本发明专利技术公开一种ＧＬＰ－１衍生物，其特征在于，该衍生物的分子结构式为以下任何一种结构式：ａＧＬＰ－１（７－３６）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．２；ａＧＬＰ－１（７－３７）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．３；或ａＧＬＰ－１（７－３８）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．４。本发明专利技术还公开了ＧＬＰ－１衍生物的固相化学合成制备方法，以及在制备治疗糖尿病的药物中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有人胰高血糖素样肽一l ( Glucagon-like Peptide 1， GLP—1)活性的人胰高血糖素样肽一 1衍生物(GLP—1衍生物)及其制备和应用，属于生物工程
技术介绍
人姨高血糖素样月太一1 ( glucagon-like peptide-l， GLP-1)是主 要由远端回肠、结肠和直肠的L细胞分泌的一种31个氨基酸的多肽 激素，通过葡萄糖依赖性促胰岛素释放、刺激生长抑素释放和抑制 胰高血糖素，是一种治疗糖尿病尤其是II型糖尿病的多肽药物，具 有广泛的社会效益和巨大的经济效益。但是，GLP-1在体内很容易被二肽酰基肽酶IV ( Dipeptidyl Peptidase 4， DPP IV)降解为脱去N端His7-Ala8j^基的无活性的 GLP-lC9-37)或GLP-l(9-36) -NH2。静脉注射GLP-1在体内的半衰期仅 为3 5分钟，限制了GLP-1的临床应用。目前GLP-1治疗糖尿病的研究方向之一是通过对GLP-1的结构 进行改变，得到GLP-1衍生物，用该衍生物治疗糖尿病，达到延长 药物在体内的药效时间的目的。已有的GLP-1衍生物都显示出稳定 性增加，且体内生物活性仍能维持的性质。例如在第8位上进行氨基酸 改变如将丙氨酸Ala改为甘氨酸Gly的GLP-1衍生物。又如制备GLP-1的脂肪 酸衍生物，代表性药物有诺华诺德公司研制的NN2211 (商品名Liraglutide)， 在GLP-1的Lys26上进行酰化。再者，对GLP-1分子进行聚乙二醇(PEG)修 饰，如用PEG20000修饰GLP-1分子。还有直接将GLP-1分子与白蛋白大分子 融合的CJC-1131，通过分子量增大来增强GLP-1的体内稳定性。虽然通过改变GLP-1第8位上的氨基酸制备得到的GLP-1衍生物半衰期有延 长，但第20位Lys、 28位Lys以及30位Arg在体内是某些蛋白酶的降解位 点，在体内仍然有被降解的可能。通过脂肪酸或聚乙二醇修饰GLP-1等方法制备的GLP-1衍生物虽然体内半衰期延长，但是脂肪酸或聚乙二醇修饰GLP-1 的位点和修饰程度常难以控制，导致后续纯化和质量控制都比较困难，制备步骤 繁琐、得率低、成本高。因此，现有GLP-1衍生物仍然存在制备和纯化困 难、或半衰期尚不够长或难以口服给药等缺陷，迫切需要研制生物半衰 期长的新型GLP-1产品。
技术介绍
已经提出一种GLP-1衍生物及其制备方法，见本申请人 申请的申请号和专利技术名称分别为"200610024355.X"和"一种人胰高 血糖素样肽一l衍生物及其制备和应用"，以及申请号和专利技术名称分别 为"200610029646.8"和" 一 种人胰高血糖素样肽一 1衍生物及其固 相化学合成"的专利技术专利。
技术介绍
制备所得的GLP-1衍生物，产量 高，纯化工艺简化，生产成本较低，且该衍生物半衰期长于GLP-1的 半衰期。但
技术介绍
制备的衍生物也有以下缺点例如，第2位氨基 酸在体内仍然容易被二肽酰基肽酶IV降解失去活性。第20位Lys、 28 位Lys以及30位Arg在体内是某些蛋白酶的降解位点，在体内仍然有被 降解的可能。因此，仍然需要开发具有更长作用时间的GLP-1衍生物，更好地用于糖尿病治疗。
技术实现思路
GLP-1在体内有两种形式， 一种为GLP-1 (7 — 36) —NH2，由 30个氨基酸残基组成，另一种为GLP-1 (7 —37)，由31个氨基酸残 基组成，二者有相同的生物学活性。本专利技术涉及的GLP-1指GLP-1 (7 — 37)，其序歹U ( Seq ID No.l )罗列如下His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp墨Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly。由于GLP-1的结构与功能目前已十分清楚N端是保持活性所必 需，而C端负责与受体的结合。GLP-1 (7—34)、 GLP-1 (7—35)、 GLP-1 (7 — 36)、 GLP-1 (7—37)已证明都具有降血糖活性，由此可 见GLP-l的C端对生物学活性具有可塑性。