A群链球菌疫苗制造技术

提供在哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的方法和组合物，其包括向所述哺乳动物施用M蛋白的片段，其变体或衍生物以及SpyCEP蛋白或肽片段，或者针对所述SpyCEP蛋白或片段的抗体，以促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性。还提供了SpyCEP的免疫优势肽片段。

Group A Streptococcus vaccine

Provides methods and compositions for eliciting immune responses of group A streptococcus bacteria in a mammal, comprising administering to a mammal to the M protein fragment, variants or derivatives thereof and SpyCEP protein or peptide fragments, or for the SpyCEP protein or fragment of antibody, in order to promote the restoration or enhancement of neutrophil activity. An immunodominant peptide fragment of SpyCEP is also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】A群链球菌疫苗
本专利技术涉及感染性疾病的预防和治疗。更具体而言，本专利技术涉及用于治疗或预防A群链球菌属链球菌相关的疾病和病况的疫苗。专利技术背景由于由酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)(兰斯菲尔德A群链球菌；GAS)引起的衰弱性疾病，特别是风湿热和风湿性心脏病，长期以来一直寻求针对所述细菌的疫苗。现今，在大多数发达国家中，风湿热是一种罕见疾病，但是在发展中国家，其仍是儿童、青少年和青壮年中后天性心脏病的主要原因。此外，侵入性GAS疾病是儿童和成人中的脓毒病的常见原因且病死率高。进一步增加GAS疾病的负担的是链球菌感染后肾小球肾炎，其可能导致许多GAS流行地区的高晚期肾衰竭率。GAS咽炎和脓疱病是每年最大绝对数量的GAS感染。每年，GAS咽炎影响大约8％–15％的学龄儿童，以及GAS脓疱病是儿童中十分常见的感染，患病率为10-50％。严重的GAS相关疾病不仅是发展中国家的问题，而且甚至是发达国家的问题，具体地，已出现了有毒的GAS菌株，其对标准的抗生素疗法具有抗性且引起衰弱性疾病，如严重的坏死性筋膜炎。GAS的重要毒力因子是M蛋白，其强烈地抗吞噬且与血清H因子结合，破坏C3-转化酶并通过C3b阻止调理作用。已开发出了含有来自M蛋白的保守C重复部分的免疫原性肽，如来自C重复区域的T细胞和B细胞表位的疫苗，或者含有来自该C重复区域的单一最小的B细胞表位的J8和J14肽疫苗。专利技术概述意外地，本专利技术的专利技术人发现，J8-肽诱导的对A群链球菌的免疫的重要因素是嗜中性粒细胞的活性。虽然体外的调理作用分析使用全血作为嗜中性粒细胞和补体的来源，但是体内保护需要嗜中性粒细胞是未知的。而且，调理作用分析显示了CFU的相对适度减少(通常少于10倍)，而J8在体内诱导的保护可以导致细菌生物负载的数个对数级的减少。更具体而言，目前，专利技术人发现，嗜中性粒细胞抑制剂(如使嗜中性粒细胞趋化性物质白介素8失活的SpyCEP)在诱导对A群链球菌的免疫方面针对J8起作用。以广泛的形式来说，本专利技术因而涉及恢复或增强嗜中性粒细胞的活性，从而帮助M蛋白诱导的对A群链球菌的免疫。本专利技术的一个方面提供在哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的方法，所述方法包括向哺乳动物施用M蛋白的片段、其变体或衍生物；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质；从而在哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的步骤。本专利技术的另一方面提供使哺乳动物对A群链球菌细菌免疫的方法，所述方法包括向哺乳动物施用M蛋白，其片段、变体或衍生物；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质，从而使哺乳动物对A群链球菌细菌免疫的步骤。而本专利技术的另一方面提供治疗或预防哺乳动物中的A群链球菌细菌感染的方法，所述方法包括向哺乳动物施用M蛋白的片段，其变体或衍生物，或者它们的抗体或抗体片段；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质；从而治疗或预防哺乳动物中的A群链球菌细菌感染的步骤。本专利技术的又一方面提供适合于向哺乳动物施用的组合物，所述组合物包含：M蛋白的片段、其变体或衍生物，或者它们的抗体或抗体片段；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质。本专利技术的相关方面提供编码M蛋白的片段、其变体或衍生物以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质的一种或多种分离的核酸的施用，或者包含所述一种或多种分离的核酸的组合物的施用。在具体实施方案中，M蛋白的片段是M蛋白的保守区域或者包含M蛋白的保守区域。在一个实施方案中，所述片段是包含p145肽的免疫原性片段，或者包含于p145肽内的免疫原性片段。在具体实施方案中，免疫原性片段在J8肽或其变体内，或者包含J8肽或其变体。在某些实施方案中，所述变体包含选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体，基本上由选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体组成，由选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体组成：SREAKKQSREAKKQVEKALKQVEKALC(SEQIDNO:59)；SREAKKQSREAKKQVEKALKQSREAKC(SEQIDNO:60)；SREAKKQVEKALKQSREAKKQVEKALC(SEQIDNO:61)；以及SREAKKQVEKALDASREAKKQVEKALC(SEQIDNO:62)。在一个宽泛的实施方案中，促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质是通常直接或间接地抑制或阻抑嗜中性粒细胞或嗜中性粒细胞活性的蛋白或其片段。适当地，所述蛋白或其片段的施用引发对所述蛋白和/或对A群链球菌的免疫应答。在另一宽泛的实施方案中，促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质是与通常直接或间接地抑制或阻抑嗜中性粒细胞或嗜中性粒细胞活性的蛋白或其片段结合的抗体或抗体片段。在具体实施方案中，所述蛋白是SpyCEP或其片段。在优选的实施方案中，所述片段包含氨基酸序列NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:18)。本专利技术的另一其它方面提供分离的肽，其包含选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体，基本上由选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体组成，由选自以下的氨基酸序列或者其片段或变体组成：NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:18)；SREAKKQSREAKKQVEKALKQVEKALC(SEQIDNO:59)；SREAKKQSREAKKQVEKALKQSREAKC(SEQIDNO:60)；SREAKKQVEKALKQSREAKKQVEKALC(SEQIDNO:61)；以及SREAKKQVEKALDASREAKKQVEKALC(SEQIDNO:62)。相关方面提供编码上述方面的分离的肽的分离的核酸，包含所述分离的核酸的遗传构建体和/或包含所述遗传构建体的宿主细胞。又一相关方面提供抗体或抗体片段，其与上述方面的分离的肽结合，或者由上述方面的分离的肽诱发。本专利技术的又一方面提供包含前面方面的分离的肽、分离的核酸、遗传构建体、宿主细胞和/或抗体或抗体片段的组合物。本文使用的不定冠词‘一个/一种(a)’和‘一个/一种(an)’在此用来指或者涵盖单数或复数的元素或特征，并且不应当被认为意指或限定“一个/一种(one)”或“单个/单种(single)”元素或特征。除非上下文另有要求，术语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”或者类似的术语旨在意指非排他性的包含，以使元素或特征的所述列表不仅仅包括那些规定或列出的元素，而且可以包括未列出或规定的其它元素或特征。在氨基酸序列的背景中，通过“基本上由…组成”，意指所叙述的氨基酸序列以及位于N-端或C-端的另外一个、两个或三个氨基酸。附图简述图1：J8-DT/Alum疫苗接种的保护功效。图2：J8-DT介导的免疫中的嗜中性粒细胞。E：表皮；D：真皮；SC：皮下层(sub-cutlayer)图3：嗜中性粒细胞的耗竭和J8-DT疫苗接种的功效。图4：CovR/S突变体GAS的M1T1分离物中升高的基因表达的概览。图5：J8-DT保护免受5448AP的功效。图6：不同GAS菌株对IL-8的降解。图7：不同GAS菌株对MIP-2的降解。图8：不同GAS菌株对KC的降解。图9：不同GAS分离物对趋化因子的趋化能力的影响。图10：通过用J8-DT-rSpyC本文档来自技高网...

