组织量大，工艺处理程度均一，工艺简单，易于产业化，实现高效生产，避免产业化设备投料少、相对能耗大的问题。处理方法本专利技术的同时处理多种生物组织的方法，包括步骤：预处理、脱脂、物理方法脱细胞、交联、灭菌。步骤一、预处理将各类生物组织采用纯化水清洗，剥离无用组织如脂肪，并用75％乙醇或2％过氧化氢室温下消毒0.5-2h。各类生物组织指动物源或同种异体组织，包括猪小肠、猪皮、牛皮、牛心包、猪心包、同种异体皮、牛心脏瓣膜、猪心脏瓣膜等任意两种或两种以上生物组织。本步骤通过清洗，物理剥离无用组织，并进行消毒，获得预处理目标组织以便后续处理。步骤二、脱脂将完成步骤一预处理的各类组织置于1-3％脱氧胆酸钠或异丙醇中室温下浸泡12-48h，浸泡后再用纯化水冲洗3-8次，去除脱氧胆酸钠或异丙醇。本步骤通过脱氧胆酸钠或异丙醇浸泡，获得脱脂的目标组织。由于本步骤去脂工艺对材料结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时处理生物组织的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)预处理：将生物组织清洗后剥离无用组织，并进行消毒，获得预处理的目标组织；(b)脱脂：采用脱氧胆酸钠或异丙醇浸泡所述预处理的目标组织，获得脱脂的目标组织；(c)脱细胞：通过高压物理方法处理脱脂的目标组织以破碎细胞，再通过DNA酶浸泡及α‑Gal酶溶液浸泡去除所有细胞碎片及抗原得到脱细胞的目标组织；(d)交联：采用物理交联方法或化学交联方法对所述脱细胞的目标组织进行交联。(e)灭菌：采用辐照或环氧乙烷对经步骤(d)交联的目标组织进行灭菌。

【技术特征摘要】
1.一种同时处理生物组织的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)预处理：将生物组织清洗后剥离无用组织，并进行消毒，获得预处理的目标组织；(b)脱脂：采用脱氧胆酸钠或异丙醇浸泡所述预处理的目标组织，获得脱脂的目标组织；(c)脱细胞：通过高压物理方法处理脱脂的目标组织以破碎细胞，再通过DNA酶浸泡及α-Gal酶溶液浸泡去除所有细胞碎片及抗原得到脱细胞的目标组织；(d)交联：采用物理交联方法或化学交联方法对所述脱细胞的目标组织进行交联。(e)灭菌：采用辐照或环氧乙烷对经步骤(d)交联的目标组织进行灭菌。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物组织指动物源或同种异体组织，包括猪小肠、猪皮、牛皮、牛心包、猪心包、同种异体皮、牛心脏瓣膜、猪心脏瓣膜等任意两种或两种以上生物组织。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述消毒为用75％乙醇或2％过氧化氢室温下消毒0.5-2h。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中，所述浸泡为将所述预处理的目标组织置于1-3％脱氧胆酸钠或异丙醇中室温下浸泡12-48h。5.如权利要求1所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘博文，周宁辉，俞鸿飞，朱鑫建，王志东，
申请(专利权)人：苏州恒瑞迪生医疗科技有限公司，上海宏创医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32