The invention discloses a method for detecting cigarette smoke condensates on peroxidation of lipid, which comprises the following steps: (1) pretreatment test; (2) human lung fibroblast cell suspensions were prepared; (3) human lung fibroblasts single cell concentration calculation cell suspension; (4) human lung fibroblast single cell suspension cells; (5) grouping test; (6) subjects were detected dose setting; (7) the culture goods preparation; (8) subjects were incubated; (9) subjects were incubated for collection; (10) by centrifugal test incubation pyrolysis products; (11) standard dilution; (12) the test sample determination; (13) the MDA content calculation. The invention has the advantages of effective treatment of the sample, optimal setting of the detection dose, and correct selection of target cells, so that the method can accurately and effectively detect the influence of total particulate matter of cigarette smoke on the lipid peroxidation of the cells.
【技术实现步骤摘要】
一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法
本专利技术属于烟草制品生物学效应评价
,特别涉及一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法。
技术介绍
随着人们对健康的关注越来越高,对烟草产品提出了更高的要求,不但要有较好的口感,而且要尽可能的减少人体的不良感受。卷烟产品研发人员在烟油产品配方设计初期将不同组份按照不同比例组合调配,形成具有不同风格的初选配方,再结合化学评价和感官评价对配方进行不断筛选调整形成最终的产品配方。然而初选配方数量众多,全部进行感官评价耗时耗力,且感官评价侧重于对产品的风格口感进行筛选,如何利用生物学测试指标对产品初选配方进筛选,以获得降低人体不良感受的产品配方,目前尚属探索阶段,无统一的标准方法。机体在遭受各种不利刺激时,体内高活性分子如活性氧自由基(reactiveoxygenspecies,ROS)和活性氮自由基(reactivenitrogenspecies,RNS)产生过多,氧化程度超出氧化物的清除,氧化系统和抗氧化系统失衡,从而导致组织损伤。这种现象被称为氧化性损伤,氧化性损伤是一种广谱性损伤机制,丙二醛(MAD)是脂质过氧化的一种重要效应生物标志物,对其进行测定,可用于产品初选配方的进一步筛选,以获得降低人体不良感受的产品配方。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法,为电子烟制品的安全性评估提供参考。一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法,包括以下步骤:(1)受试物的前处理;(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备;(3)人肺成纤维细胞单细胞悬 ...
【技术保护点】
一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)受试物的前处理;(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备;(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算;(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种;(5)受试物的分组;(6)受试物检测剂量的设定;(7)受试物培养品的制备;(8)受试物的孵育;(9)受试物孵育品的收集;(10)受试物孵育品的裂解离心;(11)标准品稀释;(12)受试物样品测定;(13)丙二醛含量计算。
【技术特征摘要】
1.一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞脂质过氧化影响的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)受试物的前处理;(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备;(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算;(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种;(5)受试物的分组;(6)受试物检测剂量的设定;(7)受试物培养品的制备;(8)受试物的孵育;(9)受试物孵育品的收集;(10)受试物孵育品的裂解离心;(11)标准品稀释;(12)受试物样品测定;(13)丙二醛含量计算。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括以下具体步骤:(1)受试物的前处理:参照中华人民共和国国家标准GB/T19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》制备卷烟烟气总粒相物样品,样品浓度为10mg/mL;(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备:人肺成纤维细胞复苏后,接种到细胞培养瓶中,置于37℃、5vt%CO2培养箱中培养,倒置显微镜观察培养细胞的汇合和形态情况,待细胞长至90%的汇合率时,移除培养瓶中的培养基,用磷酸缓冲液洗两次,加入适量0.25%的胰蛋白酶溶液,其中胰蛋白酶/磷酸盐缓冲液的浓度单位为质量:体积;单层孵育约1-2min,用成纤维成纤维细胞培养基悬起,形成单细胞悬浮液;(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算:用血球计数板计数法对步骤(2)得到人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度进行计算,计算出每毫升人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的活细胞数;(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种:将步骤(3)计数后的人肺成纤维细胞单细胞悬浮液加入成纤维细胞培养基稀释至2.0×105个/mL,接种到96孔细胞培养板中,接种到60mm细胞培养皿中,每皿4mL,将细胞培养板置于37℃、5vt%CO2培养箱内培养24h;(5)受试物的分组:将受试物分为两组:细胞对照组和检测样品组;各组的...
【专利技术属性】
技术研发人员:管莹,熊国行,夭建华,李雪梅,米其利,高茜,朱洲海,
申请(专利权)人:云南中烟工业有限责任公司,
类型:发明
国别省市:云南,53
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