【技术保护点】
在哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用M蛋白的片段、其变体或衍生物；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质，从而在所述哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.15 AU 2014901382;2014.08.06 AU 2014903042;1.在哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用M蛋白的片段、其变体或衍生物；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质，从而在所述哺乳动物中引发对A群链球菌细菌的免疫应答的步骤。2.使哺乳动物对A群链球菌细菌免疫的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用M蛋白的片段、其变体或衍生物；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质，从而使所述哺乳动物对A群链球菌细菌免疫的步骤。3.治疗或预防哺乳动物中的A群链球菌细菌感染的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用M蛋白、其片段，变体或衍生物，或者它们的抗体或抗体片段；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质，从而治疗或预防所述哺乳动物中的A群链球菌细菌感染的步骤。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其包括施用编码M蛋白的片段、其变体或衍生物以及编码促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质的一种或多种分离的核酸，或者包含所述一种或多种分离的核酸的组合物。5.适合于向哺乳动物施用的组合物，所述组合物包含M蛋白的片段、其变体或衍生物，或者它们的抗体或抗体片段；以及促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质。6.如权利要求5所述的组合物，其包含编码所述M蛋白的片段、其变体或衍生物以及编码所述促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质的一种或多种分离的核酸，或者包含所述一种或多种分离的核酸的组合物。7.如权利要求1至4中任一项所述的方法或者权利要求5或6所述的组合物，其中所述促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质是蛋白或其片段，所述蛋白或其片段通常直接或间接地抑制或阻抑嗜中性粒细胞或嗜中性粒细胞活性。8.如权利要求1至4中任一项所述的方法或者权利要求5或6所述的组合物，其中所述促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的物质是抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段与通常直接或间接地抑制或阻抑嗜中性粒细胞或嗜中性粒细胞活性的蛋白或其片段结合。9.如权利要求7或8所述的方法或组合物，其中所述嗜中性粒细胞活性为嗜中性粒细胞的趋化性。10.如权利要求9所述的方法或组合物，其中所述蛋白是使白介素8蛋白水解失活的蛋白酶或其片段。11.如权利要求10所述的方法或组合物，其中所述蛋白酶是SpyCEP。12.如权利要求11所述的方法或组合物，其中SpyCEP的片段包含氨基酸序列NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:18)或与SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的变体，基本上由氨基酸序列NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:18)或与SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的变体组成，或者由氨基酸序列NSDNIKENQFEDF...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛妮莎·潘迪，迈克尔·巴茨洛夫，迈克尔·戈德，
申请(专利权)人：格里菲斯大学，
类型：发明
国别省市：澳大利亚,AU