一种快速检测黄曲霉毒素M1的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测黄曲霉毒素M1的新方法，主要是基于非标记卟啉荧光染料检测黄曲霉毒素M1。该方法是将黄曲霉毒素M1与卟啉荧光染料混合后，染料的荧光强度增加，通过检测荧光强度来实现对黄曲霉毒素M1的快速、定量检测。本发明专利技术提供的方法简单、特异性强、检测速度快，能够满足现场快速、准确的检测要求。

A method for rapid detection of aflatoxin M1

The invention discloses a new method for rapidly detecting aflatoxin M1, which is mainly based on the detection of aflatoxin M1 by non labeled porphyrin fluorescent dyes. The method is that aflatoxin M1 is mixed with porphyrin fluorescent dyes to increase the fluorescence intensity of the dye, and to detect aflatoxin M1 rapidly and quantitatively by detecting the fluorescence intensity. The method provided by the invention has the advantages of simplicity, high specificity and fast detection speed, and can meet the requirements of rapid and accurate on-site detection.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测黄曲霉毒素M1的方法
本专利技术属于检测
，具体是涉及一种基于非标记卟啉染料检测黄曲霉毒素M1的快速检测方法。
技术介绍
黄曲霉毒素为二氢呋喃香豆素的衍生物，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一种次级代谢产物，具有急性毒性、慢性毒性和致癌性。黄曲霉毒素常存在于玉米、花生、谷物等食品中，被世界卫生组织划定为1类致癌物，世界各国对黄曲霉毒素都制定了严格的限量标准。牛乳及乳制品是易受黄曲霉毒素污染的食品之一。当奶牛摄入被黄曲霉毒素污染的饲料后，黄曲霉毒素在其体内可被羟化而产生黄曲霉毒素M1(AflatoxinM1,AFM1)，所产的牛奶中就含有AFM1。人们食用该牛奶后，会对人体的健康造成严重的危害。欧盟国家规定牛奶中AFM1含量不能超过0.5μg/kg，婴儿食品中不能超过0.025μg/kg。我国规定乳及乳制品中AFM1的限量为0.5μg/kg。建立快速、高灵敏度AFM1的检测方法对于食品安全检测及保护国民身体健康具有重要意义。目前，国内外检测AFM1的方法主要有色谱法和酶联免疫法。色谱法具有灵敏度高、检测结果好等特点，但是样品前处理过程较为复杂、耗时，并且需要昂贵的大型仪器，难以满足现场快速检测。免疫法是一种常用的检测方法，具有快速、灵敏等特点，但是需要使用价格昂贵且易失活的酶、抗体等生物试剂。因此，需要开发一种简单灵敏的AFM1的快速检测方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术创造旨在提出一种快速检测黄曲霉毒素M1的新方法。为达到上述目的，本专利技术创造的技术方案如下：提供一种快速检测黄曲霉毒素M1的新方法，黄曲霉毒素M1与卟啉染料相互作用后，增强卟啉染料的荧光。通过检测荧光强度实现对黄曲霉毒素M1的快速检测。本专利技术具体包括以下步骤：(1)黄曲霉毒素M1溶液中加入2μM卟啉染料，用荧光分光光度仪检测卟啉染料的荧光强度，激发波长为399nm，发射波长为619nm；(2)根据黄曲霉毒素M1的浓度与卟啉荧光染料的荧光强度拟合曲线。优选的，所述黄曲霉毒素M1浓度为0.01-2ng/mL。优选的，所述的卟啉染料是NMM或PPIX中的一种。相对于现有技术，本专利技术创造所述的黄曲霉毒素M1的检测方法具有以下优势：本专利技术的优点是：本专利技术利用非标记卟啉荧光染料直接与黄曲霉毒素M1作用，具有较高的灵敏度和特异性，同时缩短了检测时间，仅需几分钟。附图说明构成本专利技术创造的一部分的附图用来提供对本专利技术创造的进一步理解，本专利技术创造的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术创造，并不构成对本专利技术创造的不当限定。在附图中：图1为本专利技术创造实施例所述的黄曲霉毒素M1在激发波长399nm和365nm的荧光光谱图。图2为本专利技术创造实施例所述的黄曲霉毒素M1与卟啉染料NMM的荧光强度拟合曲线。图3为本专利技术创造实施例所述的卟啉染料NMM的特异性实验数据。图4为卟啉染料PPIX的特异性实验数据。具体实施方式为了使本专利技术上述特征和优点更加清楚和容易理解，下面将结合附图对本专利技术的实施方式作进一步详细描述。实施例1黄曲霉毒素M1的快速检测方法用荧光分光光度计测10ng/mL黄曲霉毒素M1的荧光强度(如图1所示)，激发波长为365nm和399nm。从图中可以看出，黄曲霉毒素M1在619nm处没有峰。0.01-2ng/mL的黄曲霉毒素M1标准液与2μM卟啉荧光染料NMM混合后，利用荧光分光光度仪测其荧光强度。激发波长为399nm，发射波长为619nm。以黄曲霉毒素M1浓度为横坐标，以(F-F0)/(F'-F0)为纵坐标做拟合曲线，其中F0、F和F’分别表示没有黄曲霉毒素M1时NMM的荧光强度，添加不同浓度黄曲霉毒素M1后NMM的荧光强度及加入2ng/mL黄曲霉毒素M1时NMM的荧光强度(如图2所示)。实施例2选择黄曲霉毒素B1(AFB1)、展青梅毒素(PAT)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)和T-2毒素作为竞争物，研究该方法的特异性。配制浓度为1ng/mL黄曲霉毒素M1和浓度为10ng/mL竞争毒素。分别与卟啉染料NMM混合，利用荧光分光光度仪测其荧光值。如图3所示，黄曲霉毒素M1可以强烈的增加NMM的荧光。而竞争毒素对其荧光影响较小。说明该方法对黄曲霉毒素M1具有特异性。实施例3选择黄曲霉毒素B1(AFB1)、展青梅毒素(PAT)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)和T-2毒素作为竞争物，研究以PPIX为非荧光标记卟啉染料时该方法的特异性。配制浓度为1ng/mL黄曲霉毒素M1和浓度为10ng/mL竞争毒素。分别与卟啉染料PPIX混合，利用荧光分光光度仪测其荧光值。激发波长为410nm，发射波长为624nm。如图4所示，黄曲霉毒素M1可以强烈的增加PPIX的荧光。而竞争毒素对其荧光影响较小。说明该方法对黄曲霉毒素M1具有特异性。以上所述仅为本专利技术创造的较佳实施例而已，并不用于限制本专利技术创造，凡在本专利技术创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术创造的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测黄曲霉毒素M1的方法，其特征在于：将黄曲霉毒素M1直接与卟啉染料混合，通过检测染料荧光强度来实现对黄曲霉毒素M1的定量检测。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测黄曲霉毒素M1的方法，其特征在于：将黄曲霉毒素M1直接与卟啉染料混合，通过检测染料荧光强度来实现对黄曲霉毒素M1的定量检测。2.一种快速检测黄曲霉毒素M1的方法，将黄曲霉毒素M1直接与卟啉染料混合，通过检测染料荧光强度来实现对黄曲霉毒素M1的定量检测，其特征在于，包括如下步骤：(1)黄曲霉毒素M1溶液中加入2μM卟啉染料，用荧光分光光度仪检...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚青，王硕，郭婷，林晓东，高金婷，邓健康，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12