一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法技术

本发明专利技术公开了一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，该方法包括以下步骤：动物血压测量；脑基底动脉标本制备；压力肌动图技术检测血管直径。本发明专利技术通过观察不同浓度硫氢化钠对不同周龄自发性高血压大鼠以及正常对照组Wistar京都大鼠的脑基底动脉舒张反应的异同，探讨随着高血压的发展及动物周龄变化血管功能的改变以及H

An experimental method for the effect of hydrogen sulfide on the relaxation of the basilar artery in the brain

The invention discloses a method for the effect of a relaxation response to hydrogen sulfide basilar artery, the method comprises the following steps: animal cerebral basilar artery blood pressure measurement; specimen preparation; pressure detection technology of vascular muscle diameter. Through the observation of different concentrations of NaHS on different week old spontaneously hypertensive rats and normal control group between basilar artery Wistar Kyoto rats relaxation, along with the development of hypertension and to investigate the change of vascular function of animal age and H

【技术实现步骤摘要】
一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法
本专利技术属于生物
，涉及一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，具体地说，硫化氢对不同周龄自发性高血压大鼠脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法。
技术介绍
硫化氢(H2S)是继一氧化碳和一氧化氮之后的又一新型气体信号分子，同时也是一种血管舒张因子。在机体内，H2S对动脉血压及血管舒张具有重要调节作用。高血压作为心脑血管系统的常见疾病,严重影响着人们的身心健康。高血压的发病机制主要源于外周血管阻力增高，且长期过高的动脉血压会造成血管功能损伤。近年来研究显示,随着自发性高血压大鼠周龄的增加及血压的升高,其体内由血管内皮细胞合成的内源H2S含量也显著降低，并进一步造成血管舒缩功能紊乱；而通过外源注射硫化氢供体后则可有效降低自发性高血压大鼠血压的动脉血压。虽然已有研究指出H2S具有舒张血管效应，但随着高血压的病程发展，H2S是否对阻力血管还具有明显的舒张调节作用还不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，通过观察不同浓度硫氢化钠(NaHS)(H2S供体)对不同周龄自发性高血压大鼠(spontaneoushypertensionrats,SHR)以及正常对照组Wistar京都(Wistar-Kyoto，WKY)大鼠的脑基底动脉舒张反应的异同，探讨随着高血压的发展及动物周龄变化血管功能的改变以及H2S对自发性高血压大鼠中阻力血管舒张功能的影响。其具体技术方案为：一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，包括以下步骤：步骤1、动物血压测量使用全自动大小鼠无创血压测量仪检测WKY大鼠和SHR尾动脉收缩压。测量时先预热，将血压计的充气尾套套在大鼠尾根部，待大鼠安静后，重复测量血压3次，结果取其平均值。步骤2、脑基底动脉标本制备各组大鼠在麻醉后放血处死，迅速取出脑，置于含有95％O2和5％CO2的4℃饱和PSS液中，清除大脑基底动脉旁的脑膜，剪成2～3mm的血管段备用在动物被处死到固定到记录系统上在45min内完成。步骤3、压力肌动图技术检测血管直径血管固定在两个玻璃微电极上，外径是240～360μm，用10～0号眼科尼龙线固定血管在压力肌动图仪器水浴槽上，浴槽中持续通以95％O2和5％CO2的混合气体,管的远端封闭，形成一个无流动实验的状态，任何血管漏气时丢弃。DMT由一个摄像机和控制系统控制，血管直径的变化通过视频显微测量技术和一个校准视频尺寸分析仪来分析测量血管直径，测量单位是μm。血管压力从0mmHg上升到60mmHg，每隔5min上升10mmHg，直到60mmHg上。血管的压力维持在60mmHg，在37℃，pH7.4的PSS液中孵育1h，每隔20min换一次PSS液。给予K-PSS液检测血管的活性，观察血管的收缩程度大于直径的1/3，稳定后再用,10μmol/L乙酰胆碱舒张，舒张率大于80％认为内皮完整，可用于实验。血管直径舒张幅度变化公式D(μm)＝DX-D1，D1为血管在K-PSS中稳定时的直径，DX为血管加入不同浓度的药物时血管稳定后的直径。血管收缩率(％)＝(DX-D1)/D1×100％。