细胞粘连肽抑制剂制造技术

本发明专利技术公开了成环整合素受体拮抗剂，其可用于调节细胞粘连，包括与纤维结合素有关的粘连以及白细胞与内皮细胞的粘连。本发明专利技术还公开了做为治疗剂的本发明专利技术化合物的合成、试验、配剂及应用方法。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请与于1992年1月23日公开的wo92/00995的PCT申请有关，并在此做为全文参考。本专利技术涉及具有细胞粘连调节活性的新的环状肽和肽模拟化合物。细胞外基质(ECM)是结缔组织的主要成分，此结缔组织可使结构完整，促进细胞迁移和分化。做为这些功能的一部分，细胞外基质分子如纤维结合素、胶原蛋白、昆布胺酸(laminin)、VonWillebrand因子、血小板反应素、纤维蛋白原和tenascin已被发现在体外可促进细胞粘连。此粘连反应对于许多生物过程会起到关键性作用，此过程包括止血、血栓形成、伤口愈合、肿瘤转移、免疫和炎症。纤维结合素(FN)是原型ECM分子。纤维结合素分子中主要细胞结合部位已经用氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸或用单一字母命名的RGD经合成方法复制出。含有即可抑制亦可促进细胞粘连的RGD序列的肽已经被公开(美国专利4,589,881；4,661,111；4,517,686；4,683,291；4,578,079；4,614,517和4,792,525)，当用丙氨酸替代甘氨酸或用谷氨酸替代天门冬氨酸，在三肽结构中增加一个甲基或亚甲基时，肽的如此小的变化均会消除这些活性(Pierschbacher等人，PNAS，815985(1984))。最近，在分子A链的另一个缝接区中已经鉴定出第二个FN细胞结合区。现已发现FN中十个氨基酸识别序列(GPEILDVPST)(SEQ.ID.NO.1)是与细胞反应的部位(Wayner等人，J.Cell Biol.，1091321(1089)；Guan等人。Cell，6053(1990)。可识别FN上这些结合部位的受体属于由α和β亚单位非共价键结合的异二聚复合体构成的一类基因总科，其称为整合素(integrin)。普通β亚单位与特定α亚单位结合可形成具有上述特性的粘连受体。至今已克隆出八个β亚单位并已确定序列。β1亚科，也被称之为VLA科(最迟缓活化抗原)可与ECM分子和FN、胶原蛋白和昆布胺酸结合，参见Hynes.Cell，48549(1987)；Hemler，Anna，Rev.Immunol.，8365(1990)。白细胞与FN在两个间隙不同的结合区间的作用可以通过两个独立的整合素(integrin)来调节。RGD部位可被整合素α5β1识别，而EILDV(SEQ.ID.NO.2)可被α4β1识别(Pytela等人，Cell，40191(1985))；Wayner等人，J.CellBiol.1091321(1989)；Guan等人，Cell 6053(1990))。血管内皮细胞构成了血液与组织间的界面并且控制着白细胞以及血浆流入组织。在炎症部位产生的各种信号可以活化内皮细胞以及流动的血细胞并使得它们变得彼此更易粘连，此最初的粘连反应之后，白细胞进入组织以完成宿主防御功能。与白细胞-内皮细胞间反应有关的几种粘连分子已经被鉴别出。在白细胞上，现已发现，β2整合素亚科成员，包括CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18，在此过程中起着十分重要的作用。在β1亚科中，除了可与纤维结合素结合外，α4β1还可与内皮细胞上的一种称为血管细胞粘连分子(VCAM)的细胞激动素可诱导分子反应。内皮细胞上可以与白细胞结合的其它分子包括ICAM-1，ICAM-2，E-selectin and P-selectin(Carlos and Harlan，Immunol.Rev.，1141(1990)；Osborn，L.，Cell，623(1990)；Springer T.，Nature，346425(1990)；Genget al.，Nature，347757(1990)；Stoolman，L.Cell，56907(1989))。最近的数据表明整合素α4β1在炎症中起着重要作用，体外试验数据显示抗α4抗体可阻滞淋巴细胞与滑液内皮细胞粘连；此粘连作用在风显性关节炎中起着十分重要的作用(Van Dinther-Janssen)等人，J Immunol.，1474207(1991)。在对抗α4单克隆抗体阻滞嗜碱细胞和嗜酸细胞与细胞激动素活化的内皮细胞粘连的研究表明，α4在变态反应和哮喘中起着十分重要的作用(Walsh等人，J.Immunol.，1463419(1991)；Bocher等人，J.Exp.Med.，1731553(1991)。