能诱导对HIV免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗AIDS的药物制造技术

一种作为ＨＩＶ全蛋白片断的肽，该片断为含有８－１１个氨基酸的连续序列的肽，相当于与ＨＬＡ结合的基序，能与ＨＬＡ实际结合且能诱导以ＨＩＶ感染细胞为靶细胞的杀伤细胞。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是关于一种含有人类免疫缺陷病毒(Human Immunode-ficiency Virus，以下略为HIV)蛋白的部分区域的氨基酸序列且能诱导对HIV免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗AIDS的药物。众所周知，获得性免疫缺陷综合症(Acquired ImmunodeficiencyDisease Syndrome，以下略为AIDS)是因感染HIV而引起的疾病。人们正积极地研究开发治疗这种疾病的药物，叠氮脱氧胸苷(以下略为AZT)、双脱氧肌苷(以下略为DDI)等药物已在实际中应用，但存在疗效及副作用等问题，还没有发现能彻底治疗由感染HIV引起的疾病的药物，前景也难以预测。另一方面，通过增加对HIV的免疫抵抗力预防HIV感染和抑制AIDS发病的疫苗，作为可望防止这种疾病在世界范围内的迅速蔓延的最后手段，正在被广泛地研究。至今已设计出多种类型的疫苗，部分疫苗进入了临床试验，但还没有发现实际应用中被证实对人有效的预防感染或抑制发病的疫苗。迄今为止，已知的疫苗种类有i)采用灭活或减毒病毒颗粒的疫苗已知有引起与HIV病原性相关的基因突变而致缺失的方法(Droc.Natl.Acad.Sci.USA，841434(1987))、应用与HIV有共同的抗原性的猴子等的类似病毒的方法(Science，232，238，(1987))，但因有潜在的危险而不容易实用。ii)采用病毒部分抗原蛋白的亚单位疫苗用基因重组的方法等生产只含有病毒颗粒的部分抗原蛋白作为免疫原的方法(Droc.Natl.Acad.Sci USA，84，6924，(1987)、Ann.Int.Med.，114 119，1991)、(Nature，355，728(1992))。这是最广泛尝试的方法，临床试验的例子也多。但是存在诸如中和抗体滴度不升高、抗体滴度的持续时间等应该解决的问题。还有这种方法增强产生抗体等的体液免疫的效果，很难与杀伤感染细胞的细胞免疫的激活相关联，从HIV的感染方式看单纯应用这种方法未必对预防感染有效。iii)牛痘病毒及BCG菌等的重组活疫苗将取自HIV的部分基因序列整合到可在人体细胞内增殖的牛痘病毒及BCG菌等的基因中使其表达理论上可望有增强细胞免疫的效果。问题在于对于免疫力低下的患者即使是通常无害的牛痘病毒也有引起严重感染的可能以及至少迄今为止研制出来的牛痘重组活疫苗都没能引起充分的免疫应答等。iv)抗个体遗传型抗体有报告关于不采用病毒抗原而以抗个体遣传型抗体为免疫原的方法(Proc.Natl.Acad Sci.USA，89 2546，(1992))。v)合成肽疫苗对化学合成中和抗体的决定区域的肽序列等进行了研究，特别是包被糖蛋白gp120的V3区域是主要的中和决定区域，正在进行以合成的V3区肽作为疫苗的尝试(Proc Natl.Acad.Sci，USA，86，6768，(1989))。关于这些疫苗的研究开发情况记载于高桥秀实，《实验医学》11卷655—8661页(1993)；奥田研尔山川正，《临床上微生物》20卷55—62页；A.T.Profy，BIOmedica8卷133—139页等处。上述至今为止的对疫苗的研究开发以通过诱导产生中和抗体来增强体液免疫的类型为主。但是与HIV作为自由的病毒颗粒相比，它更容易靠感染的细胞与未感染的细胞的融合传播。因此，依靠杀伤感染细胞的细胞毒性T细胞(cytotoxic T Cell，以下略为CTL)的细胞免疫比依靠中和抗体的体液免疫在防御感染上更重要。