兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒。为解决现有技术中存在的特异性差和灵敏度低的技术问题，提供一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。本发明专利技术的试剂盒采用的糖基化修饰鼠抗IgG4单克隆抗体操作简便，能够批量处理抗体，利于产业化；解决了无商业化HBR可用的问题，使得试剂在测定HAMA和RF干扰样本时，相对西门子试剂假阳性率大幅度降低；解决了切除FC段消除RF方法带来的灵敏度不足，本发明专利技术的线性范围可达到0.040‑4.000g/L。

IgG4 kit for detection of immunoglobulin G4 subtype with specificity and sensitivity

The invention belongs to the technical field of biological detection, in particular to an immunoglobulin G4 subtype IgG4 detection kit which takes into account specificity and sensitivity. In order to solve the specific problems existing in the prior art of the difference and the low sensitivity of technical problems, provide a kind of immunoglobulin G4 subtype IgG4 kit both specificity and sensitivity, including the first reagent, the first reagent is labeled with the glycosylation of mouse anti G4 monoclonal antibody latex microspheres solution Human Immunoglobulin. Glycosylation in the kit of the invention adopts the anti IgG4 monoclonal antibody has the advantages of simple operation, can batch processing for antibody industrialization; to solve the problem of no HBR is available commercially, the reagents in the determination of HAMA and RF interference samples, the relative rate of false positive SIEMENS reagent significantly reduced; to solve the sensitivity to bring resection FC RF method to eliminate the deficiencies, the linear range of the invention can reach 0.040 4.000g/L.

