针对Fcγ受体IIB及Fcε受体的新型抗体制造技术

本文公开了以第一结合结构域结合Fcε受体(FcεR)和以第二结合结构域结合Fcγ受体IIB(FcγRIIB)的识别分子，以及这种识别分子的用途。

Novel antibodies targeting Fc gamma receptors IIB and Fc epsilon receptors

Identification molecules having the first binding domain binding to the Fc epsilon receptor (Fc epsilon R) and binding Fc gamma receptor IIB (Fc gamma RIIB) in the second binding domain, and the use of such recognition molecules are disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对Fcγ受体IIB及Fcε受体的新型抗体
技术介绍
抗体结合抗原并通过阻止该抗原与其内源靶标(如，受体或配体)结合或通过诱导导致抗原移除的效应物响应来中和该抗原。为了有效移除和/或破坏身体外来的抗原，抗体应当表现出对其抗原的高亲和性和有效的效应物功能。具有多特异性的抗体(比如，例如双特异性抗体)对介导多种抗原的互补或协同响应是有用的。抗体效应物功能由抗体Fc区介导。效应物功能分为两类：(1)在抗体结合抗原之后运作的效应物功能(这些功能涉及补体级联或Fc受体(FcR)-承载细胞的参与)；和(2)独立于抗原结合运作的效应物功能(这些功能赋予抗体在循环中的持久性以及其通过胞吞转运作用而跨细胞屏障转移的能力)。由于Fc受体通过结合受体同源抗体的Fc区来介导抗体效应物功能，因此由FcR对免疫球蛋白同种型的特异性来定义FcR：对IgG抗体特异性的Fc受体是指FcγR；对IgE抗体特异性的Fc受体是FcεR；对IgA抗体特异性的Fc受体是FcαR等等。已经鉴定了FcγR的三个子类：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。FcγRIIB的特征在于在胞质结构域中存在ITIM基序(共有序列：V/I-X-Y-X2-V/L,Isakov(1997),ImmunolRes.16,85-100)，其在Ig-聚集体或IC结合和与携带ITAM的活化Fcγ受体共连接后被激酶Lyn磷酸化。磷酸化的ITIM吸引多磷酸肌醇5’-磷酸酶(SHIP)的SH2-结构域，SHIP转而水解磷酸肌醇信使，所述磷酸肌醇信使由于含ITAM的FcγR-介导的酪氨酸激酶活化而释放，因而阻止细胞内Ca2+的内流。FcγRIIB交联抑制对FcγR连接的活化响应，其继而抑制B细胞活化、增殖和抗体分泌。在肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面以及人的嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和血小板上发现了Fcε受体(FcεR)。有两种类型的Fcε受体，FcεRI(I型Fcε受体)，其是一种高亲和性IgE受体，和FcεRII(II型Fcε受体)，也称为CD23，其是一种低亲和性IgE受体。IgE可以上调两种类型的Fcε受体的表达。免疫球蛋白E(IgE)是一类仅在哺乳动物中发现的抗体(或免疫球蛋白(Ig)“同种型”)。IgE以由两个重链(ε链)和两个轻链组成的单体存在，其中所述ε链包含4个Ig-样恒定结构域(Cε1-Cε4)。IgE还在I型超敏反应中起重要作用(GouldH等.(2003),Annu.Rev.Immunol.21:579–628)，其表现出多种过敏性疾病，例如过敏性哮喘、大多数类型的鼻窦炎、过敏性鼻炎、食物变态反应(allergy)和一些类型的慢性荨麻疹和特应性皮炎。IgE还在过敏病症(例如对某些药物、蜂蜇和用于特异性脱敏免疫治疗的抗原制剂的过敏反应)中扮演重要角色。IgE通过结合在肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面上发现的FcεR来引发IgE介导的过敏响应。抗原与已经由肥大细胞上的FcεRI结合的IgE的结合导致结合的IgE的交联及下面的FcεRI的聚集，从而导致介质脱粒和从细胞释放。