根据GLP-1多肽C端功能"可塑性"的结构和功能的关系，以增加GLP-1的体内生物稳定性和延长半衰期为设计思想，我们开展了大量的研究工作，采用全新的 思路对GLP-1的氨基酸序列迸行设计和改造，制备出长效的新型GLP-1衍生物。本专利技术的第一个目的是提供一种新型GLP-l衍生物aGLP-l，其特 征在于，该衍生物的分子结构式为以下的三种结构式aGLP-1 (7 — 36)，艮卩SeqlDNo.2， aGLP-l (7—37)，艮卩Seq ID No.3禾卩aGLP-l (7 一38)，即S叫IDNo.4之一。其中，aGLP-l ( 7 — 36 )，艮卩Seq ID No.2序歹U如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-AIa-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30。aGLP陽l (7—37)，艮卩Seq ID No.3序歹!j如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-XaaSO-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-XaaSS-Gly-XaaSO-Xaa31。aGLP-l (7—38)，艮卩Seq ID No.4序歹lj如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32。其中Xaa2是Ser， His和D-Ala中的任何 一 个氨基酸，Xaa20是Ser， His, Gln和Ala中的任何 一 个氨基酸，Xaa28是Ser ， His， Asp和Ala中 的任何一个氨基酸，Xaa30是Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当 Xaa30是C末端氨基酸时，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺 -NH2， Xaa31是Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当Xaa31是C末端 氨基酸时，Gly和Cys的C末端可以是羧基一OH或酰胺-NH2， Xaa32是 Gly和Cys中的任何一个氨基酸，且当Xaa32是C末端氨基酸时，Gly和 Cys的C末端可以是羧基一OH或酰胺-NH2。该衍生物不仅保持了天然 GLP-1在体内的活性，还明显延长了体内药效时间，体内药效时间至 少可持续7小时，如给予较高浓度的该衍生物，体内药效时间将更长，7具有良好的临床使用价值。此外，该衍生物可通过重组DNA技术的方法或固相化学合成方法 制备，技术成熟，成本低，适宜普及使用。本专利技术的第二本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ＧＬＰ－１衍生物，其特征在于，该衍生物的分子结构式为以下任何一种结构式： ａＧＬＰ－１（７－３６），即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．２， ａＧＬＰ－１（７－３７），即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．３，或 ａＧＬＰ－１（７－３８）， 即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．４， 其中， Ｘａａ２是Ｓｅｒ，Ｈｉｓ和Ｄ－Ａｌａ中的任何一个氨基酸， Ｘａａ２０是Ｓｅｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｎ和Ａｌａ中的任何一个氨基酸， Ｘａａ２８是Ｓｅｒ，Ｈｉｓ，Ａｓｐ和Ａｌａ中的任何一个 氨基酸， 其中， 所述ａＧＬＰ－１（７－３６）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．２中，Ｘａａ３０是Ｇｌｙ和Ｃｙｓ中的任何一个氨基酸，且当Ｘａａ３０是Ｃ末端氨基酸时，Ｇｌｙ和Ｃｙｓ的Ｃ末端可以是羧基－ＯＨ或酰胺－ＮＨ２； 所述ａＧＬ Ｐ－１（７－３７）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．３中，Ｘａａ３１是Ｇｌｙ和Ｃｙｓ中的任何一个氨基酸，且当Ｘａａ３１是Ｃ末端氨基酸时，Ｇｌｙ和Ｃｙｓ的Ｃ末端可以是羧基－ＯＨ或酰胺－ＮＨ２； 所述ａＧＬＰ－１（７－３８）即Ｓｅｑ ＩＤ Ｎ ｏ．４中，Ｘａａ３２是Ｇｌｙ和Ｃｙｓ中的任何一个氨基酸，且当Ｘａａ３２是Ｃ末端氨基酸时，Ｇｌｙ和Ｃｙｓ的Ｃ末端可以是羧基－ＯＨ或酰胺－ＮＨ２。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄静，金丽，金明飞，刘雯，吴自荣，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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