【技术实现步骤摘要】
兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型(IgG4)检测试剂盒。
技术介绍
正常人的IgG包括四个亚型，其IgG1占60～70％，IgG2占15～20％，IgG3占5～10％，IgG4占1～7％。IgG4相关性疾病是一种与IgG4淋巴细胞密切相关的慢性、系统性疾病，该类疾病以血清IgG4水平升高以及IgG4阳性细胞浸润多种器官和组织为特征，常见受累器官包括泪腺、胰腺和腹膜后间隙等，累及的器官或组织由于慢性炎症及纤维化进程可导致弥漫性肿大。该类疾病对皮质激素治疗反应良好。IgG4为人体内含量最低的免疫球蛋白G亚型，所以检测试剂需要灵敏度较高，并且，检测试剂需要避免与其他种类的免疫球蛋白以及IgG1-3交叉反应，需要非常高的特异性。最理想的选择是特异性识别IgG4的单克隆抗体。目前仅有西门子的IgG4检测试剂被CFDA(国家食品药品监督管理局)批准广泛被使用，其采用的是高灵敏度的胶乳免疫比浊法。本领域的免疫试剂开发人员熟知，免疫检测试剂的特异性不仅与抗体特异性相关，更需要屏蔽人体免疫系统对检测试剂所用抗体的干扰(各种人抗动物抗体，统称异嗜性抗体HeterophileAntibody)以及类风湿因子(RF)的干扰。其中20-40％的人群对HAMA(人抗鼠抗体)存在不同程度的干扰，在不发达地区，由于鼠源接触率更高，此比例更高。含有HAMA的人进行检测时，如果检测试剂盒没有抗干扰能力通常会出现假阳性结果，最经典的案例就是上世纪美国HCG早孕试纸假阳性事件。采用鼠源单克隆抗体开发免疫检测试剂时无法回避因HAMA带来的特异性问题。商业化高特异性识别的IgG4的鼠单克隆抗体已经出现多年，消除HAMA以及RF的试剂HBR(HeterophileAntibodyBlockingReagent)也已经在各种使用鼠单克隆抗体的检测试剂盒中被广泛使用，如菲鹏生物的Hire-E-010，迈迪安公司的TRUBlocker，SCantibody公司的HBR系列……。但是，鼠抗人IgG4抗体，其类免疫反应原理似于RF和HAMA，是识别免疫球蛋白本身的抗体，会被上述商业化HBR当做是识别免疫球蛋白的干扰物，并且可能上述HBR试剂中本身含有免疫球蛋白4的亚类；造成HBR与IgG4的鼠单克隆抗体之间交叉反应，使得IgG4检测试剂盒无法使用商业化的HBR屏蔽HAMA以及RF干扰。因此，为了消除RF的干扰，切除抗体FC段的方法在欧洲各诊断试剂公司被广泛采用，但是会损失一定的抗体亲和力，导致检测试剂灵敏度下降，使得必须提高样本量才能满足相应灵敏度不变，导致线性范围下降。在检测西门子IgG4试剂时也发现，HAMA干扰存在一定问题，出现不少假阳性样本。且其试剂灵敏度较低，不能实现较宽线性范围的检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决以上现有技术中存在的技术问题，提供一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型(IgG4)检测试剂盒，该试剂盒有效消除了HAMA和RF干扰，具体地，通过糖基化修饰鼠抗人IgG4单克隆抗体能够有效减弱其被RF和HAMA识别的亲和力，使用糖基化修饰后的鼠单克隆抗体开发免疫球蛋白G4试剂盒能达到减弱HAMA和RF干扰，提高试剂特异性的优点，解决了切除FC段消除RF方法带来的灵敏度不足的技术问题。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。进一步的改进是，所述的兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，还包括第二试剂，所述第二试剂为磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种或几种。进一步的改进是，所述第一试剂是通过化学偶联法将糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体标记在胶乳微球上的。进一步的改进是，所述第一试剂的糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体通过如下步骤制成：将糖化修饰液与IgG4单克隆抗体搅拌混匀即得，所述糖化修饰液的溶剂为纯化水，所述糖化修饰液的溶质由具有如下浓度的组分组成：NaCl：7～11g/L，葡萄糖：50g/L～70g/L，蔗糖：30～50g/L，防腐剂：0.9～1.2g/L。进一步的改进是，所述糖化修饰液与IgG4单克隆抗体搅拌时的温度为25℃～30℃。进一步的改进是，所述IgG4单克隆抗体为商业化单克隆抗体。进一步的改进是，使用时，用所述糖化修饰液将所述商业化单克隆抗体稀释至浓度为0.15～0.40mg/mL。进一步的改进是，所述防腐剂为叠氮钠。本专利技术相对于现有技术的有益效果是：(1)本专利技术的试剂盒采用糖基化修饰鼠抗IgG4单克隆抗体操作简便，能够批量处理抗体，利于产业化；(2)解决了无商业化HBR可用的问题，使得试剂在测定HAMA和RF干扰样本时，相对西门子试剂假阳性率大幅度降低；(3)解决了切除FC段消除RF方法带来的灵敏度不足，使试剂盒线性范围超过西门子0.04-2.000g/L线性范围；本专利技术的线性范围可达到0.040-4.000g/L。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的技术方案进行详细的说明，应当说明的是，以下仅是本专利技术的优选实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些应当都属于本专利技术的保护范围。Good’s缓冲液指两性离子缓冲液。本专利技术中的(g/L)指的是每升溶液中所含有的溶质的质量，如糖化修饰液中NaCl为9g/L，即指每升溶液中含有NaCl的重量为9克。NaCl为抗体稀释液以及各种蛋白保存液中常用离子，可用其他离子(如氯化钾，硫酸镁等)替代，通常NaCl用量为生理盐水浓度9g/L，其用量与本专利技术的起关键作用的鼠单克隆抗体糖化修饰无关，对本专利技术实施效果影响甚微。防腐剂叠氮钠(NaN3)通常用量为1g/L，仅起防腐效果，对专利技术实施效果影响甚微。一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。进一步的改进是，所述的兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，还包括第二试剂，所述第二试剂为磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种或几种。进一步的改进是，所述第一试剂是通过化学偶联法将糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体标记在胶乳微球上的。进一步的改进是，所述第一试剂的糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体通过如下步骤制成：将糖化修饰液与IgG4单克隆抗体搅拌混匀即得，所述糖化修饰液的溶剂为纯化水，所述糖化修饰液的溶质由具有如下浓度的组分组成：NaCl：7～11g/L，葡萄糖：50g/L～70g/L，蔗糖：30～50g/L，防腐剂：0.9～1.2g/L。进一步的改进是，所述糖化修饰液与IgG4单克隆抗体搅拌时的温度为25℃～30℃。进一步的改进是，所述IgG4单克隆抗体为商业化单克隆抗体。进一步的改进是，使用时，用所述糖化修饰液将所述商业化单克隆抗体稀释至浓度为0.15～0.40mg/mL。进一步的改进是，所述防腐剂为叠氮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，其特征在于，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。

【技术特征摘要】
1.一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，其特征在于，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。2.根据权利要求1所述的兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，其特征在于，还包括第二试剂，所述第二试剂为磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种或几种。3.根据权利要求1或2所述的兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂是通过化学偶联法将糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体标记在胶乳微球上的。4.根据权利要求1或2所述的兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体通过如下步骤制成：将糖化修饰液与IgG4单克隆抗体搅拌混匀即得，所述糖化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王钊，王金凤，蒋欣，
申请(专利权)人：柏荣诊断产品上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31