白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种抑制白细胞的细胞外诱捕网形成的新型药剂。本发明专利技术提供一种包含乳铁蛋白片段的白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂、以及包含乳铁蛋白的用于治疗与白细胞的细胞外诱捕网形成相关的疾病的组合物。

An inhibitor of the formation of an extracellular network of leukocytes

The object of the present invention is to provide a novel medicament for inhibiting the formation of an extracellular trapping network of leukocytes. The present invention provides extracellular traps a white blood cell containing lactoferrin fragment formation inhibitor, and contains the composition for extracellular traps formed related diseases and treatment of white blood cells of lactoferrin.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂
本专利技术涉及以类似乳铁蛋白(lactoferrin)的肽片段为有效成分的白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂以及用于治疗与白细胞的细胞外诱捕网形成相关的疾病的组合物。另外，本专利技术涉及一种使用所述抑制剂或组合物治疗与白细胞的细胞外诱捕网形成相关的疾病的方法。
技术介绍
中性粒细胞胞外诱捕网(NeutrophilExtracellularTraps，NETs)是一种细胞外结构，因细菌感染而引起中性粒细胞被激活，分叶核的形态、染色质的分布变得不清晰，然后核膜消失，染色质结构中混合有细胞质、颗粒成分，细胞膜破裂，此时，所述中性粒细胞胞外诱捕网释放网状结构，捕获细菌、真菌、寄生虫、病毒，发挥抗菌作用。NETs以DNA为中心，组蛋白3(H3)、弹性蛋白酶在上述作用中发挥重要作用。NETs形成使得有效杀死微生物的抗菌分子聚集在局部。由于产生NETs，所以导致中性粒细胞死亡(NETosis)，但其分子机制尚不明确，因肿瘤坏死因子-α(TumorNecrosisFactor-α，TNF-α)、丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)、脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)、白介素-8(Interleukin-8，IL-8)等的刺激而产生，此时产生的细胞死亡表现出与经典的坏死或产生半胱氨酸蛋白酶(caspase)的激活、DNA片段化这样的情况的细胞凋亡(Apoptosis)不同的方式。若中性粒细胞被LPS、PMA刺激，则产生自噬，同时，生成活性氧。由此，产生核膜破裂、染色质解凝缩、组蛋白瓜氨酸化，引起细胞死亡(非专利文献1和2)。已报告了随着NETs的形成，中性粒细胞通过脱颗粒分泌大量蛋白质，特别是嗜苯胺蓝颗粒、第二颗粒中含有的抗菌蛋白质，也分泌与细胞结构相关的蛋白质等(非专利文献2)。这些蛋白质也被称为NETs结构蛋白质，已报告了中性粒细胞弹性蛋白酶、组蛋白、髓过氧化物酶、F-肌动蛋白、乳铁蛋白、基质金属蛋白酶9、LL37、组织蛋白酶G、杀菌/渗透性增加蛋白(Baetericidal/PermeabilityIncreasingprotein，BPI)、蛋白酶3、钙卫蛋白、天青杀素(azurocidin)、溶菌酶C、防御素、过氧化氢酶等(非专利文献3)。对于乳铁蛋白而言，其被包含在中性粒细胞的第二颗粒中，中性粒细胞形成NETs，最终脱颗粒，释放到周围(非专利参考文献1)。对于乳铁蛋白而言，在哺乳动物中保存良好，其在功能上没有明显物种差异。另外，目前作为牛乳成分的蛋白质，其生理活性受到关注，在市场上有售。然而，已报告了牛乳对牛的中性粒细胞的NETs形成未表现出抑制效果(非专利文献4)。NETs也参与血栓的增大、成长，释放NETs后，其中含有的组蛋白具有使血小板凝缩的作用，基于NETs形成血小板血栓。另外，NETs中含有的中性粒细胞弹性蛋白酶、组织蛋白酶G使组织因子途径抑制因子分解，促进血液凝固反应。通过上述作用也表现出将微生物等限定在局部的作用(非专利文献5)。NETs本来的作用是捕捉革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌等外来微生物并限制在局部，进行杀菌。由于具有这种作用，所以在感染病中常见，但也有报告称随着感染病等转为慢性，即使在不存在外来微生物的情况下也观察到NETs的形成。众所周知的是，作为慢性且难治性的自身免疫性疾病之一的系统性红斑狼疮(SystemicLupusErythematosus，SLE)形成了针对自身DNA、相关蛋白质的自身抗体，由此，在组织、脏器中引发炎症。SLE的特征观察结果显示在损伤部位存在大量中性粒细胞。已知在SLE患者的血清中存在抗菌肽LL37和NETs中的DNA(非专利文献6和7)。这些DNA作为自身抗原被B细胞识别而产生自身抗体。另外，SLE患者的中性粒细胞比健康人的中性粒细胞更容易引起NETosis(非专利文献6)。认为这些主要因素会诱发慢性炎症。另外，已报告了在作为因自身抗体导致的疾病的抗中性粒细胞细胞质抗体(Anti-NeutrophilCytoplasmicAntibody，ANCA)相关血管炎中，与健康人的免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG，IgG)组分相比，患者血清中的IgG组分形成中性粒细胞NETs的能力约高两倍(非专利文献8和9)。自2004年Brinkman等报告(非专利文献1)以来，NETs的形成与疾病的相关性最近才受到关注，将来，因NETs的形成而导致的新疾病可能会变得明确。如此地，NETs的形成在生物体的感染防御中发挥重要的作用，但根据病情，考虑到病情的改善需要抑制NETs的形成的情况。已报告了作为抑制NETs形成的物质，肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性球菌的链球菌在菌体外使脱氧核糖核酸酶(DNase)表达以使释放的DNA网分解。另外，作为针对组蛋白的抗体、抑制超氧化物产生的物质，已报告了二亚苯基烟碱氯化物(DiphenyleneIodoniumChloride，DPI)、过氧化氢酶(非专利文献10)。除此以外，已知髓过氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)活性影响NETosis(非专利文献11)，中性粒细胞形成NETs而出现细胞死亡的现象即NETosis是与细胞凋亡、坏死不同的过程(非专利文献10)等。