改善的T细胞组合物制造技术

本发明专利技术提供改善的T细胞组合物以及制备T细胞的方法。更具体而言，本发明专利技术提供导致在体内具有改善的存活、扩增和持续的过继性T细胞免疫疗法的T细胞制备方法。

Improved T cell composition

The present invention provides improved T cell compositions and methods of making T cells. More specifically, the present invention provides a T cell preparation method that results in improved survival, amplification, and sustained adoptive T cell immunotherapy in vivo.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改善的T细胞组合物相关申请的交叉引用本申请基于35U.S.C.§119(e)要求于2014年6月6日提交的美国临时申请第62/008,957号的权益，将其通过引用整体并入本文。背景
本专利技术涉及改善的T细胞组合物以及用于制备T细胞的方法。更具体而言，本专利技术涉及导致在体内具有改善的存活、扩增和持续的过继性T细胞免疫疗法的T细胞制备方法。相关技术的描述过继性免疫疗法是将T淋巴细胞转移至对象，用于疾病的治疗。过继性免疫疗法尚未发挥其治疗多种疾病的潜能，所述疾病包括癌症、感染性疾病、自身免疫病、炎症性疾病和免疫缺陷。然而，大多数(即使不是全部)过继性免疫疗法策略需要T细胞的活化和扩增步骤以产生临床有效的治疗剂量的T细胞。用于产生治疗剂量的T细胞(包括工程化的T细胞)的当前技术仍然受繁琐的T细胞制备方法限制。例如，T细胞的扩增通常需要劳动密集且昂贵的克隆和/或多轮活化/扩增以实现治疗相关的T细胞数。此外，既有的T细胞的活化/扩增方法通常伴有大量的T细胞分化，并且通常导致转移的T细胞具有短期效果，包括短期存活、缺乏持续性以及缺乏体内扩增。因此，既有的T细胞制备方法产生易于耗尽且丧失效应免疫细胞功能的较差的T细胞产物。迄今为止，工程化的T细胞过继性免疫疗法的临床功效受输注回患者之后不良的T细胞扩增和持续的限制。因此，此类疗法不适用于广泛的临床应用。因此，对于改善T细胞的制备以及在体内存活、扩增和持续的治疗性T细胞组合物，存在持续、未满足的需求。概述本专利技术通常提供包含持续且强有力的抗肿瘤T细胞组合物的过继性T细胞免疫疗法以及制备所述组合物的方法。本专利技术涉及改善的T细胞组合物以及制备T细胞的方法。更具体而言，本专利技术涉及导致在体内具有改善的存活、扩增和持续的T细胞制备方法。在不同的实施方案中，提供制备T细胞的方法，所述方法包括：(a)从对象中分离T细胞群，例如，肿瘤浸润细胞毒性T淋巴细胞(TIL)；(b)活化所述T细胞群并刺激所述T细胞群增殖，其中所述活化和刺激步骤在存在AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行；(c)将T细胞培养增殖；其中与在不存在所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的T细胞的增殖相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行的活化和刺激步骤导致维持T细胞的增殖。在不同的实施方案中，提供制备T细胞的方法，所述方法包括：(a)活化T细胞群，并刺激所述T细胞群增殖，其中所述活化和刺激步骤在存在AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行；(b)用包含工程化T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的病毒载体转导T细胞；(c)将转导的T细胞培养增殖；其中与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的转导的T细胞的增殖相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行活化和刺激步骤导致维持转导的T细胞的增殖。在具体实施方案中，本文所考虑的方法包括分离外周血单个核细胞作为T细胞的来源。在某些实施方案中，T细胞的活化包括使所述T细胞与抗CD3抗体或其CD3结合片段接触。在另外的实施方案中，T细胞的刺激包括使所述T细胞与抗CD28抗体或其CD28结合片段、B7-1或其CD28结合片段或者B7-2或其CD28结合片段接触。在一些实施方案中，在T细胞增殖之前用病毒载体转导细胞。在某些实施方案中，在T细胞增殖之后用病毒载体转导细胞。在具体实施方案中，载体是逆转录病毒载体。在其它实施方案中，载体是慢病毒载体。在其它具体实施方案中，细胞包含嵌合抗原受体(CAR)。在具体实施方案中，CAR包含：胞外结构域、跨膜结构域、一个或多个胞内共刺激信号转导结构域以及CD3ζ信号转导结构域，所述胞外结构域与选自以下的抗原结合：α叶酸受体、5T4、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、CMV、EBV、EGFR、包括ErbB2(HER2)的EGFR家族、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、EphA2、EpCAM、FAP、胎儿型AchR、FRα、GD2、GD3、磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A2+MAGE1、HLA-A3+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、HLA-A2+NY-ESO-1、HLA-A3+NY-ESO-1、HPV、IL-11Rα、IL-13Rα2、λ、Lewis-Y、κ、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSCA、PSMA、ROR1、SSX、生存素、TAG72、TEM和VEGFR2；所述跨膜结构域来源于选自以下的多肽：CD8α；CD4、CD28、CD45、PD-1和CD152；所述一个或多个胞内共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD54(ICAM)、CD134(OX40)、CD137(41BB)、CD152(CTLA4)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)和CD278(ICOS)。在另外的实施方案中，胞外结构域包含与抗原结合的抗体或抗原结合片段。