嗜碱性粒细胞，在其表面IgE被抗原交联后，释放如白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-13(IL-13)的2型细胞因子和其它炎性介质。低亲和性受体(FcεRII)总是在B细胞上表达，但其表达可以通过IL-4在巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、血小板和一些T细胞的表面上诱导。肥大细胞和嗜碱性粒细胞是IgE依赖性过敏反应和许多其它急性或慢性炎症过程中的重要免疫调节细胞和中枢效应细胞。这些细胞类型具有IgG受体和IgE受体。在过敏性效应细胞如肥大细胞和嗜碱性粒细胞上IgE的高亲和性受体(FcεRI)的活化通过基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)诱导多种阳性信号，从而导致过敏性炎症反应的快速表现(manifestation)。作为平衡，IgG受体FcγRIIB的共聚集通过基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)介导抑制性信号。Fc受体表达和信号转导的阳性和阴性调节的进展阐明了Fc受体在免疫系统中的作用，表明它们是双功能、抑制性和活化性结构的。基于这些发现，已经开发了新的治疗策略，例如使用同时激活FcεRI和FcγRIIB的嵌合融合蛋白。这些新方法利用了Fc受体的二价特性，并为调节过敏性免疫反应的创新策略铺平了道路。这种嵌合融合蛋白的一个实例公开在WO2002/088317中。然而，尽管在现有技术中甚至更多这样的嵌合融合蛋白是已知的，还参见WO2006/028956，但是仍然高度期望提供改进的嵌合融合蛋白，其发挥至少两种功能—一种是结合Fcε受体和第二种是结合Fcγ受体IIB，由此共聚集这两种受体。
技术实现思路
通过提供本文下文描述的、在权利要求中进行表征且通过随附的实施例和附图进行说明的识别分子，本专利技术满足了这一需求。已知IgE受体与嗜碱性粒细胞或肥大细胞上的IgG受体(FcγRIIb)的聚集抑制过敏原诱导的细胞脱粒(Daeron(1997),Int.Arch.AllergyImmunol.113,138-141)，本专利技术人提供识别分子，其不仅交联或共聚集这两种受体以抑制肥大细胞和嗜碱性粒细胞的IgE介导的活化，而且还增强FcγRIIB的负调节功能以改善与嗜碱性粒细胞和/或肥大细胞相关的疾病(比如过敏性疾病)的治疗。如上所述，对过敏性效应细胞(如肥大细胞和嗜碱性粒细胞)上的IgE高亲和性的受体(FcεRI)的活化导致过敏性炎症反应的快速表现。作为抗衡，IgG受体FcγRIIB的共聚集通过基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)介导抑制性信号。因此，不受理论束缚，本专利技术人假定增强/强化已知由FcγRIIB和Fcε受体的共聚集产生的FcγRIIB的ITIM磷酸化(参见Zhu等，(2002),Nat.Med.8(5),518-521)可能在抗衡或甚至克服Fcε受体在IgE结合时的活化功能有益，其导致预先形成的介体的释放和之后起作用的白三烯和趋化因子的合成，而这些都有助于如过敏性疾病。出于这一目的，令人惊讶的是，本专利技术人观察到本专利技术提供的识别分子，特别是抗体显著地增加了FcγRIIB的ITIM磷酸化，据此推测增强了已经通过共聚集FcγRIIB和Fcε受体实现的抑制性信号，使得其理想地克服了由结合IgE时Fcε受体的活化触发的激活信号。因此，识别分子，特别是本文公开的抗体提供两个有利的功能—它们交联导致ITIM磷酸化的FcγRIIB和FcεR，并由此抑制FcεR信号传导；并且它们通过其与所述受体的结合增强了FcγRIIB的ITIM磷酸化，这再次抑制了嗜碱性粒细胞和肥大细胞中的Fcε受体信号传导。因此，本专利技术的识别分子，特别是抗体对于大量有助于与肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞相关的疾病的细胞中FcγRIIB介导的信号传导的抑制性作用发挥两倍的效果。为了在嗜碱性粒细胞和肥大细胞中利用这种FcγRIIB介导的抑制性信号转导，本专利技术人提供了本专利技术的识别分子，特别是抗体，与例如本领域已知的针对FcγRIIB的抗体相比，令人惊讶地显示出无法预期的对ITIM磷酸化的更强的效果。