选自表１所示的肽类的一种肽，其盐类及其功能衍生物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,其组合物、制法及试剂盒的制作方法
本专利技术是关于一些新型肽类即人60KDa热激蛋白(hsp60)的表位(抗原决定簇)和包含用于诊断与治疗胰岛素依赖性糖尿病(IDD M)的一些医药组合物。专利技术背景1型糖尿病，或者IDDM，是一种由T细胞引起的自体免疫疾病，该T细胞攻击和消灭位于胰岛中产生胰岛素的β细胞(Castano和Eisen-barth，1990)。最终成为IDDM的自体免疫过程，开始和发展时没有症状。只有当β细胞累积损失超过残留β细胞供给胰岛素的能力(量)时，这种病才在临床上有所表现。的确，葡萄糖体内平衡稳定的破坏和临床IDDM，被认为仅在80-90％的β-细胞被免疫系统灭活后才发生。因此，被确诊患有IDDM的病人，必然处于其β细胞自体免疫破坏的晚期阶段。而且，初期的临床前糖尿病的诊断，只能在自体免疫过程开始之后通过检测β细胞自体免疫性的免疫学标示物而知。因而，医疗的探索是要找到一个安全的、专一的和有效的方法来关闭已经处于发展中的自体免疫过程。本专利技术的专利技术者们以前曾经考察了这一问题，是通过研究NOD(非肥胖型糖尿病)品系小鼠正在发展中的一些自发性糖尿病，NOD小鼠被认为是一种人IDDM的可信模型(Castano and Eisenbarth，1990)。NOD小鼠大约生长4周时产生了胰岛炎，它开始为一种轻微的胰岛周围浸润并发展成严重的胰岛内炎症。证实为胰岛素缺乏的高血糖症，在我们被试群体中约生长14-17周的雌鼠中，开始产生。在生长35-40周时，几乎所有的雌NOD小鼠都得了严重的糖尿病并在无胰岛素治疗的情况下大多数死亡。雄性NOD小鼠有较低的发病率，原因还不清楚。NOD小鼠的糖尿病已证明是由自体免疫T细胞引起(Bendelac et a1.，1978)。对各种抗原的T细胞的反应性和自体抗体，已经在人IDDM病人身上及NOD小鼠体内检测到(Elias，1994)，并且还不清楚是否对任何一个单一的靶抗原的免疫性为该病的主要原因。除了对病因的探讨之外就是对治疗方法的探讨。已经证明，初始NOD小鼠体内自体免疫过程能够得到预防，办法是将小鼠在产生糖尿病之前进行各种处理，诸如限制饮食，病毒感染，或者免疫系统的非特异性刺激(Bowman et al.，1994)。NOD糖尿病也可通过对抗原谷氨酸脱羧酶诱发前糖尿病小鼠的免疫耐受性而得到预防(Kaufman etal，1993；Tisch et al.，1993)。在NOD雌鼠体内自生发展的胰岛素依赖性糖尿病已证明与各种自身抗原免疫反应性有联系(Bach，1994)。在这些抗原中，明显的是来自哺乳动物60KDa热激蛋白(hsp60)分子序列的P277肽。这相当于人hsp60分子中的残基437-460(Elias et al.，1991，以色列专利申请号NO.94241，PCT专利申请公开WO90/10449)。这种人P277肽具有如下序列Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Ala-Leu-Leu-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp(a.a.437-460 of SEQ ID NO1)前糖尿病NOD小鼠显示出自生的致糖尿病T细胞应答，即对hsp60和对人(2)或鼠P277肽(3)一些变异体作出应答。小鼠和人的肽的区别在于1个氨基酸，这些肽是免疫学上交叉反应的(3)。小鼠的某些不易患糖尿病的品系，例如C57BL/6，当用共价共轭于一外来免疫原载体分子(4)上的P277进行免疫时，便会出现短暂的高血糖和胰岛炎。并且C57BL/KSJ品系的小鼠会产生对hsp60和对P277的自发T细胞应答，在用能诱发自体免疫糖尿病(5)的非常低剂量β-细胞毒素链脲菌素(STZ)处理之后。除涉及疾病的表现之外，肽P277还表现出在治愈自体免疫过程是有功能作用的皮下给药在不完全Freund佐剂(IFA；矿物油)中的P277，会导致阻止年青NOD小鼠(2)或有晚期胰岛炎的已生长12-17周NOD小鼠(6，7)的疾病发展。无论人(6，7)和小鼠(3)的P277的变异体，都是有效的。在MHC11类启动子上转入hsp60基因的NOD转基因小鼠，显示出向下调节它们的自发T-细胞增殖应答，并且大部分小鼠可避免产生糖尿病(8)。而且，对一些C57BL/KsJ小鼠施用P277，能够抑制自体免疫糖尿病的产生，在曾经接受早期很低STZ剂量的一些小鼠中；但用GAD65分子肽治疗小鼠是无效的(9)。P277肽的一些变异体，其中有一个或两个半胱氨酸残基在位6和11上被缬氨酸残基代替，被分别定名为P277(val6)，P277(Val11)和P277(val6-val11)，这已描述于相应的以色列专利申请NO.112094，并显示出在治疗糖尿病方面活性如同P277。本专利技术的目的是提供另外一些人hsp60肽类，这些肽类将有效地用于诊断和治疗IDDM。专利技术概述在研究人hsp60分子的一些片段和肽类过程中，料想不到地发现一些IDDM病人和NOD小鼠会对另外一些hsp60 T细胞抗原决定簇有应答，后者可用于IDDM的诊断和治疗。这些表位(抗原决定簇)本身或与P277或P277变异体相结合，这些变异体是选自P277(val6)，P277(val11)和P277(val6-val11)，可以改善治疗的有效性。这些新肽类示于表1表1.Hsp 60合成肽类及其序列肽类 SEQ ID NO1中的残基序号氨基酸序列(一字编码)p3 31-50 KFGADARALMLQGVDLLADAp10136-155 NPVEIRRGVILAVDAVIAELp11151-170 VIAELKKQSKPVTTPEEIAQp12166-185 EEIAQVATISANGDKEIGNIp14195-214 RKGVITVKDGKTLNDELEIIp18255-274 QSIVPALEIANAHRKPLVIIAp20286-305 LVLNRLKVGLQVVAVKAPGFp24346-365 GEVIVTKDDAMLLKGKGDKAp29421-440 VTDALNATRAAVEEGIVLGGp30436-455 IVLGGGCALLRCIPALDSLTp32466-485 EIIKRTLKIPAMTIAKNAGVp35511-530 VNMVEKGIIDPTKVVRTALLp39343-366 GKVGEVIVTKDDAM另外一些hsp60肽类，包括定名为P278(相当于在人hsp60序列中的458-474位)，P19(相当于在人hsp60序列中的271-290位)以及P21(相当于在人hsp60序列中的301-320位)，已证明是无效的。已发现，P278的氨基末端与有效P277肽有三个残基(NOD)的重迭及P278的羧基末端与有效P32肽由有9个残基(EIIKRTLKI)的重迭。因而P32的其余11个残基(PAMTIAKNAGV)是关键性的。因而本专利技术涉及示于表1中的肽类，及其盐类和功能衍生物。本专利技术进一步的目的是提供一些方法和试剂盒，用本专利技术的肽类进行早期诊断IDDM。在IDDM产生过程中，动物会表达hsp60分子，或者一些与其本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：伊伦·R·科恩，戴娜·埃利亚斯，里夫卡·阿布拉菲亚，亚娜·博茨科娃，
申请(专利权)人：耶达研究与发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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