肽及其制备方法技术

下式的肽： Ｘ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｙ，其中 Ｘ是Ｈ或Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＮＶａｌ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｄ－Ａｌａ，Ｄ－Ｌｅｕ，Ｄ－Ｉｌｅ，Ｄ－Ｖａｌ，Ｄ－ＮＶａｌ，Ｄ－Ｐｒｏ，Ｄ－Ｔｙｒ，Ｄ－Ｐｈｅ，Ｄ－Ｔｒｐ， γ－氨基丁酸、ξ－氨基己酸； Ｙ是Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＮＶａｌ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｄ－Ａｌａ，Ｄ－Ｌｅｕ，Ｄ－Ｉｌｅ，Ｄ－Ｖａｌ，Ｄ－ＮＶａｌ，Ｄ－Ｐｒｏ，Ｄ－Ｔｙｒ，Ｄ－Ｐｈｅ，Ｄ－Ｔｒｐ，γ－氨基丁酸、ξ－氨基己酸、－ＯＨ、单或双取代的酰胺（Ｃ↓［１］－Ｃ↓［３］）。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学。更具体地说，本专利技术涉及制备有免疫调节性质的生物活性物质的方法，该专利技术可用于医学、兽医学及实验生物化学领域中。胸腺提取物在应用医学中广泛用作免疫调节剂，特别是胸腺素级分5(thymozin fraction5)/Goldstein A.L.，Guna A.，Latz M.M.，Hardy H.A.，White A./Thymolyn/CH.N 659586/。这些提取物由多肽培养物组成。生产的复杂性限制了从天然来源提取该提取物的得率。因此，产物不仅数量有限，而且物化、生物学性质不一致。在使用天然多肽的患者中观察到副作用。所以，显然需要合成法制备的肽。目前，可以得到合成法合成的肽，其具有免疫调节性质PCT WO 089/06134，EP N 230052，US N5008246，US N 5013723。必需成分中的每一种合成法制备的肽都是高活性、低毒性、没有副作用的，这些性质使之适合于医学应用。要提出的问题是分离有免疫调节性质的新的生物活性肽X-Glu-Trp-Y，其中X为H或Gly，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，DNVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸；Y是Gla，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，D-NVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸、-OH、单或双取代的酰胺(C1-C3)。本专利技术的目的是提供一种制备肽的新技术方法。该肽必须易于生产并具有高产率。新方法的本质在于新型肽的合成，肽的合成是在溶液中从分子的C末端开始进行链的连续增长，采用的方法是从氨基酸烷基醚开始的官能团最大封闭，使用对醚进行活化的方法和采用叔丁氧基羰基氨基酸的混合酐法。肽链列于下表，Rf1在(氯仿-甲醇-32％乙酸＝60∶45∶20)和Rf2在(丁醇-吡啶-水-乙酸＝5∶5∶4∶1)中。表1 续表1 </tables> </tables>所得到的上式的肽为白色粉末状，溶于水，不完全溶于乙醇，不溶于氯仿。用下列实施例阐述本专利技术。本实施例中，描述了制备式H-Ile-Glu-Trp-OH的肽的方法。1.制备Boc-Ile-OPFP将46.0g(0.2mol)Boc-Ile-OH和40.5g(0.22mol)五氟化酚在100ml乙酸乙酯中的混合物冷却至-5℃并加入45.3g(0.22mol)N，N-二环己基碳化二亚胺。然后在室温下搅拌混合物3小时，再滤出二环己基碳化二亚胺，真空下蒸发可溶物，将残留物在乙酸乙酯-己烷混合物中结晶。然后滤出残余物。产率为71.3g(90％)。2.制备Boc-Ile-Glu-Trp-OH将19.8g(0.05mol)Boc-Ile-OPFP溶于100ml二甲基甲酰胺中，并在搅拌下加入溶于水中的20g(0.06mol)Glu-Trp和5.0g(0.06mol)NaHCO3。室温下搅拌溶液20小时。真空下蒸发溶剂。搅拌下向残留物中加入200ml乙酸乙酯和200ml 2％硫酸。在硫酸中洗涤有机层(2×100ml)，用NaCl溶液调至pH＝7。然后用无水硫酸钠干燥。再于真空中脱除溶剂。将残留物于乙酸乙酯-己烷中结晶，通过滤残余物，并在真空中干燥。产物＝20.5g(75％)。3.制备H-Ile-Glu-Trp-OH将20.5g Boc-Ile-Glu-Trp-OH溶于150ml甲酸，45℃下搅拌3.5小时，并于真空下蒸发溶剂。向残留物中加入200ml水，重复进行真空下蒸发过程。向残留物中加入300ml异丙醇和200ml乙醚，使其固化10小时。过滤残留物并于真空下干燥。产率＝15.3g(75％)。用反相层析法在0.1％乙腈的三氟乙酸溶液中进行肽的纯化。产率＝13g(85％)。对该肽进行物化性质研究后，得到如下特征固有结构H-Ile-Glu-Trp-OH分子式 C24-H30-N4-O4分子量 BEC-446.5Da外观白色粉末，少许为黄色或灰色粉末溶解性 溶于水，不溶于氯仿。y.φ. 在250-300mm谱范围内有最大值280±2mm，287±2mm。针对豚鼠研究了该新型肽的生物活性，采用的是公认的试验方法。表2列出了本专利技术肽和已知制剂的比较数据，采用胰蛋白酶处理后制备的豚鼠淋巴细胞。表2量E-POK，(％) </tables>*每种浓度都对5只动物进行试验。与对照组E-POK相比，增长50％或更高。已证实，体外应用该肽比使用其它已知肽活性要高103倍。毒性试验按照药理学会PF的标准进行，参见“Guidelines for the preclinical study general toxic activity of new pharmacologicalcompounds”，M.，1985.实验结果表明，以1/1000剂量插入注射时，这种肽不显示任何毒性，而且没有检测到LD50。这种有生物活性的肽可用于医学和兽医学。权利要求1.下式的肽X-Glu-Trp-Y，其中X是H或Gly，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，D-NVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸；Y是Gly，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，D-NVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸、-OH、单或双取代的酰胺(C1-C3)。2.制备下式肽的方法X-Glu-Trp-Y，其中X是H或Gly，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，D-NVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸；Y是Gly，Ala，Leu，Ile，Val，NVal，Pro，Tyr，Phe，Trp，D-Ala，D-Leu，D-Ile，D-Val，D-NVal，D-Pro，D-Tyr，D-Phe，D-Trp，γ-氨基丁酸、ξ-氨基己酸、-OH、单或双取代的酰胺(C1-C3)。肽的合成是在溶液中从分子的C末端开始进行链的连续增长，采用的方法是从氨基酸烷基醚开始的官能团最大封闭，使用对醚进行活化的方法和采用叔丁氧羰基氨基酸的混合酐法，用甲酸处理，再用结晶法进一步纯化，得到式X-Glu-Trp-Y的产物，再用反相层析法对其进行提纯。全文摘要本专利技术涉及医学,具体涉及制备有免疫调节性质的生物活性物质的方法,可用于医学、兽医学及实验生化领域。本专利技术提出的首要问题是制备有免疫调节性质、并具有下式的新型、合成的生物活性肽:X－Glu－Trp－Y,其中X是H或Gly,Ala,Leu,Ile,Val,NVal,Pro,Tyr,Phe,Trp,D－Ala,D－Leu,D－Ile,D－Val,D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：V·I·捷依盖诺，A·M·戈拉塔高夫，
申请(专利权)人：依姆诺技术开发公司，
类型：发明
国别省市：