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术通过观察不同浓度硫氢化钠(NaHS)(H2S供体)对不同周龄自发性高血压大鼠(spontaneoushypertensionrats,SHR)以及正常对照组Wistar京都(Wistar-Kyoto，WKY)大鼠的脑基底动脉舒张反应的异同，探讨随着高血压的发展及动物周龄变化血管功能的改变以及H2S对自发性高血压大鼠中阻力血管舒张功能的影响。结果显示：在高血压初期，脑基底动脉对H2S的敏感性增加，而可能随着高血压的发展及血管功能的严重损伤，脑基底动脉对H2S的敏感性降低。附图说明图1是本专利技术硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法的流程图；图2是不同浓度NaHS对14周龄WKY大鼠脑基底动脉的舒张反应；图3是不同浓度NaHS对14周龄WKY和SHR脑基底动脉的舒张反应的量效曲，与WKY组比较：*P<0.05；图4是不同浓度NaHS对40周龄WKY和SHR脑基底动脉的舒张反应的量效曲线，与WKY组比较：*P<0.05。具体实施方式下面结合附图和具体实施方案对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。1材料与方法1.1实验动物与分组实验所用WKY大鼠和SHR(北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号SCXK(京)2012-0001)。清洁级，适应性饲养1周后进入正式实验，动物房室内温度为20～25℃，湿度为50％～55％。各组大鼠分笼喂养，给予标准饲料，自由进食水，环境安静。所有实验在符合动物实验伦理要求下进行。WKY组分为14、40周龄组，SHR组分为14、40周龄组，各6只。1.2主要试剂生理盐溶液(physiologicsaltsolution,PSS)成分：NaCl119mmol/L，KCl4.69mmol/L，MgSO4·7H2O1.17mmol/L，KH2PO41.18mmol/L，CaCl22.5mmol/L，NaHCO225mmol/L，EDTA0.026mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L。将pH调至7.4。高钾外液(K-PSS，相当于60mmol/LKCl)成分：KCl123.70mmol/L，MgSO4·7H2O1.17mmol/L，KH2PO41.18mmol/L，CaCl22.5mmol/L，NaHCO225mmol/L，EDTA0.026mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L。NaHS(H2S供体)购自Sigma公司(美国Sigma公司)，其余试剂均为国产分析纯试剂。1.3主要仪器压力肌动图：Pressuremyographsystem，DMT(丹麦DanishMyoTechnologyA/S公司)110P；倒置相差显微镜(宁波舜宇仪器有限公司)；光学显微镜(日本Olympus公司)；电子天平(上海越平科学仪器有限公司)。1.4实验方法如图1所示：1.4.1动物血压测量使用全自动大小鼠无创血压测量仪检测WKY大鼠和SHR尾动脉收缩压。测量时先预热，将血压计的充气尾套套在大鼠尾根部，待大鼠安静后，重复测量血压3次，结果取其平均值。1.4.2脑基底动脉标本制备各组大鼠在麻醉后放血处死，迅速取出脑，置于含有95％O2和5％CO2的4℃饱和PSS液中，清除大脑基底动脉旁的脑膜，剪成2～3mm的血管段备用在动物被处死到固定到记录系统上在45min内完成。1.4.3压力肌动图技术检测血管直径血管固定在两个玻璃微电极上，外径是240～360μm，用10～0号眼科尼龙线固定血管在压力肌动图仪器(pressuremyographsystem,DMT,110P)水浴槽上,浴槽中持续通以95％O2和5％CO2的混合气体,管的远端封闭，形成一个无流动实验的状态，任何血管漏气时丢弃。DMT由一个摄像机和控制系统控制，血管直径的变化通过视频显微测量技术和一个校准视频尺寸分析仪来分析测量血管直径，测量单位是μm。血管压力从0mmHg上升到60mmHg，每隔5min上升10mmHg，直到60mmHg上[4]。血管的压力维持在60mmHg，在37℃，pH7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、动物血压测量使用全自动大小鼠无创血压测量仪检测WKY大鼠和SHR尾动脉收缩压；测量时先预热，将血压计的充气尾套套在大鼠尾根部，待大鼠安静后，重复测量血压3次，结果取其平均值；步骤2、脑基底动脉标本制备各组大鼠在麻醉后放血处死，迅速取出脑，置于含有95％O

【技术特征摘要】
1.一种硫化氢对脑基底动脉舒张反应的影响的实验方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、动物血压测量使用全自动大小鼠无创血压测量仪检测WKY大鼠和SHR尾动脉收缩压；测量时先预热，将血压计的充气尾套套在大鼠尾根部，待大鼠安静后，重复测量血压3次，结果取其平均值；步骤2、脑基底动脉标本制备各组大鼠在麻醉后放血处死，迅速取出脑，置于含有95％O2和5％CO2的4℃饱和PSS液中，清除大脑基底动脉旁的脑膜，剪成2～3mm的血管段备用在动物被处死到固定到记录系统上在45min内完成；步骤3、压力肌动图技术检测血管直径血管固定在两个玻璃微电极上，外径是240～360μm，用10～0号眼科尼龙线固定血管在压力肌动图仪器水浴槽上，浴槽中持续通以95％O2和5％CO2的混合气体,管的远端封闭，形成一个...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新芝，马克涛，彭珉，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65