实际上，通过调查那些有感染HIV的机会但感染未成立的个体，常常在血液中检测不到抗体而存在CTL，因此有人报告早期诱导CTL对于预防感染很重要(J.Infec.Dis.，164，178，(1992))。所以本专利技术的专利技术者们研究了能诱导特异地杀伤HIV感染的细胞的CTL的肽，旨在于以此治疗或预防AIDS。为了有效地诱导针对HIV感染细胞的CTL，鉴定CTL能识别的抗原决定部位并把它应用到疫苗中是极重要的。至今为止采用的方法是首先建立特异的针对HIV的CTL克隆，然后鉴定这种CTL克隆识别的抗原决定部位(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85，3105，(1988))。采用这种方法通过众多的人白血球抗原(以下略为HLA)I类抗原来鉴定提呈给CTL的HIV抗原决定部位，这需要合成大量的肽，要花费大量的时间和费用，因此抗原决定部位的鉴定也没有进行。CTL通过靶细胞表面表达的主要组织相容性抗原复合体(以下略为MHC)I类抗原识别抗原提呈的抗原决定肽，攻击靶细胞，但最近已证实，在特异的MHCI类抗原上结合的被抗原提示的抗原决定肽是一种大致9链长的肽，其氨基酸序列有一定的规律性(mo-tif)(Nature，351，290，(1991)、Eur.J.Immunol.，22，2453，(1992)、Nature，353，326，(1991)、Nature，360 434，(1992)、Immunogenet-ics，38，161，(1993))。本专利技术的目的在于提供能诱导对HIV免疫应答的肽。本专利技术的目的也在于提供编码上述肽的DNA。本专利技术的目的还在于提供含有上述肽的预防治疗AIDS的药物。本专利技术的目的还在于提供能诱导对HIV免疫应答的肽的选取方法。下述记载会使本专利技术的上述及其他目的更清楚。本专利技术从可能与各种HLAI类抗原结合的自身抗原肽的基序(motif)推定可能与HLAI类抗原结合的HIV肽并合成推定的HIV肽。转化细胞表层存在大量未被肽结合的表达的HLAI类抗原。选择与大量表达在其表层的HLAI类抗原实际结合的肽。然后从选出的肽中得到与HLAI类抗原结合并能刺激患者末梢血淋巴细胞从而诱导CTL的该合成肽，将其用于预防、治疗AIDS。本专利技术是基于上述发现完成的。即本专利技术提供的肽是HIV全部蛋白的片断、该片断含有8—11个氨基酸的连续序列、相当于与HLA结合的基序、实际与HLA结合并能诱导以HIV感染细胞为靶细胞的杀伤细胞。本专利技术也提供编码上述肽的DNA。本专利技术还提供含有上述肽及医药上允许的载体和/或稀释剂的预防、治疗AIDS的药物。本专利技术还提供选取能诱导以感染HIV细胞为靶细胞的杀伤细胞的肽的方法。其特征是合成属于HIV全部蛋白的片断、含有8—11个连续序列的氨基酸、相当于与HLA结合的基序的肽。从合成的肽中选出与HLA实际结合的肽，然后从中选出与HLAI类抗原结合并能刺激HIV疾病患者的末梢淋巴细胞从而诱导杀伤细胞的肽。 附图说明图1所示为RMA—S—B*3501细胞上HLA—B*3501抗原表达水平的变化。图中△指与HLA—B*3501抗原有结合性的自身抗原肽28H(LPGPKFLQY)、○指37F(LPFDFTPGY)、□指加入无结合活性的肽MP～1(KGILGKVFTLTV)的HLA—B*3501表达水平的变化。图2所示为使用HIV(B35)—16作为肽时的特异细胞杀伤活性。图中●指标记靶细胞为T2—B*—3501细胞、○指标记靶细胞为T2细胞，作为对照。用肽刺激培养的患者末梢淋巴细胞采用3种不同数量的细胞计数1×105，2.5×104，或者6.25×103。图中所示特异的细胞杀伤活性值是细胞数1×105个时的结果。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：滝口雅文，三轮清志，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：