这种更强的效果是有益的，因为其有助于肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞中的抑制性信号传导，从而抑制IgE介导的肥大细胞和嗜碱性粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种识别分子，其以第一结合结构域结合Fcε受体(FcεR)且以第二结合结构域结合Fcγ受体IIB(FcγRIIB)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.13 EP 14002825.91.一种识别分子，其以第一结合结构域结合Fcε受体(FcεR)且以第二结合结构域结合Fcγ受体IIB(FcγRIIB)。2.根据权利要求1所述的识别分子，其是抗体。3.根据权利要求2所述的识别分子，其中所述抗体不结合Fcγ受体IIA(FcγRIIA)。4.根据权利要求2或3所述的识别分子，其中所述抗体是非封闭性抗体，使得所述抗体通过其可变区与所述Fc受体的结合不干扰免疫复合物、或聚集的IgG与细胞的结合。5.根据权利要求4所述的识别分子，其中所述抗体是嵌合的或人源化的。6.根据前述权利要求中任一项所述的识别分子，其中所述第一结合结构域包含IgE恒定区的至少一部分。7.根据前述权利要求中任一项所述的识别分子，其中所述第二结构域包含Fab结构域的至少一部分。8.根据前述权利要求中任一项所述的识别分子，其中所述第二结合结构域至少含有：(i)重链可变区，其包含与氨基酸序列SEQIDNO.1具有至少80％同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区，其包含与氨基酸序列SEQIDNO.2具有至少65％同一性的氨基酸序列。9.根据前述权利要求中任一项所述的识别分子，其中所述第二结合结构域含有以下中的至少一个：(i)重链可变区，其包含与氨基酸序列SEQIDNO.3具有至少90％同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区，其包含与氨基酸序列SEQIDNO.4具有至少90％同一性的氨基酸序列。10.根据前述权利要求中任一项所述的识别分子，所述识别分子在其第二结合结构域中包含下列可变重区和轻区的CDR序列：(i)H-CDR1序列，其与SEQIDNO.20中所示的H-CDR1序列具有60％或更多的同一性；(ii)H-CDR2序列，其与SEQIDNO.21中所示的H-CDR2序列具有36％或更多的同一性；(iii)H-CDR3序列，其与SEQIDNO.22中所示的H-CDR3序列具有50％或更多的同一性；(iv)L-CDR1序列，其与SEQIDNO.23中所示的L-CDR1序列具有64％或更多的同一性；(v)L-CDR2序列，其与SEQIDNO.24中所示的L-CDR2序列具有29％或更多的同一性；和(vi)L-CDR3序列，其与SEQIDNO.25中所示的L-CDR3序列具有78％或更多的同一性；其中与未采用所述识别分子处理的Daudi细胞相比，所述识别分子使Daudi细胞的FcγRIIB的ITIM磷酸化增加约4至10倍。11.根据权利要求10所述的识别分子，所述识别分子在其重链可变区中包含SEQIDNO.29、30和31中所示的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，和在其轻链可变区中包含SEQIDNO.32、33和34中所示的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中与未采用所述识别分子处理的Daudi细胞相比，所述识别分子使Daudi细胞的FcγRIIB的ITIM磷酸化增加约4至10倍。12.根据权利要求10或11所述的识别分子，所述识别分子在其重链和轻链可变区中包含下列CDR序列：(a)在其重链可变区中包含SEQIDNO.14(CDR-H1)、SEQIDNO.15(CDR-H2)和SEQIDNO.16(CDR-H3)，和在其轻链可变区中包含SEQIDNO.17(CDR-L1)、SEQIDNO.18(CDR-L2)和SEQIDNO.19(CDR-L3)；或(b)在其重链可变区中包含SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·卡尔，C·德恩伯格，P·松德尔曼，M·米勒，N·里特，T·波尔，
申请(专利权)人：苏伯利莫尔公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE