一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒制造技术

本发明专利技术具体公开了一种大豆药用提取物大豆异黄酮的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接。本发明专利技术中的试剂盒检测时间快、方便、稳定、且准确，适合范围广。本发明专利技术的检测方法，不需要对样品进行复杂的预处理，操作步骤简短，不需要使用大型昂贵仪器，不受实验仪器条件限制，有利于检测的现场进行，有利于实验设置落后的基层单位开展实验。

Rapid detection kit of colloidal gold a medicinal extract of Daidzein in Soybean

The invention discloses a colloidal gold soybean medicinal extract of soybean isoflavone rapid detection kit, including a box seat, a box cover and a strip, the box cover is provided with a sample adding hole and the observation hole, the box seat is fixed on the test strip, the box cover and the box seat is clamped, the test paper includes sample paper, glass fiber paper, nitrocellulose membrane and absorbent paper, the samples of paper, glass fiber paper, nitrocellulose membrane and absorbent paper arranged from left to right, in sequence. The reagent box of the invention has the advantages of fast detection time, convenience, stability, accuracy and suitability for a wide range. The detecting method of the invention, without complex sample pretreatment steps, short, does not require the use of large expensive instruments is not limited by the experimental conditions of the instrument, to detect the scene, which is beneficial to the grassroots units to carry out the experiment set backward.