存在以来自乳的碱性蛋白质组分为有效成分预防I型糖尿病、类风湿关节炎的自身免疫性疾病的现有技术(专利文献1)，但其特别指明了调节以淋巴细胞为中心的免疫细胞、抑制炎性细胞因子等内容，而与抑制NETs形成的作用无关。目前，尚未报告治疗因NETs的形成而导致的疾病的药剂。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2008-189637。非专利文献非专利文献1：VolkerBrinkmann等，2004Science，303：1532-1535；非专利文献2：QRemijsen等，2011，CellDeathandDifferentiation，18：581-588；非专利文献3：MarenvonKoeckritz-Blickwede等，2008，Blood，111：3070-3080；非专利文献4：JohnD.Lippolis等，2006，VeterinaryImmunologyandImmunopathology，113：248-255；非专利文献5：FuchsTA等，2010，ProcNatlAcadSciUSA，107：15880-15885；非专利文献6：Garcia-RomoGS等，2011SciTranslMed，3：73ra20；非专利文献7：LandeR等，2011SciTranslMed，3：73ra19；非专利文献8：KessenbrockK等，2009，NatMed，6：623-625；非专利文献9：BoschX，2009，JAmSocNephrol，8：1654-1656；非专利文献10：TobiasA.Fuchs等，2007，JCellBiol，176：231-241；非专利文献11：K.Akong-Moore等，2012，PLOSONE，7：e42984；非专利文献12：内藤真等，2010，生物试样分析，33：329-338。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种因白细胞的细胞外诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂，其包含作为有效成分的含有由X1‑K‑C‑X2‑X3‑X4‑Q‑X5‑X6‑X7‑X8‑X9表示的氨基酸序列的肽，在所述氨基酸序列中，X1＝S、T、F、A、K、E或Q；X2＝R、F、S、Y、A或L；X3＝Q、R、K或M；X4＝W或F；X5＝R、W、V、N、S或E；X6＝R、N、E、K或M；X7＝M、L或I；X8＝R、K或N；X9＝K或R。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.08 JP 2014-2074151.一种白细胞的细胞外诱捕网形成抑制剂，其包含作为有效成分的含有由X1-K-C-X2-X3-X4-Q-X5-X6-X7-X8-X9表示的氨基酸序列的肽，在所述氨基酸序列中，X1＝S、T、F、A、K、E或Q；X2＝R、F、S、Y、A或L；X3＝Q、R、K或M；X4＝W或F；X5＝R、W、V、N、S或E；X6＝R、N、E、K或M；X7＝M、L或I；X8＝R、K或N；X9＝K或R。2.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X1＝S或T。3.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X2＝R、F、S、Y或A。4.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X3＝Q、R或K。5.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X4＝W。6.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X5＝R。7.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X6＝R或N。8.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X7＝M或L。9.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X8＝R或K。10.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X9＝K。11.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X1＝S。12.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X3＝Q。13.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X7＝M。14.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在所述氨基酸序列中，X8＝R。15.如权利要求1所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在残基X1的N末端侧还含有残基X0，X0＝A、M、W、G、S、E或Y。16.如权利要求15所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，X0＝A。17.如权利要求1～16中任一项所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，在残基X9的C末端侧还含有氨基酸序列X10-X11-X12-P-X13-X14-X15-C-X16-X17-X18-X19-X20，在所述氨基酸序列中，X10＝V、L、T或A；X11＝G、R或N；X12＝G、A或V；X13＝S、P、I或L；X14＝V、I、L或M；X15＝S、T、F或R；X16＝I、V、T或A；X17＝R或K；X18＝R或K；X19＝A、T、D、S或Y；X20＝S或F。18.如权利要求1～14中任一项所述的细胞外诱捕网形成抑制剂，其中，所述肽由选自由序列号6～16所示的各氨基酸序列组成的组中的任意一个氨基酸序列构成。19.如权利要求1～18中任一项所述的抑制剂，其中，将所述肽制备成0.001～10g/kg/天的量。20.如权利要求1～19中任一项所述的抑制剂，其中，所述白细胞是选自由中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞组成的组中的任意一种。21.如权利要求1～20中任一项所述的抑制剂，其中，所述白细胞为中性粒细胞。22.一种用于治疗白细胞的细胞外诱捕网形成相关疾病的组合物，其包含作为有效成分的含有由X1-K-C-X2-X3-X4-Q-X5-X6-X7-X8-X9表示的氨基酸序列的肽，在所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：川上浩，平桥淳一，大久保光修，加贺谷伸治，
申请(专利权)人：学校法人庆应义塾，NRL制药股份有限公司，川上浩，
类型：发明
国别省市：日本,JP