在某些实施方案中，跨膜结构域源自CD8α或CD28。在其它实施方案中，一个或多个共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD134和CD137。在另外的实施方案中，CAR包含铰链区多肽。在具体实施方案中，铰链区多肽包含IgG1或CD8α的铰链区。在具体实施方案中，CAR包含信号肽。在一些实施方案中，信号肽包含IgG1重链信号多肽或CD8α信号多肽。在一些实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂选自：BEZ235、LY294002、GDC-0941、BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101、IPI-145、MK-2206、GSK690693、GDC-0068、A-674563、CCT128930、AZD8055、INK128、雷帕霉素、PF-04691502、依维莫司、BI-D1870、H89、PF-4708671、FMK、AT7867、NU7441、PI-103、NU7026、PIK-75、ZSTK474和PP-121。在具体实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自BEZ235、LY294002和GDC-0941的pan-PI3K抑制剂。在其它具体实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101和IPI-145的选择性PI3K抑制剂。在其它具体实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是PI3K抑制剂ZSTK474。在具体实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自MK-2206、GSK690693和GDC-0068的pan-AKT抑制剂。在另外的实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选择性AKT1抑制剂A-674563。在某些实施方案中，PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选择性AK本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备T细胞的方法，其包括：(a)活化T细胞群并刺激所述T细胞群增殖，其中活化和刺激步骤在存在AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行；(b)用包含工程化的T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的病毒载体转导所述T细胞；(c)培养转导的T细胞以进行增殖；其中，与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的转导的T细胞的增殖相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行的活化和刺激步骤导致维持转导的T细胞的增殖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.06 US 62/008,9571.制备T细胞的方法，其包括：(a)活化T细胞群并刺激所述T细胞群增殖，其中活化和刺激步骤在存在AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行；(b)用包含工程化的T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的病毒载体转导所述T细胞；(c)培养转导的T细胞以进行增殖；其中，与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的转导的T细胞的增殖相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下进行的活化和刺激步骤导致维持转导的T细胞的增殖。2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括分离外周血单个核细胞作为T细胞的来源。3.如权利要求1所述的方法，其中T细胞的活化包括使所述T细胞与抗CD3抗体或其CD3结合片段接触。4.如权利要求1所述的方法，其中T细胞的刺激包括使所述T细胞与抗CD28抗体或其CD28结合片段、B7-1或其CD28结合片段或者B7-2或其CD28结合片段接触。5.如权利要求1所述的方法，其中在T细胞增殖之前用所述病毒载体转导所述细胞。6.如权利要求1所述的方法，其中在T细胞增殖之后，用所述病毒载体转导所述细胞。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述载体是逆转录病毒载体。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体。9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述细胞包含嵌合抗原受体(CAR)。10.如权利要求9所述的方法，其中所述CAR包含a)胞外结构域，所述胞外结构域与选自以下的抗原结合：α叶酸受体、5T4、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、EGFR、包括ErbB2(HER2)的EGFR家族、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、EphA2、EpCAM、FAP、胎儿型AchR、FRα、GD2、GD3、磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A2+MAGE1、HLA-A3+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、HLA-A2+NY-ESO-1、HLA-A3+NY-ESO-1、IL-11Rα、IL-13Rα2、λ、Lewis-Y、κ、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSCA、PSMA、ROR1、SSX、生存素、TAG72、TEM和VEGFR2；b)跨膜结构域，所述跨膜结构域来源于选自以下的多肽：CD8α；CD4、CD28、CD45、PD-1和CD152；c)一个或多个胞内共刺激信号转导结构域，其选自：CD28、CD54(ICAM)、CD134(OX40)、CD137(41BB)、CD152(CTLA4)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)和CD278(ICOS)；以及d)CD3ζ信号转导结构域。