另外，体内研究发现试验性自体免疫脑脊髓炎可被抗-α4单克隆抗体阻滞(Yednock等人，Nature，35663(1992)。白细胞向炎症部位的迁移也可以被抗-α4单克隆抗体阻滞(Issikutz等人，J.Immunol.，1474178(1991))。最近在接触性过敏反应模型中发现，当给激发的纯系受体小鼠施用致敏细胞时，肽GRGDSP(SEQ.ID.NO3)或EILDV(SEQ.ID.NO2)可阻滞耳肿胀，这表明α4β1，也可能是α5β1，两者均与此炎症应答有关(Ferguson等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，888072(1991)。因而，α4β1和α5β1是控制炎症疾病的重要受体靶分子。本专利技术涉及具有细胞粘连调节剂活性的化合物，此化合物不含有氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(Arg-Gly-Asp或RGD)，即RGD三肽表位。实际上，一些此类化合物不具有RGD表位三个氨基酸的任何一个。一方面，本专利技术化合物可足以模拟细胞外基质配体或其它细胞粘连配体与细胞表面受体结合。此类受体包括整合素受体，一般包括纤维结合素、胶原蛋白、昆布胺酸、LFA-1、MAC-1、P150、P95、玻璃体结合蛋白和gpIIb/IIIa受体。现已发现，此新的化合物可通过例如与含有适宜氨基酸序列的配体竟争以及通过与细胞表面可与配体直接结合的受体结合来调节细胞粘连。通过与细胞上受体结合有效地抑制细胞粘连蛋白例如(但不仅限于)纤维结合素，以防止或减少细胞粘连。其它方面的应用还包括通过因本专利技术化合物使细胞表面附着或通过其它促进细胞粘连的方法增强细胞粘连作用。此具有实用价值的化合物在此作为细胞粘连调节剂。本专利技术的一个目的是提供一种有调节细胞粘连作用的新的化合物。本专利技术的另一个目的是提供一种能够与可调节细胞粘连的细胞上受体结合的新的不含RGD的化合物。本专利技术的另一个目的是提供一种用新的化合物调节细胞粘连的新方法。本专利技术另一个目的是提供一种可与细胞粘连分子或整合素受体结合的化合物。本专利技术的另一个目的是提供一种在调节细胞与整合素受体粘连，包括抑制细胞与纤维结合素粘连中具有显著效力的化合物。一方面，本专利技术包括在U937-纤维结合素粘连试验中测定的IC50小于约100μM的化合物；另一方面，本专利技术包括在此试验中测定的IC50小于约100μM的化合物。本专利技术还包括实现(于体外或体内)此纤维结合素受体粘连抑制作用和整合素受体粘连抑制作用的方法。在较低浓度下，用IC50低于约500μM或低于约100μM的本专利技术化合物可以达到较强的抑制作用。本专利技术还一个目的是提供一种在调节白细胞与内皮细胞粘连中具有较强效力的化合物。因此，一方面，本专利技术包括在Jurkat-内皮细胞粘连试验中测定的IC50小于200μM的化合物，另一方面，本专利技术包括在此试验中测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式化合物或其药物上可接受的盐：＊＊＊其中Ｌ↑［１］和Ｌ↑［２］分别或者一起选自Ｌｙｓ、Ｐｅｎ、Ｍｐｒ、ＡｎＢ、ＡｎＣ、β－Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄｐｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、具有适于形成Ｌ↑［１］和Ｌ↑［２］之间环桥的功能基的氨基 酸残基、氨基酸类似物和氨基酸模拟物；Ｚ为成环基团或Ｌ↑［１］和Ｌ↑［２］间的键；１可存在或不存在，当存在时，其选自Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｒｏ类似物、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、降Ｌｅｕ、降Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｄ－Ｎａｌ、 Ｓａｒ、（Ａｄａ）－Ａｌａ、ＡｎＣ、ＡｎＢ、Ｌｙｓ、ω－氨基－低级链烷酸、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ａｌａ、ＡｎＣ－ＡｎＣ、ＡｎＢ－ＡｎＢ、β－Ａｌａ、β－Ａｌａ－β－Ａｌａ、ｌ－Ｎａｌ、ＴＴＣ、ＴｃＡ、ＤＴＣ和ＭＴＣ；。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：SLN彻昂，PM卡德雷里，TJ洛勃，
申请(专利权)人：田边制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]