【技术实现步骤摘要】
一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒
本专利技术属于药物检测
，具体地，涉及一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒。
技术介绍
大豆是一种重要的油料作物，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物大豆营养全面，含量丰富，其中蛋白质的含量比猪肉高2倍，是鸡蛋含量的2.5倍。蛋白质的含量不仅高，而且质量好。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质，还可以提炼大豆异黄酮。黄豆苷元又名大豆苷元，是大豆异黄酮的一种，由豆科作物中提取得到，黄豆苷元可用于高血压、症状性高血压、冠心病、脑血栓、心肌梗死、心律失常、妇女更年期综合征等的治疗。黄豆苷元分子式为C15H10O4，分子量：254.24。目前，检测黄豆苷元的方法有高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)和毛细管电泳法(HPCE)等仪器方法，但这些方法存在操作繁琐，检测前需要对样品进行复杂的预处理；耗时长；需要使用大型昂贵的仪器，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测。因此急需开发一种灵敏度高，检测速度快，特异性强的检测方法。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的不足，本专利技术提供了一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒，以解决上述技术问题。本专利技术通过以下技术方案实现：一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。优选地，所述维素膜上还包被有第二种动物蛋白的IgG，其可以与邻苯二甲酸检测用金标抗体结合反应并显色。优选地，所述检测大豆提取物的包被抗原为其半抗原制备而成。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术中的试剂盒检测时间快、方便、稳定、且准确，适合范围广。2、本专利技术的检测方法，不需要对样品进行复杂的预处理，操作步骤简短，不需要使用大型昂贵仪器，不受实验仪器条件限制，有利于检测的现场进行，有利于实验设置落后的基层单位开展实验。4、本专利技术的试剂盒的检测结果与精确度较高的HPLC法检测结果非常接近，试剂盒的检测结果与真实结果准确度控制在95％左右，5次的平行检测结果平均偏差控制在12％以内，说明本专利技术的试剂盒检测结果准确度较高，基本可以符合现场大量样品筛选的胶体金试剂盒。附图说明图1是本专利技术的胶体金快速检测试剂盒盒盖结构示意图。图2本专利技术的胶体金快速检测试剂盒盒座结构示意图。图3是本专利技术的试纸条结构示意图。其中：加样孔1-1，观察窗1-2，品纸3-1，盒座2，样品纸2-1，玻璃纤维纸2-2，硝酸纤维素膜2-3，吸水纸2-4，璃纤维纸3-2，硝酸纤维素膜3-3，检测线3-31，质控线3-32吸水纸3-4。具体实施方式结合以下实施例对本专利技术作进一步描述。一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。优选地，述硝酸纤维素膜上还包被有第二种动物蛋白的IgG，其可以与邻苯二甲酸检测用金标抗体结合反应并显色。所述包被抗原为黄豆苷元完全抗原。优选地，所述检测大豆提取物的包被抗原为其半抗原制备而成。黄豆苷元属于小分子物质，其本身没有可供偶联的活性官能团(如氨基、羧基等)，因此无法与载体蛋白发生偶联反应产生特异性抗体的抗原，无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，因此需要对黄豆苷元分子进行修饰衍生化，接上活性官能团使其能与载体蛋白偶联则有可能形成抗原，这种经过人工修饰后的抗原称为人工抗原，而该衍生化产物则称为半抗原。以下将详细介绍黄豆苷元完全抗原的制备方法，制备过程包括以下步骤：(1)黄豆苷元半抗原；(2)用黄豆苷元半抗原制备黄豆苷元完全抗原。优选地，上述步骤(1)黄豆苷元半抗原的制备方法包括以下步骤：S1.将黄豆苷元溶于丙酮中，依次加入氢氧化钾溶液、碘化钾和溴乙酸乙酯，室温下搅拌反应；S2.向步骤S1的反应液中加入盐酸溶液进行中和，再加入蒸馏水，然后萃取后合并有机层，干燥过滤，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到粗品酯；S3.所得粗品酯用丙酮复溶，以氯仿和甲醇作展开剂，室温下进行薄层层析，得到目标产物酯；S4.将目标产物酯溶于甲醇中，加入氢氧化钾溶液进行反应；再用盐酸溶液中和，再加入蒸馏水，然后萃取后合并有机层，干燥过滤，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到目标产物。该黄豆苷元半抗原的制备方法步骤简单，合成的半抗原可以用于制备黄豆苷元完全抗原，为黄豆苷抗体的制备提供新的途径，制备的抗体安全有效，抗体的纯度也较高。满足了国内对该研究的需要，具有广阔的实际应用前景。优选地，上述步骤(2)黄豆苷元完全抗原的制备方法包括以下步骤：S1.将黄豆苷元半抗原、EDC和NHS溶于200μL的DMF中，室温搅拌反应过夜，即得活化好的黄豆苷元衍生物；S2.将载体蛋白溶于0.7％的氯化钠溶液中，再边搅拌边逐滴加入上述活化好的黄豆苷元衍生物，室温下反应1～5h，反应结束后，用0.7％的氯化钠溶液透析，即得到黄豆苷元完全抗原，分装后冷冻保存于-20℃。其中，优选地，步骤S1中的黄豆苷元半抗原、EDC和NHS的质量比为1：0.6～1.2：0.4～1。优选地，步骤S1中的黄豆苷元半抗原：DMF＝7mg/mL。优选地，步骤S2中的载体物质：氯化钠溶液＝11～20mg，1.8～2.5mL。优选地，步骤S2所述载体物质为蛋白质、蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽、多糖，如血清白蛋白、球蛋白、脂蛋白、多聚氨基酸或葡聚糖；或者所述载体物质为具有活性基团的其他合成或天然聚合物，如白喉毒素、破伤风毒素、酵母、尼龙、右旋葡聚糖或纤维素。实验例本专利技术的试剂盒与HPLC法对比，检测几种样品中黄豆苷元的含量，试剂盒法为实验组，HPLC法为对照组，每个处理重复3次，实验结果取平均值，结果如表1所示。表1样品实验组对照组5次结果偏差黄大豆5.62ppb6.14ppb9.6％黑大豆12.58ppb11.75ppb8.4％饲料豆19.31ppb20.67ppb11.5％综合表1中两种检测方法，比较可以得知，本专利技术的试剂盒的检测结果与精确度较高的HPLC法检测结果非常接近，试剂盒的检测结果与真实结果准确度控制在95％左右，5次的平行检测结果平均偏差控制在12％以内，说明本专利技术的试剂盒检测结果准确度较高，基本可以符合现场大量样品筛选的胶体金试剂盒。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案，而非对本专利技术保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细地说本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大豆药用提取物大豆异黄酮的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，其特征在于，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。

【技术特征摘要】
1.一种大豆药用提取物大豆异黄酮的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，其特征在于，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。2.根据权利要求1所述的大豆药用提取物大豆异黄酮的胶体金快速检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上还包被有第二种动物蛋白的IgG，其可以与邻苯二甲酸检测用金标抗体结合反应并显色。3.根据权利要求2所述的大豆...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：上海为然环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31