11.如权利要求10所述的方法，其中所述胞外结构域包含与所述抗原结合的抗体或抗原结合片段。12.如权利要求10所述的方法，其中所述跨膜结构域源自CD8α或CD28。13.如权利要求10所述的方法，其中所述一个或多个共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD134和CD137。14.如权利要求10所述的方法，其还包含铰链区多肽。15.如权利要求14所述的方法，其中所述铰链区多肽包含IgG1或CD8α的铰链区。16.如权利要求10所述的方法，其还包含信号肽。17.如权利要求16所述的方法，其中所述信号肽包含IgG1重链信号多肽或CD8α信号多肽。18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂选自：BEZ235、LY294002、GDC-0941、BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101、IPI-145、MK-2206、GSK690693、GDC-0068、A-674563、CCT128930、AZD8055、INK128、雷帕霉素、PF-04691502、依维莫司、BI-D1870、H89、PF-4708671、FMK、AT7867、NU7441、PI-103、NU7026、PIK-75、ZSTK474和PP-121。19.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自BEZ235、LY294002和GDC-0941的pan-PI3K抑制剂。20.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101和IPI-145的选择性PI3K抑制剂。21.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是PI3-K抑制剂ZSTK474。22.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自MK-2206、GSK690693和GDC-0068的pan-AKT抑制剂。23.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选择性AKT1抑制剂A-674563。24.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选择性AKT2抑制剂CCT128930。25.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂抑制DNA-PK激活AKT。26.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂抑制PDK-1激活AKT。27.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂抑制mTORC2激活AKT。28.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂抑制HSP激活AKT。29.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自AZD8055、INK128和雷帕霉素的pan-mTOR抑制剂。30.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自PF-04691502和依维莫司的选择性mTORC1抑制剂。31.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自BI-D1870、H89、PF-4708671、FMK和AT7867的s6激酶抑制剂。32.如权利要求18所述的方法，其中所述PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂是选自NU7441、PI-103、NU7026、PIK-75和PP-121的DNA-PK抑制剂。33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的T细胞群相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的T细胞群具有增加数目的表达一种或多种标志物的T细胞，所述一种或多种标志物选自：CD62L、CCR7、CD28、CD27、CD122和CD127。34.如权利要求33中任一项所述的方法，其中与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的T细胞群相比，在存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下活化和刺激的T细胞群不表达CD57或KLRG1或者表达较少的CD57或KLRG1。35.维持表达工程化的TCR或CAR的再刺激的T细胞的增殖并减少其分化的方法，所述方法包括：(a)使包含工程化的TCR或CAR的增殖的T细胞群全部或部分与抗CD3抗体或其CD3结合片段和抗CD28抗体或其CD28结合片段接触，所述抗CD28抗体或其CD28结合片段刺激所述T细胞表面上的CD28辅助分子，从而再刺激活化的T细胞增殖；其中与在不存在PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂的情况下刺激或再刺激的T细胞的增殖相比，再刺激的T细胞具有维持的增殖和减少的分化。36.如权利要求35所述的方法，其中所述细胞包含工程化的TCR。37.如权利要求35所述的方法，其中所述细胞包含CAR。38.如权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述细胞包含编码工程化的TCR或CAR的病毒载体。39.如权利要求38所述的方法，其中所述载体是逆转录病毒载体。40.如权利要求39所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体。41.如权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述CAR包含a)胞外结构域，所述胞外结构域与选自以下的抗原结合：α叶酸受体、5T4、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD44v6、CD44v7...

【专利技术属性】
技术研发人员：凯文·弗里德曼，
申请(专利权)人：蓝鸟生物公司，
类型：发明
国别省市：美国,US